81份金蕎麥收集系表兒茶素含量的分析評價※

●張 蓉 陳光吉，2 尚以順※※ 李世歌 龍忠富 房春林 楊海涵

（1.貴州省農(nóng)業(yè)科學院草業(yè)研究所 貴州 貴陽 550006；2.貴州陽光草業(yè)科技有限責任公司 貴州 獨山 558200；3.成都乾坤動物藥業(yè)股份有限公司 四川 成都 611100）

表兒茶素（Epicatechin，EC）是一種天然植物黃烷醇化合物，易溶于水、甲醇，其多羥基的分子結(jié)構(gòu)特點使其具有抗炎、抗氧化、清除自由基等生物活性，普遍存在于葡萄、藍莓、綠茶、可可等植物中，同時，當不同的表兒茶素縮合成原花青素，具有較強的抗氧化性，且未發(fā)現(xiàn)副作用，是一種重要的天然活性植物源成分。在醫(yī)藥學研究中，從植物中提取的EC主要集中于腸道炎癥、抗心血管、糖尿病以及肌肉衰老、萎縮等相關疾病防治的研究和應用。研究表明，EC可調(diào)控硫酸葡聚糖誘導的極性潰瘍性結(jié)腸炎，還可通過增強線粒體生物合成和減少肌肉生長抑制素提高成人貝克肌營養(yǎng)不良骨骼肌運動性能，對氧化應激損傷和缺血性損傷有一定保護作用。在畜牧獸醫(yī)領域，有報道指出EC可用于防治奶牛乳腺炎以及改善冷凍-解凍后豬精子質(zhì)量[1]。

本研究以81份貴州不同地區(qū)金蕎麥收集系以及國審草品種“黔中金蕎麥（登記號581）”的根、莖、葉為研究材料，分析評價其EC含量，為進一步挖掘金蕎麥的飼用價值提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

81份金蕎麥收集系樣品采集于貴州農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所麥坪基地，采樣時間為2021年8月。各收集系來源于6個地級市（州）、16個縣域（表1），其中貴陽花溪采集的資源為國審牧草品種“黔中金蕎麥”。

表1 供試金蕎麥產(chǎn)地

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品采集與制備連根整株采集健康生長2年，植株高度（1.2 m）、葉量、莖干粗細基本均一的金蕎麥，用自來水將根清洗干凈，無損收集莖和葉，按照不同縣域分別編號81份根、莖、葉。直接放入鼓風75℃干燥箱中殺青3 h，再在65℃條件下烘干48 h，然后粉碎過20目篩后，裝入密封袋保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 表兒茶素含量測定EC的測定方法在參照《中國獸藥典》描述方法的基礎上根據(jù)實際情況略作調(diào)整。

1.2.2.1 對照品制備精密稱定適量EC標準品（中國食品藥品檢定研究院 110878—201703 ID：F92N-G4QE），加流動相制成每 1 mL 含 25 μg EC的溶液。

1.2.2.2 金蕎麥提取液制備精密稱定2 g金蕎麥根、莖、葉粗粉，置于具塞錐形瓶中，精確加入稀乙醇50 mL，密塞后稱定，放置1 h，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，減壓濃縮（50～70℃）至近干，殘渣加乙腈-水（10∶90）混合溶液分次洗滌，洗液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（10∶90）混合溶液至刻度，搖勻，3000 r / min 離心5min，精密量取上清液5 mL，加于聚酰胺柱（30～60目，內(nèi)徑為1 cm，柱長為15 cm，濕法裝柱）上，以水50 mL洗脫，棄去水液，再用乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮（50～70℃）至近干，殘渣用乙腈-水（10∶90）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（10∶90）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.2.2.3 上機測定分別吸取標準品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

1.2.2.4 色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.004%磷酸溶液（10∶90）為流動相；檢測波長為280 nm。理論板數(shù)按表兒茶素峰計算應不低于6000，檢測精度：EC含量不得少于 0.30 mg/g。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用 Excel整 理 數(shù) 據(jù)， 采 用 SPSS 18.0軟 件的“分析-描述性統(tǒng)計”進行正態(tài)分布檢驗，再用“一般線性模型（GLM）”程序，分別以地域（市州）和金蕎麥部位為主效應進行方差分析，用Duncan法進行多重比較，P＜0.05表示差異顯著，結(jié)果用平均值表示，各處理變異程度用標準誤差表示（SEM）。

2 結(jié)果與分析

2.1 金蕎麥根、莖、葉中EC含量的正態(tài)分布檢驗

由圖1和圖2可知，81份金蕎麥莖、葉的EC含量呈近似正態(tài)分布，莖中頻率分布較高的含量值為 0.19，0.22 mg/g，均為 12份，有 9 份材料高于0.30 mg/g ；各收集系葉中EC含量均低于 0.30 mg/g ，頻率較高的 EC 含量分別為 0.08，0.09，0.12，0.13 mg / g；根中頻率分布較高的含量為 0.6 mg / g，達 15 份材料，有 43 份材料的根中 EC 含量大于 0.6 mg / g。

圖1 81份金蕎麥收集系莖中EC含量的頻率分布

圖2 81份金蕎麥收集系葉中EC含量的頻率分布

圖3 81份金蕎麥收集系根中EC含量的頻率分布

2.2 貴州各地區(qū)金蕎麥表兒茶素含量比較

由表2可知，貴州省6個地級市（州）中金蕎麥根、莖和葉的EC含量差異顯著（P＜0.05）。其中，根的EC含量以銅仁市最高，為0.98 mg/g（P＜0.05），莖和葉中EC含量均以銅仁市和貴陽市較高（P＜0.05）。

表2 貴州各地區(qū)金蕎麥表兒茶素含量比較

3 結(jié)論

貴州省6個地州市金蕎麥收集系的表兒茶素含量存在較大差異，最高為銅仁市，其次為貴陽市；金蕎麥不同部位表兒茶素含量從大到小依次為根（0.69 mg/g）、莖（0.20 mg/g）、葉（0.12 mg/g）；金蕎麥地面以上植株部分不適于藥用，但在飼用上有較好前景。

4 討論

金蕎麥作為藥飼兼用植物資源，需要利用現(xiàn)代檢測技術(shù)手段探明活性成分以指導應用，同時也是資源育種研究的重要依據(jù)。研究認為，金蕎麥塊根中含有豐富的黃酮、EC、原兒茶酸等活性組分，在傳統(tǒng)醫(yī)藥中應用廣泛，并被開發(fā)成口服液、藥片等藥劑[2]，可治療多種疾病，但莖葉的研究和應用尚不成熟。本研究重點關注金蕎麥的EC含量，挖掘其飼用價值。結(jié)果表明，在相同栽培條件下不同來源的金蕎麥EC含量差異較大，這可能與不同收集系基因型差異有關，而根、莖、葉的EC含量均呈近似正態(tài)分布，表明金蕎麥植株中的EC含量符合諸多自然變量的分布規(guī)律，數(shù)據(jù)具有較高可信度。

此外，本研究涉及的國審牧草品種“黔中金蕎麥”的整株EC含量高于除銅仁市外的其他地區(qū)品種，進一步說明本品種具有較高應用價值，同時本研究對“黔中金蕎麥”的基礎評價數(shù)據(jù)是一種藥物成分的補充。本研究中銅仁地區(qū)的金蕎麥收集系的根、莖、葉中EC含量最高，提示可進一步開展農(nóng)藝性狀、生物產(chǎn)量、遺傳穩(wěn)定性等特征方面的研究，拓展育種方向，挖掘地方資源。

金蕎麥的活性成分研究中，黃酮類物質(zhì)報道較多。有研究表明，金蕎麥的花、莖、葉、籽粒、根等部位均含有較豐富的黃酮類物質(zhì)，且莖葉的總黃酮含量高于塊根，而在貴州大部分地區(qū)金蕎麥的莖葉生長迅速、產(chǎn)量較高（干草產(chǎn)量達15 762 kg/hm2），作為飼料資源具有較好開發(fā)前景。本研究結(jié)果顯示，81份金蕎麥收集系塊根的EC 含量為 0.60～0.98 mg/g，莖為 0.14～0.29 mg/g，葉為 0.09～0.19 mg/g，其中塊根的 EC 含量與阮洪生等[3]的研究結(jié)果基本吻合（均值 0.8 mg/g），高于《中國獸藥典》規(guī)定的0.3 mg/g的最低限量，適用于藥物開發(fā)，而莖、葉的EC則低于限量，提示金蕎麥地面以上植株部分不適于藥用（不符合藥材制作基本標準），這為莖、葉飼用的開發(fā)方向提供依據(jù)。