分子改造后酶法合成功能性低聚半乳糖的研究進(jìn)展

李冠洋， 金 清

(1.延邊大學(xué) 融合學(xué)院；2.延邊大學(xué) 農(nóng)學(xué)院：吉林 延吉 133000)

隨著人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的飲食需求，越來(lái)越多的食物逐漸進(jìn)入到大眾的餐桌[1]。這導(dǎo)致了機(jī)體對(duì)具有高膽固醇、高油脂食物的攝入量增加。致使膳食結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，直接增加了疾病發(fā)生的可能性。

近年來(lái)，公眾對(duì)營(yíng)養(yǎng)的意識(shí)有所提高[2]，對(duì)明顯有益健康食品的需求量也在增加[3-4]。目前消費(fèi)者對(duì)被認(rèn)為具有低熱量、低脂肪、低糖的食品更加熱衷[5]。

益生菌與人類的身體健康有著緊密的聯(lián)系。益生元被定義為“一種有選擇性的發(fā)酵成分，允許胃腸道微生物群，例如乳酸菌和雙歧桿菌屬等發(fā)生特定的變化后，給宿主的健康帶來(lái)好處的一類物質(zhì)。其中，低聚半乳糖(Galactooligosaccharide，GOS)屬于益生元，是近年來(lái)備受關(guān)注的功能性低聚糖，并且是眾多功能性低聚糖中最受大眾所接受的，最安全的低聚糖之一，也是具有益生特性的低聚糖[6]。2007年6月29日我國(guó)發(fā)布第12號(hào)公告，將GOS確定為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑；2008年9月9日衛(wèi)生部又發(fā)布了第20號(hào)公告，將GOS定義為新資源食品，并規(guī)定GOS可廣泛應(yīng)用于嬰幼兒配方食品、各類食品和營(yíng)養(yǎng)保健品；2008年7月28日美國(guó)FDA發(fā)布了GRAS公告(公告號(hào)GRN000236),確認(rèn)GOS為公共安全性物質(zhì)，其應(yīng)用遍及各類嬰幼兒配方食品。

我國(guó)目前制備GOS的方法主要以酶法提取為主，β-半乳糖苷酶與乳糖發(fā)生轉(zhuǎn)糖苷反應(yīng)時(shí)生成GOS。這種方法雖然安全但卻不高效，所以要對(duì)這些天然來(lái)源的酶進(jìn)行分子改造，改造的方向可以是定向的也可以是隨機(jī)的，根據(jù)需要增強(qiáng)其某一方面的特性，更好的滿足人們需要。

1 低聚半乳糖概述

1.1 低聚半乳糖結(jié)構(gòu)

低聚半乳糖是以乳糖為底物，通過(guò)β-半乳糖苷酶作用，生成由2～10個(gè)半乳糖基和1個(gè)末端葡萄糖基通過(guò)糖苷鍵連接而成的低聚糖[7-10]。

因β-半乳糖苷酶的來(lái)源不同，導(dǎo)致其糖苷鍵的連接方式也不相同。結(jié)構(gòu)式為(Galactose)n-Glucose(圖1)。

圖1 低聚半乳糖的結(jié)構(gòu)式

1.2 理化性質(zhì)

低聚半乳糖是一類無(wú)法被胃腸道所消化吸收的功能性低聚糖，可以直接進(jìn)入腸道，為以乳酸菌為主的腸道微生物供給原料，具有益生特性[11-12]。

低聚半乳糖被發(fā)現(xiàn)廣泛存在于哺乳動(dòng)物乳汁中，但存在量極少；人類母乳中的量相對(duì)多一些，所以也被稱為乳源功能性低聚糖；在一些水果蔬菜，如洋蔥、大蒜和大豆中也天然存在，然而，這些食物中的含量較低，存在的益生效果并不明顯[13]。因此，低聚半乳糖最佳的補(bǔ)充形式是采用營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑或在食品中直接添加。

低聚半乳糖也擁有優(yōu)良的熱穩(wěn)定性，在120 ℃條件下可以保存30 min；同時(shí)，其耐酸性也很高，能夠在人體的腸道中長(zhǎng)時(shí)間存在，促進(jìn)雙歧桿菌等益生菌的生長(zhǎng)。

2 低聚半乳糖的功能性

低聚半乳糖屬于非消化性低聚糖(NDO)，也被認(rèn)為是水溶性膳食纖維[14]，是β-半乳糖苷酶以乳糖為底物催化生成的益生元[15]；被宿主腸道微生物選擇性利用，促進(jìn)宿主的健康。由于低聚半乳糖在腸道前端不能被水解或吸收，僅部分能被腸道中的益生菌分解產(chǎn)能，因此，低聚半乳糖的能量值相當(dāng)?shù)停s為1.73 kcal/g[16-17]。且甜味純正，具有高度的水溶性和適口性，甜度約為蔗糖的20%～40%，可作為低熱值的食品添加劑[18]。低聚半乳糖還具有促進(jìn)腸道健康，增加人體免疫力和抗齲齒等特性[19]。

3 低聚半乳糖的生產(chǎn)現(xiàn)狀

3.1 低聚半乳糖的合成途徑

由圖2可知，β-半乳糖苷酶對(duì)乳糖的水解反應(yīng)和轉(zhuǎn)糖苷反應(yīng)是同時(shí)進(jìn)行的，與大多數(shù)的糖苷酶(Glycoside Hydrolase，GH)一樣，它們的轉(zhuǎn)苷機(jī)制包括糖基化與去糖基化2部分[20]。1) 糖基化反應(yīng)包括：乳糖大分子中的糖苷鍵在β-半乳糖苷酶中酸堿氨基酸及親核氨基酸的作用下發(fā)生斷裂，生成半乳糖分子，同時(shí)會(huì)與酶中的親核氨基酸結(jié)合，形成酶與半乳糖的中間復(fù)合體；2) 去糖基化反應(yīng)包括：中間復(fù)合體會(huì)發(fā)生水解，在生成半乳糖的同時(shí)與周圍的乳糖分子或單糖分子進(jìn)行轉(zhuǎn)苷反應(yīng)，生成低聚半乳糖[21]。

圖2 低聚半乳糖的合成途徑

3.2 低聚半乳糖的制備方法

3.2.1 提取法

在已知的水果和蔬菜中如草莓、香蕉、大豆、大蒜等，雖然都含有低聚半乳糖，但其中的含量都極低，而且都以多糖的形式存在，其中不乏其他的功能性低聚糖及其他糖類物質(zhì)，在分離純化的過(guò)程中存在著雜質(zhì)多，特異性低等困難,使得從多糖中提取唯一的低聚半乳糖更加困難，而且操作程序也很復(fù)雜，低聚半乳糖的含量本來(lái)就很少，最后提取出的低聚半乳糖的量無(wú)法滿足人們的需求，所以直接從自然界中提取低聚半乳糖的方法不適合產(chǎn)業(yè)化、商業(yè)化。

3.2.2 化學(xué)合成法

通過(guò)大量的化學(xué)試劑提純低聚半乳糖，在提取的過(guò)程中，化學(xué)試劑本身就會(huì)給生態(tài)造成污染，而且無(wú)法保證產(chǎn)物對(duì)人體的安全性，再加上整個(gè)過(guò)程的成本高，所以想要通過(guò)化學(xué)合成法制備低聚半乳糖并不現(xiàn)實(shí)。

3.2.3 生物催化法

酶法合成是目前已知應(yīng)用較多且技術(shù)成熟的方法。酶具有高效性、專一性且反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點(diǎn)。在催化合成低聚半乳糖的反應(yīng)中，β-半乳糖苷酶有著很重要的位置，在與乳糖反應(yīng)的過(guò)程中表現(xiàn)出高活性的轉(zhuǎn)苷特性，而且酶的來(lái)源大多對(duì)人類無(wú)害，不會(huì)造成環(huán)境的污染，也比較容易獲得，是目前產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)低聚半乳糖的主要方法之一[22-23]。

21世紀(jì)以來(lái)，人們對(duì)功能性食品的重視度越來(lái)越高，其中也有著低聚半乳糖的身影。導(dǎo)致國(guó)內(nèi)外對(duì)于低聚半乳糖的研究逐漸增多，更加工業(yè)化、產(chǎn)業(yè)化。較為經(jīng)典的催化合成低聚半乳糖的方法有2種：1) 利用自然界本身存在的菌株中的β-半乳糖苷酶，包括粗酶和純酶，與乳糖發(fā)生轉(zhuǎn)苷反應(yīng)得到低聚半乳糖[24-25],但想要從野生菌株中分離且純化出β-半乳糖苷酶不僅成本高，而且步驟繁瑣;2) 通過(guò)已知基因序列進(jìn)行人工合成，獲得重組工程菌[26-27],再利用該菌株制備低聚半乳糖。相較于野生型菌株，人為合成的工程菌在酶的純化等方面更加方便，且同樣安全。

4 利用β-半乳糖苷酶合成低聚半乳糖

4.1 β-半乳糖苷酶

β-半乳糖苷酶(β-galactosidase，EC 3.2.1.23)，也稱乳糖酶，具有水解乳糖的作用，能夠?qū)⑷樘撬獬砂肴樘呛推咸烟荹28]，在乳制品行業(yè)中，可用來(lái)降解其中的乳糖生成單糖，以此解決乳糖不耐癥等問(wèn)題；β-半乳糖苷酶不僅有水解乳糖的特性，同時(shí)也具有轉(zhuǎn)苷特性，將水解乳糖后的半乳糖為底物進(jìn)行轉(zhuǎn)糖苷反應(yīng)，生成低聚半乳糖，增強(qiáng)其益生特性。

4.1.1 β-半乳糖苷酶的分布及不同來(lái)源在轉(zhuǎn)苷反應(yīng)中的酶學(xué)特性比較

β-半乳糖苷酶在自然界中普遍存在，大致上可分為3類:1) 動(dòng)物源：存在于哺乳動(dòng)物幼年時(shí)期的腸道當(dāng)中；2) 植物源：如大蒜、洋蔥、草莓及擬南芥等中；3) 微生物源，也是存在總量最多的一類；細(xì)菌、霉菌和酵母被人們研究的較為廣泛，同時(shí)也有很多研究成果。其中,已經(jīng)參與到工業(yè)化生產(chǎn)低聚半乳糖的β-半乳糖苷酶制劑來(lái)源于米曲霉(Aspergillus oryzae)、乳酸克魯維酵母(Kluyvernmoyces lactis)、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)等[29]。

4.1.2 β-半乳糖苷酶在轉(zhuǎn)糖苷反應(yīng)中的酶學(xué)性質(zhì)比較

β-半乳糖苷酶因來(lái)源廣泛，導(dǎo)致其在轉(zhuǎn)苷反應(yīng)中的特性也不盡相同(表1)。韓明明等[30]從駝乳中獲得了具有高轉(zhuǎn)糖苷活性的β-半乳糖苷酶，在溫度65 ℃，pH值7.0，反應(yīng)時(shí)間4.0 h，乳糖初始濃度為450 g/L的條件下，轉(zhuǎn)苷率達(dá)到了31.51%；李宗顯等[31]通過(guò)克隆克雷伯氏菌B5582Y中的β-半乳糖苷酶基因在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了異源表達(dá)，在溫度44 ℃，pH值7.0～7.5，反應(yīng)時(shí)間10.0 h，乳糖初始濃度濃度為900 g/L的條件下，轉(zhuǎn)苷率高達(dá)44%；前人研究顯示，通過(guò)利用從嗜酸乳桿菌ATCC 4356獲得的粗β-半乳糖苷酶進(jìn)行低聚半乳糖的合成，在溫度50 ℃，pH值6.8，反應(yīng)時(shí)間15.0 h，乳糖初始濃度為400 g/L的條件下，轉(zhuǎn)苷率為21.5%[32]；Li等[33]發(fā)現(xiàn)源自南極的一種類單胞菌ANT 48，并將其中編碼β-半乳糖苷酶的基因成功在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)，且與乳糖進(jìn)行了轉(zhuǎn)苷反應(yīng)，在溫度40 ℃，pH值6.6～7.0，反應(yīng)時(shí)間15.0 h，乳糖初始濃度為906 g/L的條件下，轉(zhuǎn)苷率達(dá)到了30.9%；Frenzel等[34]利用環(huán)狀芽孢桿菌中的β-半乳糖苷游離酶與乳糖進(jìn)行轉(zhuǎn)苷反應(yīng)，在溫度40 ℃，pH值7.0，最終反應(yīng)時(shí)間25 h，乳糖初始濃度為390 g/L的條件下，轉(zhuǎn)苷率為41%；Fischer等[35]利用乳酸克魯維酵母中的β-半乳糖苷游離酶與乳糖進(jìn)行轉(zhuǎn)苷反應(yīng)，在溫度45 ℃，pH值6.5，最終反應(yīng)時(shí)間8 h，乳糖初始濃度為200 g/L的條件下，其轉(zhuǎn)苷率為32%；以上6例均為野生型酶在適當(dāng)?shù)娜樘菨舛认逻M(jìn)行的轉(zhuǎn)糖苷反應(yīng)，接下來(lái)介紹關(guān)于米曲霉源的β-半乳糖苷酶野生型酶及其在分子改造后的改造酶的轉(zhuǎn)糖苷率，并將倆者進(jìn)行對(duì)比。許牡丹[36]等利用米曲霉中β-半乳糖苷酶與乳糖進(jìn)行轉(zhuǎn)苷反應(yīng)，在溫度55 ℃，pH值6.0，反應(yīng)時(shí)間32 h，乳糖初始濃度為400 g/L的條件下，轉(zhuǎn)苷率為32.4%；Gao等[37]先對(duì)米曲霉中的酶進(jìn)行分子改造，改造形式為氨基酸的定點(diǎn)突變，其中，雙突變體N140C/W806F的最佳反應(yīng)條件：溫度40 ℃，pH值4.5，反應(yīng)時(shí)間7 h，乳糖初始濃度600 g/L，最終的轉(zhuǎn)苷率高達(dá)59.8%。

表1 不同來(lái)源酶的酶學(xué)特性及轉(zhuǎn)苷率

4.2 分子改造的概述

雖然帶有β-半乳糖苷酶的菌株有很多，但是每一種來(lái)源的酶的特性都不一樣，相同單位的酶所能合成出的低聚半乳糖的量也不一樣，此時(shí)需要通過(guò)酶工程相關(guān)的手段對(duì)β-半乳糖苷酶進(jìn)行定向改造。

對(duì)某一特定酶的分子改造一般要經(jīng)歷3個(gè)階段：1) 扮演“定點(diǎn)突變”的理性設(shè)計(jì)階段；2) 非理性設(shè)計(jì)階段的代表“定向進(jìn)化”；3) 將生物信息學(xué)的相關(guān)技術(shù)與高通量篩選技術(shù)相結(jié)合，篩選出目的菌株。

簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，定點(diǎn)突變的特點(diǎn)是“所變即所得”，量少但精準(zhǔn)；定向進(jìn)化的特點(diǎn)是“所篩即所得”，進(jìn)化后的突變菌株在量大的同時(shí)也提高了突變?yōu)樗杈甑目赡苄浴?/p>

4.2.1 糖苷酶的分子改造

眾所周知，糖苷酶無(wú)論是在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)還是在生物制藥、食品領(lǐng)域中都起著至關(guān)重要的作用[38]。然而這一類糖苷酶的酶學(xué)特性都是自然賦予的，其中的催化活性、熱穩(wěn)定性和pH值穩(wěn)定性及對(duì)底物的選擇性往往無(wú)法完美的滿足于人們需求，需要在分子層面利用酶工程手段對(duì)其進(jìn)行改造和優(yōu)化[39]。改變酶的酶學(xué)特性，從而使該酶的某一特性得到提升，如反應(yīng)體系的溫度下降，底物濃度不變的情況下，水解產(chǎn)物的量得到提升等。

4.2.2 β-半乳糖苷酶的分子改造

目前已知，β-半乳糖苷酶在醫(yī)藥領(lǐng)域、食品添加劑的制備、嬰幼兒食品中有很大的作用，是工業(yè)化的樞紐之一。國(guó)內(nèi)外對(duì)β-半乳糖苷酶的改造手段有很多，集中歸類可分為以下4點(diǎn)(表2)。

1) 減輕半乳糖的競(jìng)爭(zhēng)性抑制。Hu等[40]對(duì)黑曲霉源的β-半乳糖苷酶中的一段氨基酸序列進(jìn)行定向誘變，并從所得文庫(kù)中得到了對(duì)半乳糖抑制敏感度降低的突變株。

2) 提高酶的熱穩(wěn)定性。前人研究表明，在克魯維乳酸菌源的β-半乳糖苷酶中通過(guò)分子改造引入了二硫鍵，使得熱穩(wěn)定性得到了提高[41]。

3) 改變糖苷鍵的成鍵類型。Yin等[42]對(duì)芽孢桿菌源的β-半乳糖苷酶中的+1亞位點(diǎn)附近的殘基R484進(jìn)行突變，使所得的低聚半乳糖中的β(1-3)糖苷鍵的占比得到提升。

4) 提高酶的轉(zhuǎn)苷能。Wu等[43]對(duì)硫化葉菌中β-半乳糖苷酶進(jìn)行定點(diǎn)突變，得到突變體F359Q和F441Y，對(duì)比野生型酶，二者的轉(zhuǎn)苷率都有提升，前者提升至58.3%，后者提升至61.7%。

前人研究顯示，對(duì)黑曲霉源的β-半乳糖苷酶中的806位點(diǎn)進(jìn)行突變，將色氨酸突變?yōu)楸奖彼幔岣吡嗣傅霓D(zhuǎn)苷能力[44]。

表2 不同來(lái)源酶的改造方向及改造結(jié)果

4.2.3 提高β-半乳糖苷酶轉(zhuǎn)苷能力的定向進(jìn)化方法

β-半乳糖苷酶屬于GH的一種，雖然水解酶的分支有很多，但在水解底物時(shí)的轉(zhuǎn)苷機(jī)制是大同小異的。例如β-半乳糖苷酶在催化乳糖的過(guò)程中，會(huì)同時(shí)進(jìn)行水解反應(yīng)和轉(zhuǎn)苷反應(yīng)，其中大多數(shù)都是以水解反應(yīng)為主，轉(zhuǎn)苷能力相對(duì)較弱，也就導(dǎo)致低聚半乳糖的產(chǎn)率很低。所以攻克這一難題也就成為了國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。根據(jù)該酶的催化機(jī)理，國(guó)內(nèi)外在得到相關(guān)酶的晶體結(jié)構(gòu)做了針對(duì)實(shí)驗(yàn)，可歸類為以下3種：

1) 突變-位點(diǎn)氨基酸：原理是破壞了反應(yīng)的中間態(tài)，造成轉(zhuǎn)苷反應(yīng)占據(jù)優(yōu)勢(shì)的效果。例如通過(guò)突變?chǔ)?l-阿拉伯呋喃糖酶中的-位點(diǎn)氨基酸，最終使低聚木糖的轉(zhuǎn)化率得到了提高[45-46]。

2) 改造+位點(diǎn)氨基酸：原理是提高酶的活性中心與底物的親和力。例如將+位點(diǎn)氨基酸改造成芳香族氨基酸，使GH16家族酶的轉(zhuǎn)苷能力提高[47]。

3) 增加酶活性中心的疏水性：原理是將活性中心附近的氨基酸突變?yōu)槭杷被?，打破水解和轉(zhuǎn)苷反應(yīng)原有的占比，提升轉(zhuǎn)苷反應(yīng)的占比。例如將木聚糖酶活性中心附近的酪氨酸突變?yōu)楸奖彼?，?dǎo)致該酶的水解活性急劇下降，變相提高了轉(zhuǎn)苷占比[48-49]。

5 低聚半乳糖的應(yīng)用前景

5.1 低聚半乳糖在食品領(lǐng)域中的應(yīng)用

功能性低聚半乳糖在調(diào)節(jié)人體免疫功能、增殖腸道菌群、提高微量元素及礦物質(zhì)吸收等方面具有優(yōu)良特性。在乳制品、烘焙食品和部分飲品中都起到了不同程度的作用。

5.1.1 低聚半乳糖在乳制品中的應(yīng)用

因?yàn)槲覈?guó)在功能性低聚糖方面研究的起步時(shí)間較日本及一些歐洲國(guó)家晚，所以低聚半乳糖在乳制品中的應(yīng)用更多的集中于一些嬰兒的配方乳粉及老年人食用乳粉中[50]。在食用未添加低聚半乳糖的乳粉時(shí)，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)大便干燥甚至是便秘的癥狀；研究表明，在添加低聚半乳糖后，可以有效的解決這一問(wèn)題的發(fā)生率[51-52]。以人類目前的技術(shù)手段來(lái)說(shuō)，現(xiàn)存的所有配方奶粉所能起到的作用都無(wú)法與天然母乳相比，添加低聚半乳糖的目的，就是為了更好的使人工配方奶粉的作用接近母乳，更加有益于消費(fèi)者的健康。

5.1.2 低聚半乳糖在烘焙食品中的應(yīng)用

21世紀(jì)以來(lái)，購(gòu)買并食用高纖維、低熱量、低糖食品不僅是一種選擇更是一種時(shí)尚。根據(jù)低聚半乳糖低熱值、良好的耐熱性及保水性，不僅在烘焙過(guò)程中增加食品益生特性，而且也延長(zhǎng)了貨架期。

5.1.3 低聚半乳糖在飲料中的應(yīng)用

得利于低聚半乳糖優(yōu)良的耐酸性，使其可以在pH值較低的環(huán)境中保持穩(wěn)定，故在生產(chǎn)飲料，尤其是酸性飲料和果汁中可以添加一定的劑量，即使是在高溫消毒的生產(chǎn)環(huán)節(jié)中也能保證其結(jié)構(gòu)不被破壞，且本身?yè)碛械奶鹞兑膊粫?huì)影響飲料本身的口感和風(fēng)味。

5.2 低聚半乳糖在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用

近些年來(lái)，不論是在國(guó)內(nèi)還是國(guó)外，肥胖癥患者數(shù)量與日俱增[53]。肥胖癥本身并不可怕，可怕的是與之相關(guān)的綜合癥甚至癌癥的發(fā)生[54]。研究表明，人體攝入一定劑量的低聚半乳糖后，可以有效調(diào)節(jié)體重和食欲[55]。功能性低聚糖在促進(jìn)腸道雙歧桿菌等益生菌和增強(qiáng)腸道功能等方面起積極作用[56-57]。在減少體內(nèi)脂肪擺脫肥胖癥這一行動(dòng)中，低聚半乳糖等益生元更多起到的是輔助功能，最終還是要以運(yùn)動(dòng)配合醫(yī)囑為主。

5.3 低聚半乳糖在畜產(chǎn)領(lǐng)域中的應(yīng)用

低聚半乳糖不僅在人體中作用巨大，在動(dòng)物的機(jī)體也同樣起著積極作用。例如，在家養(yǎng)畜禽的飼養(yǎng)環(huán)節(jié)中，難免會(huì)發(fā)生腸道菌群失調(diào)、免疫功能下降及生長(zhǎng)緩慢等問(wèn)題。研究表明，用添加了低聚半乳糖的飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，可以有效調(diào)節(jié)這一系列問(wèn)題，并且激活腸道本身的免疫功能[58]。根據(jù)低聚半乳糖等類似的功能性低聚糖的理化特性，其在畜產(chǎn)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景還相當(dāng)廣闊，有待于人們進(jìn)一步的挖掘和研究。

6 結(jié)論和展望

綜上所述，低聚半乳糖仍然是人們不可或缺的功能性低聚糖，不僅在功能性食品及保健食品的種類開(kāi)發(fā)上前景廣闊，還在畜產(chǎn)方面有很大的開(kāi)拓空間。但在合成低聚半乳糖的研究當(dāng)中，相關(guān)的酶制劑來(lái)源單一，純度低且成本高，目前可以實(shí)現(xiàn)商業(yè)化產(chǎn)業(yè)化的β-半乳糖苷酶的來(lái)源還沒(méi)有一個(gè)較好的選擇；所以選取酶的來(lái)源仍然是研究的重點(diǎn)，益生菌來(lái)源的β-半乳糖苷酶不乏是一種新的思路。再通過(guò)分子改造的相關(guān)技術(shù)，有選擇性、針對(duì)性地對(duì)野生型酶進(jìn)行進(jìn)化、突變，使之在轉(zhuǎn)苷反應(yīng)中起到更優(yōu)良的作用，更符合實(shí)驗(yàn)的需要，以加快國(guó)內(nèi)突破酶法合成低聚半乳糖相關(guān)難題的進(jìn)程，實(shí)現(xiàn)高效制備。在分子改造后還要對(duì)突變體進(jìn)行基因組及生物信息學(xué)的分析[59-60],確定其家族。將類似的思路與想法應(yīng)用到其他類似低聚半乳糖的功能性低聚糖的生產(chǎn)當(dāng)中，讓國(guó)內(nèi)的益生元產(chǎn)業(yè)壯大，滿足國(guó)人的日常需要，使大健康產(chǎn)業(yè)得到扶持，推動(dòng)我國(guó)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展、社會(huì)發(fā)展。