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    蜂蜜品質(zhì)及其測(cè)定技術(shù)

    2023-01-25 02:28:00丁磊梁愛心望玲李翔張淑君
    中國(guó)蜂業(yè) 2022年11期
    關(guān)鍵詞:蜂蜜紅外光譜

    丁磊 梁愛心 望玲 李翔 張淑君 │文

    1 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部實(shí)驗(yàn)室,武漢 430070;2 神農(nóng)架匯野生態(tài)食品有限公司,神農(nóng)架 442499

    一、蜂蜜中物質(zhì)成分與分類

    1.蜂蜜中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、功能物質(zhì)及其含量

    蜂蜜的主要成分包括葡萄糖和果糖(70%以上)、水(14%~25%)、蛋白質(zhì)(0.5%)、多種氨基酸(0.1%~0.78%)、礦物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、維生素、多種有機(jī)酸、微量元素和多種活性酶[1-3]。蜂蜜作為保健類食品,含有一定量的功能物質(zhì),例如抗菌的酚類和酶類物質(zhì),抗腫瘤的酚類物質(zhì)和類黃酮,抗氧化的黃酮類化合物、酚類物質(zhì)和超氧化物歧化酶[3]。

    2.影響蜂蜜風(fēng)味和功能的物質(zhì)

    蜂蜜中最重要的物質(zhì)是糖類物質(zhì)、水和酚類物質(zhì)。糖類的含量能夠決定蜂蜜的味道;隨著成熟度增高含水量降低,質(zhì)量越好;酚類物質(zhì)使蜂蜜具有消炎、抗菌、抗過(guò)敏、抗血栓形成等生物學(xué)活性[4]。

    3.蜂蜜分類

    從蜜蜂種類劃分可分為中蜂蜜和意蜂蜜,從狀態(tài)劃分可分為液態(tài)蜜和結(jié)晶蜜,從成熟度劃分可分為成熟蜜和未成熟蜜,從工藝上劃分可分為天然蜜、濃縮蜜和蜂巢蜜,從蜜源品種上劃分可分為百花蜜、槐花蜜、椴樹蜜、荊條蜜、棗花蜜。除此之外,蜂蜜因蜜源不同還有荔枝蜜、龍眼蜜、柑橘蜜等幾十個(gè)蜜種。

    二、蜂蜜品質(zhì)及其指標(biāo)

    國(guó)標(biāo)中對(duì)蜂蜜的指標(biāo)主要涉及三個(gè)方面,包括感官要求、理化指標(biāo)以及微生物限量[5]。其中感官要求主要是對(duì)色澤、氣味、滋味、狀態(tài)和雜質(zhì)的要求;理化指標(biāo)包括果糖、葡萄糖、蔗糖(不同蜂蜜要求不同)和鋅;微生物限量包括微生物總數(shù)、大腸菌數(shù)、霉菌計(jì)數(shù)、嗜滲酵母計(jì)數(shù)、沙門氏菌、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌。各指標(biāo)范圍見表1-3。

    表1 國(guó)標(biāo)中對(duì)蜂蜜的感官要求

    表2 國(guó)標(biāo)中蜂蜜的理化指標(biāo)

    表3 國(guó)標(biāo)中微生物限量

    三、優(yōu)質(zhì)蜂蜜及其評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

    優(yōu)質(zhì)蜂蜜是高出一般質(zhì)量的蜂蜜,主要是色香味好、成熟、含水量低。在我國(guó)養(yǎng)蜂產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀下,只要不是假蜜、不摻雜,藥殘不超標(biāo)就是合格蜂蜜。而從商品屬性來(lái)看,合格的蜂蜜應(yīng)該天然成熟、不發(fā)酵、農(nóng)藥殘不超標(biāo)、無(wú)污染、無(wú)雜質(zhì),并且符合安全衛(wèi)生條件。區(qū)別于合格蜂蜜,優(yōu)質(zhì)蜂蜜主要從三個(gè)方面來(lái)衡量——色香味特征、成熟度和含水量[6]。

    優(yōu)質(zhì)蜂蜜還可以進(jìn)一步劃分成基本優(yōu)質(zhì)和特別優(yōu)質(zhì)等不同檔次。其中基本優(yōu)質(zhì)蜂蜜應(yīng)具備色香味屬性穩(wěn)定、成熟度高、含水量小于18%、藥殘和農(nóng)殘不得檢出等特點(diǎn),并且在主要蜜源花期,生產(chǎn)場(chǎng)地只有單一蜜源植物開花泌蜜;特別優(yōu)質(zhì)蜂蜜對(duì)蜜源單一性和蜂蜜的成熟度要求則更高,其含水量應(yīng)小于17%[6]。

    蜂蜜一般可分為四等,一等蜜是優(yōu)質(zhì)蜂蜜。一等蜜的顏色呈白色、水白色或特淺琥珀色;狀態(tài)是透明、粘稠的液體或結(jié)晶體;味甜,具有蜜源植物特有的香味;蜜源花種是枇杷、龍眼、荔枝、椴樹、紫云英、槐花等。

    四、蜂蜜品質(zhì)測(cè)定方法及其優(yōu)缺點(diǎn)

    測(cè)定和評(píng)價(jià)蜂蜜品質(zhì)指標(biāo)的方法包括感官法、電子鼻和電子舌、質(zhì)譜法、光譜法、色譜法、酶活檢測(cè)法、同工酶檢測(cè)法、顯微鏡檢技術(shù)、差示量熱掃描法(DSC)[7],還有各種方法的聯(lián)合使用[8,9],各方法優(yōu)缺點(diǎn)見表4。

    表4 各測(cè)定方法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

    五、光譜技術(shù)在蜂蜜品質(zhì)指標(biāo)定量測(cè)定、種類定性分類及摻假鑒別中應(yīng)用

    1.光譜技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀

    關(guān)于中紅外光譜技術(shù)(MIR)在蜂蜜相關(guān)測(cè)定的研究中,國(guó)外做的遠(yuǎn)比國(guó)內(nèi)多。而中紅外的研究比近紅外少,中紅外在蜂蜜品質(zhì)測(cè)定的研究還有很大空間。

    (1)蜂蜜品質(zhì)的定量測(cè)定、摻假鑒別

    高文佳等[14]運(yùn)用中紅外光譜技術(shù),偏最小二乘法(PLS)建模,結(jié)合液相色譜法檢測(cè)蜂蜜中的葡萄糖和果糖,建立優(yōu)化了檢測(cè)蜂蜜中葡萄糖和果糖的檢測(cè)模型。實(shí)驗(yàn)采用來(lái)自中國(guó)10 個(gè)省份超過(guò)6 種植物源蜂蜜樣品,對(duì)選定的146 個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)。預(yù)測(cè)模型經(jīng)過(guò)平滑、求導(dǎo)等處理方式后,交叉驗(yàn)證均方根誤差分別為0.5151%和0.5143%,準(zhǔn)確性較高,表明中紅外光譜技術(shù)可以運(yùn)用于蜂蜜檢測(cè)的質(zhì)量控制,并且對(duì)蜂蜜果糖和葡萄糖的檢測(cè)具有高效性。

    Das 等[15]利用傅里葉變換中紅外光譜技術(shù)和電阻抗譜技術(shù),檢測(cè)不同花卉來(lái)源的蜂蜜摻糖情況。實(shí)驗(yàn)采用印度西孟加拉邦的蜂蜜,研究了分別摻有10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%蔗糖糖漿的蜂蜜,發(fā)現(xiàn)隨著摻入量的增加吸光度增加,光譜峰也在變化。

    Kelly 等[16]利用中紅外光譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量對(duì)蜂蜜中糖溶液摻假進(jìn)行研究,結(jié)合偏最小二乘法(PLS)分析,主要對(duì)摻入果糖和葡萄糖進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)采用來(lái)自愛爾蘭的人工養(yǎng)殖蜂蜜,對(duì)99 份真實(shí)和221 份摻假樣品進(jìn)行光譜分析。結(jié)果準(zhǔn)確率為93%,表明能夠成功鑒別純蜂蜜和摻入果糖和葡萄糖溶液的蜂蜜,并且很可能也可以鑒別其他糖溶液。

    毛力軍[11]對(duì)中紅外光譜技術(shù)應(yīng)用于蜂蜜摻假預(yù)判進(jìn)行了研究,結(jié)合主成分分析(PCA)建立判別模型。實(shí)驗(yàn)采用來(lái)自中國(guó)20 多個(gè)省的超過(guò)6 種蜂蜜,使用了124 個(gè)摻假樣本和113 個(gè)真實(shí)樣本,在蜂蜜中分別摻入人工轉(zhuǎn)化糖、大米糖漿和果葡萄糖。結(jié)果在添加量低于10%時(shí)誤判,判斷準(zhǔn)確性為97.78%,表明該方法可以對(duì)蜂蜜是否摻假及摻假方式和添加量進(jìn)行判別。

    (2)蜂蜜種類的定性分類

    Formosa 等[17]研究了衰減全反射中紅外光譜法對(duì)本地蜂蜜和外來(lái)蜂蜜的區(qū)分和分析模型,使用21 種馬耳他蜂蜜樣品和49 種國(guó)外(西西里島、希臘、瑞典)采集的蜂蜜,通過(guò)結(jié)合光譜技術(shù)、光譜變換、變量選擇和偏最小二乘(PLS)判別分析,建立了成功分類本地和外來(lái)蜂蜜的化學(xué)計(jì)量模型。結(jié)果分類的準(zhǔn)確率均大于97%,最高可達(dá)100%。

    Schwolow 等[18]利用衰減全反射中紅外光譜法和氣相色譜-離子遷移譜互補(bǔ)聯(lián)合,鑒別不同植物和地理來(lái)源的蜂蜜,利用主成分分析(PCA)和偏最小二乘判別分析(PLS)建模。實(shí)驗(yàn)總共分析了從歐洲各個(gè)國(guó)家采集的64 個(gè)蜂蜜樣品,包括單花相思蜂蜜、低芥酸菜籽蜂蜜和蜜露蜂蜜3 種,建立了可以區(qū)分不同來(lái)源蜂蜜的可靠模型,準(zhǔn)確率高達(dá)100%。

    Ruoff 等[19]利用衰減全反射中紅外光譜法對(duì)蜂蜜進(jìn)行了植物和地理來(lái)源的鑒定,實(shí)驗(yàn)采用411 份主要來(lái)自瑞典的蜂蜜,結(jié)果準(zhǔn)確率大于91.7%,表明該方法與化學(xué)計(jì)量相結(jié)合不僅可以鑒別單花蜂蜜,還可以鑒別多花蜂蜜。此外,還可以通過(guò)光譜獲得蜂蜜常規(guī)質(zhì)量控制的幾種被測(cè)量物的定量信息。

    陳蘭珍等[12]利用中紅外光譜結(jié)合線性判別(LDA)分析方法,建立了蜂蜜品種鑒別模型。實(shí)驗(yàn)采用來(lái)自不同蜂場(chǎng)的249 個(gè)蜂蜜樣本,包括椴樹蜜、槐花蜜、葵花蜜、苕子蜜、油菜蜜和棗花蜜共6 種不同蜂蜜,實(shí)驗(yàn)結(jié)果模型對(duì)訓(xùn)練集和測(cè)試集樣品的識(shí)別率分別為97.59%和96.30%,表明能夠準(zhǔn)確的鑒別出不同品種蜂蜜,可以作為蜂蜜品種鑒別的新方法。

    徐天揚(yáng)等[20]利用中紅外光譜技術(shù)基于主成分分析(PCA)結(jié)合支持向量機(jī)(SVM)或最小支持向量機(jī)(LES-SVM)對(duì)蜂蜜進(jìn)行品種分類研究,建立分類器模型。實(shí)驗(yàn)用采自不同蜂場(chǎng)的392 個(gè)蜂蜜樣本,包括荊條蜜、油菜蜜、洋槐蜜、椴樹蜜和荔枝蜜共5 種蜂蜜。結(jié)果降維到20 維時(shí)平均準(zhǔn)確率高于97%,最高可達(dá)100%,表明該方法鑒別蜂蜜種類是可行的,而且效率高、損失少,減少了人為主觀影響。

    2.光譜技術(shù)的優(yōu)勢(shì)

    光譜法具有檢測(cè)速度快、分析簡(jiǎn)便、每次使用成本低和避免人為主觀性影響的優(yōu)勢(shì)[12],在蜂蜜的測(cè)定中應(yīng)用廣泛。而中紅外光譜與近紅外光譜比起來(lái)包含更多的光譜信息,且振動(dòng)吸收帶更容易辨別[16]。也有研究認(rèn)為近紅外光譜技術(shù)來(lái)源分類效果略好于中紅外光譜技術(shù)[21]。

    3.蜂蜜品質(zhì)與分類的光譜方法具體操作及注意事項(xiàng)

    (1)采樣

    根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在養(yǎng)蜂場(chǎng)采集足夠的蜂蜜樣品,采集的蜂蜜樣品密封于塑料瓶中,20~25℃保存。

    (2)儀器和設(shè)備

    中紅外光譜儀和分析軟件

    (3)樣本處理

    對(duì)樣本進(jìn)行篩選分組,結(jié)晶蜜需用水浴鍋在40~60℃水浴融化成液體蜜。準(zhǔn)確稱取10g 蜂蜜樣品于100mL 燒杯中,加入30mL 水,設(shè)定磁力攪拌器溫度為40℃,攪拌5min 后轉(zhuǎn)移至50mL 容量瓶中,用水定容至標(biāo)線,靜置數(shù)分鐘后待檢。

    (4)樣本掃描

    測(cè)量前,對(duì)中紅外光譜分析儀進(jìn)行預(yù)熱,標(biāo)準(zhǔn)化,測(cè)試前清洗干凈和調(diào)零。設(shè)置儀器的檢測(cè)參數(shù)分別為:掃描范圍650~4000cm-1、分辨率8cm-1、掃描32 次。每次進(jìn)樣量為8mL,每個(gè)選定樣品掃描2 次取平均值,作為原始光譜。最后利用光譜采集軟件采集光譜。

    (5)模型建立

    光譜預(yù)處理:影響樣品光譜的因素有很多,如基線漂移、光散射、高頻隨機(jī)噪聲等,為了消除這些影響,增加結(jié)果的可靠性,在建立判別模型之前,需對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理,例如,標(biāo)準(zhǔn)歸一化法、平滑、倒數(shù)、基線矯正等[21]。

    波段選擇:將光譜波段分為幾個(gè)波段,除去有干擾峰的波段,建立PLS 模型,用不同預(yù)處理方式優(yōu)化波段,采用交叉驗(yàn)證法對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià),選擇決定系數(shù)大的波段建模[21]。

    建模:為驗(yàn)證模型的準(zhǔn)確性,先選取一部分樣品作為測(cè)試集,一部分作為檢驗(yàn)集。選擇具有較強(qiáng)吸收的特征波段,選擇交叉驗(yàn)證誤差最小時(shí)對(duì)應(yīng)的主成分?jǐn)?shù),建立最優(yōu)的蜂蜜成分快速檢測(cè)模型。

    (6)注意事項(xiàng)

    (A)采集的蜂蜜樣品一定要真實(shí)可靠

    (B)測(cè)定前要注意將光譜測(cè)定儀預(yù)熱

    (C)測(cè)定時(shí)實(shí)驗(yàn)室溫度控制在15~30℃,相對(duì)濕度在65%以下

    (D)每次測(cè)定使用的模型要注意進(jìn)行矯正

    4.存在問題和改進(jìn)

    在運(yùn)用紅外光譜儀進(jìn)行常規(guī)測(cè)定時(shí),需要進(jìn)行大量的初步工作,建立可靠的化學(xué)計(jì)量模型[19]。判別模型在檢測(cè)時(shí)會(huì)出現(xiàn)誤判[11],靈敏度還有望進(jìn)一步提升,也并不是所有的檢測(cè)模型準(zhǔn)確率都高,只是可作為一種檢測(cè)方式,還需要不斷地改進(jìn)和篩選。目前所報(bào)道的中紅外測(cè)定蜂蜜的模型準(zhǔn)確率通過(guò)多種建模方式聯(lián)合驗(yàn)證已經(jīng)在不斷地提升,甚至有100%的準(zhǔn)確率[18]。中紅外光譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法具有實(shí)現(xiàn)蜂蜜快速檢測(cè)的潛力,但在光譜采集方式、建模方法、波段選擇以及檢測(cè)結(jié)果方面,各個(gè)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果均有差異[22]。今后的研究可著重于檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)模型的制定,此外,對(duì)于一些高級(jí)摻假也還不能準(zhǔn)確鑒別出來(lái)。

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