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    山西兩種優(yōu)質小米的營養(yǎng)成分分析★

    2023-01-28 07:50:42郭艷萍穆榮榮周雨軒李英府王陳列
    山西化工 2022年8期
    關鍵詞:陽曲縣緩沖溶液緩沖液

    郭艷萍,穆榮榮,周雨軒,李英府,王陳列

    (太原工業(yè)學院環(huán)境與安全工程系,山西 太原 030008)

    引言

    小米是山西的優(yōu)勢小雜糧種質資源,特別被稱為“小米之王”的沁州黃小米[1],具有很高的營養(yǎng)價值。陽曲縣小米是太原優(yōu)勢地方小米種質資源,口感軟糯,適于蒸煮。兩種小米營養(yǎng)豐富,糖類、脂肪、蛋白質含量高且含有許多種類的維生素以及人體必須的鈣、磷、鐵等營養(yǎng)物質[2]。截至目前,關于小米種質資源的發(fā)掘利用研究,國內外相關研究者主要開展了小米種質的栽培性狀、農藝性狀、籽粒品質性狀和抗性性狀等的評價利用工作,而在小米種質資源種子成分的生化性狀和營養(yǎng)性狀的多樣性方面的研究報道相對較少。

    根據(jù)研究人員對小米的營養(yǎng)價值進行了深入的研究結果表明,蛋白質的含量是小米營養(yǎng)品質的重要影響因素之一,不同小米品種間的蛋白質含量存在顯著差異[3]。本研究采用超聲輔助方式提取山西兩種優(yōu)質小米沁州黃小米、陽曲縣小米的全蛋白,研究兩種小米在不同料液比、緩沖液pH 值以及提取時間下全蛋白提取效果的影響,并利用正交分析篩選出小米全蛋白的最優(yōu)提取方案。利用SDS-PAGE 電泳分析來表征兩種小米之間的蛋白質含量差異。同時,比較兩種小米的營養(yǎng)成分含量對其品質作出一定的評價。旨在為兩種小米的深加工產品開發(fā)和利用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    沁州黃小米、陽曲縣小米;丙烯酰胺;磷酸二氫鉀;磷酸氫二鈉;石油醚;NaCl;KCl;考馬斯亮藍G-250;NaOH;H2SO4;硫酸銨;NaHCO3;EDTA;BaCl2;乙醇;聚乙二醇;甲叉雙丙烯酰胺。

    1.2 儀器與設備

    電子天平;Thermo 數(shù)顯pH 儀;TGL-16G-C 高速冷凍離心機;電熱恒溫水浴鍋、752N 型紫外可見分光光度計、DYY-8C 電泳儀。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 小米主要營養(yǎng)成分的含量測定

    測定兩種小米的營養(yǎng)成分主要是蛋白質、脂肪、淀粉、灰分和水分,然后對兩種小米各組分含量進行對比分析。

    水分含量的測定:參照GB 5009.3《食品安全國家標準食品中水分的測定》,直接干燥法[4]。

    灰分含量的測定:參照GB 5009.4《食品安全國家標準食品中灰分的測定》,食品中總灰分的測定[5]。

    蛋白質含量的測定:參照GB 5009.5《食品安全國家標準食品中蛋白質的測定》,凱氏定氮法[6]。

    淀粉含量的測定:參照GB 5009.9《食品安全國家標準食品中淀粉的測定》,酸水解法[7]。

    脂肪含量的測定:參照GB 5009.6《食品安全國家標準食品中脂肪的測定》,索氏抽提法[8]。

    1.3.2 小米全蛋白質的提取工藝優(yōu)化

    選取超聲輔助溶劑提取的方法,提取兩種小米的全蛋白質,以料液比、緩沖液pH 值、超聲時間為單因素變量來對提取率進行研究,進一步選取適當?shù)囊蛩厮竭M行正交實驗對提取工藝進行優(yōu)化。

    1.3.3 兩種小米蛋白質進行SDS-PAGE 分子量表征

    將兩種小米洗凈、干燥后粉碎過篩,取0.025 g 粉末放入2 mL 離心管中與配制好的PBS 緩沖液按照一定的比例進行混合,采用超聲波輔助提取小米全蛋白。在4 ℃、5 000 r/min條件下離心15 min。取上清液,用于小米全蛋白質的SDS-PAGE。

    參照Tian HD.改進的不連續(xù)緩沖液系統(tǒng)方法,配制好14%的聚丙烯酰胺凝膠[9]。點樣后進行8 h 電泳,脫色,染色,并用凝膠成像系統(tǒng)對兩種小米的蛋白質進行分子量測定分析。

    2 結果與分析

    2.1 兩種小米的營養(yǎng)成分含量比較分析

    采用國標法測得兩種小米的各營養(yǎng)成分含量,結果(表1)顯示,沁州黃小米因其生長環(huán)境為特殊紅黏土,富含鈣、鐵、磷、錳、硒等多種營養(yǎng)元素,使得其在有機物、蛋白質、淀粉、脂肪含量上顯著高于陽曲縣小米,展示出了其營養(yǎng)成分的優(yōu)勢;陽曲縣小米在水分含量上較沁州黃較高,與其口感軟糯適于蒸煮的特性相符。進一步研究分析得出,兩種小米均含有豐富的脂肪,且主要為不飽和脂肪酸,膳食纖維含量豐富,鉀離子含量高、鈉離子含量低,對高血壓患者非常有益,磷含量豐富,為大米的2 倍,使其具有補血、健腦的功能。

    表1 兩種小米營養(yǎng)成分含量比較 含量,%

    2.2 超聲波輔助提取兩種小米全蛋白工藝的研究

    2.2.1 料液比對小米全蛋白提取率的影響

    將干燥過篩的小米粉和PBS 緩沖溶液(pH=6.8)按照料液比[m(小米)/m(PBS 緩沖液),下同]為1∶1,1∶5,1∶10,1∶20,1∶50 混合后在4 ℃條件下超聲30 s。后用冷凍離心機離心分離后取上清液,測定提取率,結果如圖1 所示。

    圖1 料液比提取率影響

    由圖1 可知,提取率隨著料液比的增大而逐步升高,料液比至1∶10 時達到峰值,隨后提取率稍有下降。根據(jù)單因素實驗結果,選擇料液比為1∶5,1∶10,1∶20 三水平進行正交實驗。

    2.2.2 緩沖溶液pH 值對小米全蛋白提取率的影響

    將干燥過篩的小米粉與pH 分別為6.8、7.0、7.2、7.6、8.0 的PBS 緩沖溶液(料液比為1∶10)混合后于4 ℃超聲30 s,分離取上清液,進行提取率的測定。結果如圖2 所示。

    圖2 緩沖溶液pH 值對提取率影響

    由圖2 可看出,緩沖溶液在pH=7.0 時,最適合小米全蛋白的溶出,全蛋白提取率最高。隨著緩沖溶液堿性的增強,蛋白質的提取率降低。根據(jù)單因素實驗結果,選擇緩沖溶液pH 為6.8、7.0、7.2,三水平進行正交實驗。

    2.2.3 超聲時間對小米全蛋白提取率的影響

    將干燥過篩的小米粉與PBS 緩沖液(pH=6.8)按料液比1∶10 混合后在4 ℃下分別超聲20、25、30、35、40、45、50 s 測定提取率。結果如圖3 所示。

    圖3 超聲時間對提取率影響

    由圖3 可知,隨超聲時間的增加提取率逐步增高,超聲35 s 后提取率達到最大值。隨著超聲時間繼續(xù)增加蛋白質因提取溫度升高而降解,使得提取率反而降低。根據(jù)單因素實驗結果,選擇超聲時間為30、35、40 s 三水平進行正交實驗。

    2.2.4 小米全蛋白質提取工藝的正交實驗

    正交實驗因素水平表見表2。由表3 極差分析顯示,在料液比、緩沖溶液pH 和超聲時間三個因素中,對小米全蛋白提取率影響最大的因素是超聲時間,其次是料液比,最后為緩沖溶液pH 值。根據(jù)正交實驗結果顯示,優(yōu)化出小米全蛋白最佳的提取方案是A3B1C3,即在料液比為1∶20,pH 為6.8,超聲40 s。

    表2 正交實驗因素水平表

    表3 小米蛋白正交實驗表

    2.3 兩種小米分子量測定

    對兩種小米蛋白質進行SDS-PAGE 凝膠電泳分析可知,小米中蛋白質組分主要為谷蛋白和醇溶谷蛋白。在同樣的提取條件下,2,4 泳道的蛋白質含量明顯高于1,3 泳道,沁州黃小米的蛋白質含量顯著高于陽曲縣小米,展示出了更好的營養(yǎng)品質。

    3 結論

    本研究通過超聲波輔助提取法提取了兩種小米(沁州黃小米與陽曲縣小米)中的蛋白質,研究了料液比、緩沖溶液pH 和提取時間對小米蛋白質提取效果的影響,并通過三因素三水平正交實驗篩選出兩種小米蛋白提取的最優(yōu)化方案為料液比1∶20,緩沖溶液pH=7.0,提取時間40 s。對提取出的小米蛋白質進行SDS-PAGE 凝膠電泳分析看出,小米蛋白的組份為谷蛋白和醇溶谷蛋白,且沁州黃小米的蛋白質含量高于陽曲縣小米的蛋白質含量。對兩種小米的各項營養(yǎng)成分進行研究可以看出,兩種小米在營養(yǎng)組成上基本差別不大,但沁州黃小米的有機物、蛋白質、淀粉、脂肪含量比陽曲縣小米略高。

    通過研究,對沁州黃小米和陽曲縣小米的營養(yǎng)品質進行了分析,為兩種小米的深加工產品開發(fā)和利用,滿足不同體質人群對小米蛋白質營養(yǎng)品質的不同需求,加工具有特異蛋白營養(yǎng)性狀的專用品種提供了理論依據(jù)。

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