對微生物污染引起的食物中毒檢驗(yàn)檢測分析①

何 艷

(贛州市章貢區(qū)疾病預(yù)防控制中心,江西 贛州 341000)

近年來，食物中毒事件的發(fā)生率逐漸提升，主要是受微生物污染所影響。當(dāng)人們使用含有生物性或化學(xué)性有毒有害食品后，將會引發(fā)一種非傳染性急性感染或中毒等特征的疾病，臨床表現(xiàn)為潛伏期短、起病急、患者集中等[1]。通常情況下，微生物性食物中毒會給患者的健康產(chǎn)生較大的危害，而且微生物污染致使食物中毒的原因較為復(fù)雜，當(dāng)前在臨床上尚未形成完整的食物中毒微生物學(xué)檢測系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致難以在最短時(shí)間內(nèi)，以最快的速度、準(zhǔn)確開展病原學(xué)檢測[2]。因此相關(guān)衛(wèi)生檢驗(yàn)人員應(yīng)當(dāng)積極做好微生物污染引起的食物中毒檢驗(yàn)檢測。在實(shí)踐中結(jié)合各類食物中毒流行特征以及患者的臨床癥狀表現(xiàn)，研究檢測方法的具體實(shí)施。目前對于患者病原菌的檢測，主要采用染色鏡檢查方式，通過尋找優(yōu)勢菌群并接種到選擇性培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)后進(jìn)行檢出，可提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。但同時(shí)該檢驗(yàn)方法也存在一定不足，如檢測時(shí)間耗費(fèi)較長、人工消耗量較大等。所以應(yīng)當(dāng)針對食源性微生物檢測進(jìn)行深入探究，結(jié)合傳統(tǒng)檢測技術(shù)，明確未來發(fā)展方向。有利于更好地應(yīng)對微生物污染的食物中毒檢測工作需求，進(jìn)而為食品安全控制、臨床患者診斷治療等提供良好基礎(chǔ)。本文選取60例微生物污染引起的食物中毒患者開展檢驗(yàn)檢測分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2020-04～2021-04，研究對象選取為微生物污染引發(fā)的食物中毒患者60例。其中男32例，女28例，年齡21～64歲，平均(42.67±11.24)歲。對患者糞便、嘔吐物、血清以及殘余食物等作為檢測樣本，開展微生物培養(yǎng)及檢測并有效分析結(jié)果。

1.2 方法

首先，進(jìn)行檢測樣本處理。利用采集容器對樣本實(shí)施滅菌處理，嚴(yán)格按照食物中毒樣本采集規(guī)范方法開展現(xiàn)場采樣。取適量樣品在適宜溫度和pH值環(huán)境下培養(yǎng)8～18h，移取1mL樣品混合物接種到10mL選擇性增菌液內(nèi)，在溫度條件42℃左右培養(yǎng)18～24h。再接種到選擇性平板上，當(dāng)生長出菌落后觀察其特征。

當(dāng)菌落呈現(xiàn)黑色且伴有金屬光澤、灰色、棕褐色或是菌落周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)黑色和棕色、或是部分菌落呈現(xiàn)灰綠色，而且周圍培養(yǎng)基不變時(shí)，判定疑似菌為沙門氏菌。金黃色葡萄球菌的典型菌落特征為圓形、表面凸起、濕潤光滑、菌落顏色呈灰黑色、黑色，有光澤，周邊菌落有淺色。副溶血性弧菌特性菌落為棒狀、弧狀和卵圓狀等，呈隆起狀態(tài)、濕潤，菌落顏色以灰白色、綠色等為主。致瀉性大腸埃希菌的典型特征為扁平狀，顏色為粉紅色或紅色，有金屬光澤，周圍無色。變形桿菌在培養(yǎng)基上表現(xiàn)為無色透明，部分蔓延生長。平板上可形成單個(gè)菌落，邊緣部位以擴(kuò)散狀形式，有黏性和臭味。志賀菌在平板上的特征為圓形、微凸、光滑濕潤、邊緣整齊、無色半透明等。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察患者檢測結(jié)果中的病原菌檢出率情況，檢出率越高，表示檢測效果則越好。并統(tǒng)計(jì)每種菌類的檢出株數(shù)及概率，確定食物中毒患者的主要致病菌和樣本檢測方法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 患者病原菌檢出率情況

經(jīng)檢驗(yàn)檢測后，對60例食物中毒患者檢出病原菌58起，檢出率達(dá)96.67%，見表1。通過觀察檢出的病原菌種類，包括沙門菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、致瀉性大腸埃希菌、變形桿菌及志賀菌等，共計(jì)637株。

表1 患者病原菌檢出率結(jié)果(%，起)

2.2 患者病原菌株數(shù)量及檢出率情況

對60例食物中毒患者檢出的病原菌種類，包括沙門菌、致瀉性大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、變形桿菌及志賀菌等，共計(jì)637株，其中，糞便檢出率最高，為56.57%，其次為肛拭子48.60%、嘔吐物15.58%、殘余食品4.43%。并且檢出病原菌中，沙門菌檢出率最高為20.72%、其次是金黃色葡萄球菌3.61%、副溶血性弧菌及致瀉性大腸埃希菌各占3.92%，變形桿菌最低為2.04%,見表2。

表2 患者病原菌檢出菌株結(jié)果(例)

3 討論

微生物污染所引起的食物中毒是指經(jīng)過食物傳播，引起人或動(dòng)物疾病的癥狀，當(dāng)食品原料在加工、儲藏以及銷售過程中被有害微生物污染，且被人誤食后，可引發(fā)不同程度的中毒表現(xiàn)，常見有急性腹痛、惡心嘔吐、腹瀉等，潛伏期一般在1～48h，無直接傳染性[3]。而導(dǎo)致微生物中毒的原因則是細(xì)菌、真菌以及病毒等，以細(xì)菌性食物中毒占多數(shù)，同時(shí)以副溶血性弧菌引發(fā)中毒最為多見。對人體健康產(chǎn)生較大的危害，嚴(yán)重情況可能危及生命安全。且近年來臨床接收的食物中毒患者中，因微生物污染所引起的病因越來越多[4,5]。為準(zhǔn)確檢驗(yàn)檢測病原菌，確定食物中毒種類，及早采取治療手段，則需要充分加強(qiáng)病原菌的檢驗(yàn)檢測工作，保證檢驗(yàn)速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，從而有效提升臨床治療效果和效率。

對于微生物污染引起的食物中毒檢驗(yàn)檢測，可采用多種方法。比如傳統(tǒng)檢測方式中的瓊脂平板培養(yǎng)法，其是按照培養(yǎng)基的不同，采用選擇性培養(yǎng)基檢測、顯色培養(yǎng)基檢測等。前者是指在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)?shù)倪x擇性抑制劑，對非目標(biāo)微生物的生長進(jìn)行抑制。而后者則是在培養(yǎng)基中加入細(xì)菌特異性酶的顯色底物，能夠通過菌落顏色的染色情況判斷菌落[6,7]。另外也可采用微生物測試片檢測方法，利用印有網(wǎng)格的聚丙烯薄膜、覆蓋有培養(yǎng)基以及顯色物質(zhì)的聚乙烯薄膜等，在采集樣本經(jīng)過處理后，可直接將其接種在測試片上，并放置在與人體溫度相近的恒溫環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)固定在測試片上的顯色物質(zhì)與待測微生物生長產(chǎn)生的特異性酶，產(chǎn)生顯色反應(yīng)后則會生成相應(yīng)顏色的菌落。再由檢測人員對菌落開展計(jì)數(shù)，則完成檢測。該方法具有操作簡便、容易判讀以及可直觀計(jì)數(shù)等優(yōu)勢，并且商品化程度高，在一定程度上可避免出現(xiàn)人為因素誤差。另外一種傳統(tǒng)檢測方法，即是本文選用的鏡檢法，其是將待測樣品中的微生物進(jìn)行富集處理后，可在染色鏡下直接進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。通常情況下，鏡檢法需要結(jié)合瓊脂平板培養(yǎng)法，對菌落實(shí)施定性分析后再使用染色鏡進(jìn)行定量計(jì)數(shù)。該方法具有對設(shè)備要求不高、技術(shù)含量低等優(yōu)勢特點(diǎn)，操作過程簡便[8]。但也具有時(shí)間長、人工消耗量大等缺陷。不過其在檢驗(yàn)檢測中可按照實(shí)際情況合理選擇檢測方法，不限于選擇形式，因此在當(dāng)前復(fù)雜的微生物污染引起的食物中毒檢測中，因檢測準(zhǔn)確度較高，仍作為臨床食物中毒檢測環(huán)節(jié)的重要應(yīng)用技術(shù)。在未來階段需針對其劣勢進(jìn)行改進(jìn)，以此加快檢測效率和質(zhì)量。

在本次研究實(shí)驗(yàn)中，主要是應(yīng)用鏡檢法，對微生物污染引起的食物中毒患者開展檢驗(yàn)檢測。通過采集患者的嘔吐物、參與食物、糞便以及肛拭子等實(shí)施微生物檢驗(yàn)。通過研究可總結(jié)微生物檢驗(yàn)結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性與樣本采集質(zhì)量存在直接關(guān)系，如在現(xiàn)場采集中保障取樣準(zhǔn)確、無污染影響，則能夠提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確性。針對60例患者開展病原菌檢測，檢出率可達(dá)96.67%，共檢出58例患者。同時(shí)對病原菌計(jì)數(shù)觀察，共檢出637株，包括沙門菌、致瀉性大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、變形桿菌及志賀菌等，并對檢測樣本以及各病原菌株數(shù)的檢出率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果顯示糞便檢出率最高，為56.57%，其次為肛拭子48.60%、嘔吐物15.58%、殘余食品4.43%。并且檢出病原菌中，沙門菌檢出率最高為20.72%、其次是金黃色葡萄球菌3.61%、副溶血性弧菌及致瀉性大腸埃希菌各占3.92%，變形桿菌最低為2.04%。由此可發(fā)現(xiàn)微生物污染引發(fā)的病原菌種類較多，各類樣本中均有細(xì)菌存在。采用涂片染色鏡檢查法具較高的適應(yīng)性，而且檢出率較高，作用較為明顯。

在未來階段中，人們生活水平日益提升，在食品種類不斷增多且商品流動(dòng)性加強(qiáng)的背景下，如采用鏡檢法無法充分滿足食物中毒檢測需求，因此需要進(jìn)一步充實(shí)其他檢測手段，進(jìn)一步加強(qiáng)微生物性食品中毒檢驗(yàn)，以此為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。如在傳統(tǒng)檢測技術(shù)基礎(chǔ)上，相關(guān)檢驗(yàn)人員還需注重對新方法的應(yīng)用。比如分子生物學(xué)檢測方法，可有效應(yīng)對突發(fā)感染性以及傳染性疾病，即是利用PCR基因分型技術(shù)，可為食源性病原微生物檢測提供有效手段，有助于避免出現(xiàn)交叉污染而對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。除此，PCR基因分型技術(shù)還能夠深入研究細(xì)菌種系的發(fā)生特征，提高微生物病原檢測水平。

綜上所述，微生物污染引起的食物中毒對人體健康會產(chǎn)生一定危害，因此需要加強(qiáng)對食源性病原體的檢驗(yàn)檢測。目前主要采用鏡檢法，其具有相對較高的檢測準(zhǔn)確率，應(yīng)用范圍較為廣泛。但未來微生物性食物中毒的病因日益復(fù)雜，為縮短檢測時(shí)間、簡化操作過程，則應(yīng)當(dāng)在傳統(tǒng)檢測技術(shù)基礎(chǔ)上，合理應(yīng)用現(xiàn)代化檢測方法，以此提高微生物污染引起的食物中毒檢測效率和質(zhì)量，有效保證食品安全。