一例鴨疫里默氏桿菌病的診斷與防治

白紅英，劉洋洋，曹嫚嫚

廣東茂名農(nóng)林科技職業(yè)學(xué)院，廣東茂名 525000

鴨疫里默氏桿菌病是一種對(duì)雛鴨、雛鵝等家禽具有較強(qiáng)傳染性和危害性的細(xì)菌類疾病，能夠?qū)е赂腥炯仪莩霈F(xiàn)氣囊炎、心包炎、肝周炎等典型病變，嚴(yán)重影響患病家禽的生長(zhǎng)發(fā)育并具有致死性。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，鴨疫里默氏桿菌具有多達(dá)21種，并且不同血清型的菌株之間缺乏交叉免疫防護(hù)效果，另外，與其他病原菌的繼發(fā)和并發(fā)感染頻出。因此養(yǎng)殖人員面臨著該病防治困難的問(wèn)題，所以選擇合理的防治和用藥顯得至關(guān)重要。

1 鴨疫里默氏桿菌病案例分析

1.1 養(yǎng)殖場(chǎng)雛鴨發(fā)病概況

某飼養(yǎng)場(chǎng)養(yǎng)殖的1 800只雛鴨在16日齡時(shí)突發(fā)疫病，在3日內(nèi)累計(jì)死亡雛鴨125只。發(fā)病的雛鴨在食量方面顯著降低，約450只雛鴨具有站立困難、雙腳軟弱無(wú)力、嗜睡、精神萎靡等病癥，眼睛、鼻子等部位多見(jiàn)黏液流出，糞便稀疏呈綠色與黃白色，部分雛鴨在瀕死狀態(tài)時(shí)展現(xiàn)出較為直觀的神經(jīng)病癥，最終抽搐死亡。

1.2 死亡雛鴨病理分析

通過(guò)對(duì)10只病死的雛鴨進(jìn)行解剖病理分析發(fā)現(xiàn)，病鴨漿膜處存在廣泛的纖維素性滲出，肝臟部位存在易剝離的灰白色偽膜，內(nèi)部具有棕紅色、土黃色等多種顏色；胸壁明顯滲出淡黃色膠樣物質(zhì)；膽囊內(nèi)部膽汁充盈腫大；心臟心包積液增加，心包膜表面附著灰白、黃色等多種顏色的滲出物，心外膜滲出纖維素性物質(zhì)；肺部發(fā)炎水腫；腎臟充血。部分病死雛鴨存在跗關(guān)節(jié)腫脹、腦膜炎等問(wèn)題。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷分析方法

2.1 診斷對(duì)象及材料應(yīng)用情況

為分析雛鴨感染病菌類型，選擇6只病鴨抽取肝臟組織以及心包積液用于檢測(cè)。檢測(cè)期間需應(yīng)用的材料包括：PCR試劑、標(biāo)準(zhǔn)型DNA Marker（DL2000）、細(xì)菌基因組提取試劑盒、自制巧克力細(xì)菌培養(yǎng)基、核酸染料、TSA培養(yǎng)基、TSB培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、革蘭氏染液、瑞氏染液、微量生化鑒定管、新生牛血清、藥敏紙片、瓊脂糖、綿羊全血（無(wú)菌脫纖維）。

2.2 細(xì)菌鑒定診斷方法

2.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)方法

利用自制的巧克力培養(yǎng)基接種采集自病鴨的肝臟組織以及心包液，培養(yǎng)環(huán)境為37 ℃恒溫，內(nèi)部二氧化碳比例為5%，24 h后對(duì)菌落生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察記錄。在無(wú)菌條件下進(jìn)行單個(gè)菌落的選取工作，并以37 ℃恒溫環(huán)境分別在麥康凱、巧克力培養(yǎng)基中培養(yǎng)12～24 h。將單個(gè)菌落從純化后的菌落中選出，于TSB培養(yǎng)基中以37 ℃恒溫培養(yǎng)12～24 h，培養(yǎng)基中需添加5%比例的牛血清。培養(yǎng)完成后，通過(guò)革蘭氏染色鏡檢對(duì)培養(yǎng)的純培養(yǎng)物的染色特性和形態(tài)進(jìn)行觀察分析。

2.2.2 利用生化試劑檢測(cè)鑒定

參考RA鑒定圖譜選取分離菌，在各類微量生化管（尿素、乳糖、賴氨酸等）中接種純培養(yǎng)物，在37 ℃恒溫環(huán)境中進(jìn)行1～2d的培養(yǎng)，需將環(huán)境內(nèi)二氧化碳濃度控制在5%，培養(yǎng)完畢后對(duì)反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行觀察記錄。

2.2.3 利用PCR試劑檢測(cè)鑒定

在無(wú)菌條件下選擇2 mL分離菌的純培養(yǎng)物，按照標(biāo)準(zhǔn)開(kāi)展細(xì)菌DNA提取工作，結(jié)合RA細(xì)菌外膜蛋白A對(duì)特異性引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，并利用PCR試劑基于分離菌總DNA進(jìn)行擴(kuò)增，具體操作過(guò)程中需遵循25 μL體系，依次進(jìn)行預(yù)變性處理、變性處理、退火處理、延伸處理，時(shí)間分別為3 min、45 s、45 s、45 s，溫度分別為95、95、54、72 ℃，進(jìn)行30次循環(huán)后開(kāi)展10 min 72 ℃的延伸處理工作。利用1.2%瓊脂糖凝膠對(duì)擴(kuò)增后的DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，并由第三方開(kāi)展PCR基因測(cè)序工作。

2.3 藥敏試驗(yàn)

利用材料中的藥敏紙片開(kāi)展藥敏試驗(yàn)。在實(shí)際操作時(shí)，需在TSB培養(yǎng)基中接種單個(gè)純培養(yǎng)菌落，培養(yǎng)基需添加5%的牛血清，在37 ℃恒溫振蕩箱中培養(yǎng)，在180 r/min的振動(dòng)箱轉(zhuǎn)速中進(jìn)行16 h培養(yǎng)工作。選取100 μL菌液在巧克力培養(yǎng)基中涂抹，當(dāng)菌液干燥后將藥敏紙片粘貼在培養(yǎng)基上，期間需用無(wú)菌鑷子操作，在37 ℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行1～2d的培養(yǎng)，箱內(nèi)二氧化碳濃度需控制在5%，培養(yǎng)結(jié)束后對(duì)抑菌圈直徑進(jìn)行測(cè)量，根據(jù)直徑數(shù)據(jù)對(duì)藥敏性進(jìn)行判定。

3 診斷結(jié)果與防治方法

3.1 鑒定結(jié)果分析

生化測(cè)試結(jié)果表明，分離菌無(wú)法將蔗糖、乳糖等發(fā)酵，不會(huì)將賴氨酸等水解，對(duì)硝酸鹽還原、苯丙氨酸、硫化氫等檢測(cè)結(jié)果為陰性，對(duì)氧化酶、過(guò)氧化氫酶、尿素等檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，各種試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與RA特征一致。

根據(jù)PCR擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果得出，分離菌如預(yù)期一般具有663 bp的單一條帶，通過(guò)基因測(cè)序比對(duì)確認(rèn)，檢測(cè)結(jié)果與已公布的RA細(xì)菌外膜蛋白A完全同源，確認(rèn)病鴨所感染的細(xì)菌類型為RA。

3.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析

為分析病鴨所感染RA對(duì)各類抗生素的敏感性，對(duì)常用的16種抗生素進(jìn)行藥敏試驗(yàn)得到結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，病鴨感染的RA對(duì)新霉素、卡那霉素以及哌拉西林三類抗生素具有較強(qiáng)的敏感性，等級(jí)為S；對(duì)青霉素、氟苯尼考、羧芐西林以及頭孢他定敏感性極低，在防治RA的過(guò)程中可以應(yīng)用敏感性較高的卡那霉素、新霉素等抗生素開(kāi)展治療工作。

表1 分離菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3.3 疾病防治方法

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以確認(rèn)，病鴨的治療可以借助抗生素卡那霉素進(jìn)行，由于大多數(shù)病鴨在飲水量、采食量方面受到較大影響，精神狀況不佳，故選擇肌肉注射的方式使用抗生素，鴨肌肉注射硫酸卡那霉素注射液30～40 mg/kg。如果病鴨的病情極為嚴(yán)重，則可以增加用藥頻次，選擇在注射抗生素1d后再次注射。注射完成后，養(yǎng)殖人員可以按照0.15g/kg的比例在水中添加20%的該類抗生素藥粉，同時(shí)將鴨益康作為輔助抗生素混合其中，作為飲用水供給病鴨使用5d。結(jié)果表明，注射藥液后，病鴨死亡率大幅度降低，身體條件得到改善，服用藥水5d后，無(wú)病鴨死亡情況，病鴨幾乎全部恢復(fù)正常。

4 鴨疫里默氏桿菌病應(yīng)對(duì)措施

4.1 定期接種疫苗

為了實(shí)現(xiàn)對(duì)鴨疫里默氏桿菌病的有效應(yīng)對(duì)，養(yǎng)殖人員可以采取定期接種的方式提升所養(yǎng)殖鴨、鵝等家禽的抗病能力。當(dāng)種鴨接種疫苗后，雛鴨將會(huì)在更高母源抗體滴度的作用下得到更長(zhǎng)久的保護(hù)，種鴨自身病菌攜帶量也會(huì)隨之降低，避免產(chǎn)生垂直傳播等問(wèn)題，在保健藥物的共同作用下，能夠進(jìn)一步強(qiáng)化自身的抵抗能力，下面對(duì)各種疫苗進(jìn)行詳細(xì)論述。

滅活疫苗根據(jù)有無(wú)佐劑可以區(qū)分為兩類，相關(guān)研究表明，疫苗添加油乳劑能夠起到良好的保護(hù)效果，但容易因?yàn)榻臃N對(duì)動(dòng)物造成局部傷害；油佐劑相對(duì)甲醛滅活疫苗具有較高的免疫效果，抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)指出，10日齡接種疫苗能夠具有更高的免疫效果，而且免疫次數(shù)應(yīng)為2次。

4.2 日常預(yù)防措施

養(yǎng)殖人員需要重視日常管理對(duì)防治鴨疫里默氏桿菌病的積極作用，在規(guī)?；B(yǎng)殖期間，積極采取全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式。在飼料方面需要結(jié)合雛鴨等動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求做好飼料配比工作，合理利用礦物質(zhì)、維生素等增強(qiáng)動(dòng)物自身免疫力。同時(shí)，養(yǎng)殖人員也需要做好環(huán)境消毒處理與相關(guān)隔離措施，避免污染的水源、飼料等因素造成鴨的感染而發(fā)病。

4.3 疫病發(fā)生時(shí)的措施

當(dāng)發(fā)生鴨疫里默氏桿菌病時(shí)，養(yǎng)殖人員需要做好病死雛鴨等動(dòng)物殘留物的無(wú)害化處理工作，加強(qiáng)對(duì)病鴨所處環(huán)境的消毒處理力度，做好健康雛鴨與病鴨的隔離，及時(shí)開(kāi)展細(xì)菌藥敏試驗(yàn)并根據(jù)藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果，選擇合適藥物，實(shí)現(xiàn)對(duì)病鴨等患病動(dòng)物的快速治療。

5 結(jié)語(yǔ)

本文通過(guò)病鴨剖解的方式對(duì)病鴨病理狀況進(jìn)行了觀察分析，將病鴨心包液、肝臟等作為材料進(jìn)行了生化鑒定與PCR檢測(cè)，確認(rèn)病鴨所感染病菌為RA，通過(guò)藥敏試驗(yàn)的方式確定了RA各類抗生素的敏感性，最終選擇利用卡那霉素抗生素完成了對(duì)病鴨的治療。鴨、鵝等動(dòng)物養(yǎng)殖人員需要充分認(rèn)識(shí)到RA病菌對(duì)雛鴨、雛鵝等動(dòng)物的危害性，一方面采取注射疫苗、日常防控管理等措施降低發(fā)病概率，另一方面也需要掌握發(fā)病時(shí)的隔離、消毒以及治療措施，實(shí)現(xiàn)對(duì)RA病菌的有效防治。