豬流行性腹瀉的診斷與防控

彭燕軍

四川省宜賓市翠屏區(qū)安阜街道經(jīng)濟(jì)發(fā)展服務(wù)中心，四川宜賓 644007

豬流行性腹瀉(PED)是世界范圍內(nèi)的一種腸道傳染病，其癥狀和豬傳染性胃腸炎很相似，給養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展造成嚴(yán)重的威脅。1971年，在英國首次發(fā)現(xiàn)此病，此后在歐洲、亞洲的許多國家相繼發(fā)生，尤其中國、日本、韓國等國家的發(fā)病率較高。PED在我國的發(fā)生比較嚴(yán)重，新的PEDV變異株的出現(xiàn)給養(yǎng)豬業(yè)帶來更大的損失。我國主要采用豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活苗或二聯(lián)弱毒苗進(jìn)行預(yù)防，但從2006年開始，免疫豬群中開始出現(xiàn)PEDV，造成此病的持續(xù)感染。2011年，我國的部分省份暴發(fā)豬流行性腹瀉的大規(guī)模流行，到目前為止，此病的發(fā)生率一直居高不下。

1 流行病學(xué)

豬流行性腹瀉主要感染豬，不同日齡的豬都可感染，但是易感性和發(fā)病率不同。7日齡以內(nèi)的哺乳仔豬易感性最強(qiáng)，癥狀也最明顯，發(fā)病率可以高達(dá)100%，其次為架子豬、育肥豬、母豬。母豬的發(fā)病率一般在15%～90%。PED多呈暴發(fā)性流行，豬群中只要有一頭豬發(fā)病，同圈或者相鄰的豬場一般都會(huì)相繼發(fā)病，病程持續(xù)2～3周后病情穩(wěn)定下來。而且一個(gè)豬群暴發(fā)后，第二年發(fā)生該病的幾率很低，僅有個(gè)別地區(qū)或者豬場的斷奶仔豬或者架子豬每年的秋冬都會(huì)發(fā)生。病豬和帶毒豬是主要的傳染源，病毒主要侵害小腸上皮細(xì)胞，病毒主要在結(jié)腸和小腸的絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，因此病毒會(huì)隨糞便等排泄物排出體外，污染周圍的環(huán)境、飼料、飲水或者用具等。豬群感染病毒主要是通過被污染的車輛、飼料或者攜帶病毒的鞋、工作服等感染，不同豬舍或者不同豬場也主要通過被污染的車輛、飼料或者人員的流動(dòng)而引起流行蔓延。PED的發(fā)生具有明顯的季節(jié)性，冬春寒冷季節(jié)發(fā)病率高，尤其發(fā)病集中在11月至第二年2月發(fā)生，但是夏季、春秋季節(jié)也時(shí)有發(fā)生。PEDV與傳染性胃腸炎的癥狀非常相似，不容易區(qū)分，而且兩種疾病經(jīng)?；旌细腥?，會(huì)導(dǎo)致病情加重，生產(chǎn)中要引起重視。

2 診斷方法

防控豬流行性腹瀉的關(guān)鍵是能夠?qū)υ摬∽龀鲈缙诘脑\斷，建立快速、敏感、高效、經(jīng)濟(jì)的診斷方法有非常重要的作用。在臨床癥狀上，豬傳染性胃腸炎、豬輪狀病毒病等和PED的癥狀很相似，僅憑臨床癥狀很難確診，因此要通過病原學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷等實(shí)驗(yàn)室診斷才可以確診。一般情況下，病原學(xué)診斷方法能夠準(zhǔn)確診斷出豬流行性腹瀉，但隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，PCR技術(shù)的應(yīng)用，使得診斷方法更多更敏感、更準(zhǔn)確。

2.1 臨床診斷根據(jù)病豬的臨床表現(xiàn)可以做出初步的診斷。豬流行性腹瀉的潛伏期、病程的長短以及病狀會(huì)隨著年齡的大小有明顯的差異。仔豬的潛伏期較短，僅為24～36h，育肥豬的潛伏期稍長，一般為2d以上。豬感染后一般表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐、脫水，剛開始排出的糞便比較粘稠，然后變?yōu)樗畼蛹S便，病豬體溫升高，精神萎靡不振，食欲不振，逐漸變得消瘦，衰竭死亡。1周齡以內(nèi)的仔豬，病情比較嚴(yán)重，病程常持續(xù)2～4d，就會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重脫水死亡，死亡率在50%～100%。斷奶仔豬和母豬的病持續(xù)時(shí)間較長，腹瀉的癥狀可以持續(xù)1周左右，然后會(huì)逐漸恢復(fù)，但是會(huì)影響生長性能，斷奶仔豬生長緩慢，母豬的泌乳量會(huì)降低。育肥豬感染后，病程也常持續(xù)1周左右康復(fù)，死亡率較低，一般為1%～3%，但是也影響其育肥效果，體重增重較慢，飼料的利用率會(huì)顯著降低。

豬感染流行性腹瀉后，會(huì)出現(xiàn)明顯的病理變化。病豬腸內(nèi)充滿了泡沫狀黃色的粘液性內(nèi)容物和大量的氣體，腸壁擴(kuò)張使得腸壁變薄，呈透明狀，沒有了彈性。感染流行性腹瀉后，特征性的變化為腸粘膜絨毛明顯萎縮變短，腸系膜以及腸系膜淋巴結(jié)水腫。其他的臟器沒有明顯的變化。

2.2 鑒別診斷豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬急性傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬輪狀病毒(PRV)三種病毒性疾病的癥狀都是腹瀉，病理變化都在胃腸道，而且它們的流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)很相似，很難區(qū)別。在臨床上，PEDV、TGEV混合感染發(fā)病的情況非常多，有時(shí)還可以PEDV、TGEV、PRV三種病毒混合或者繼發(fā)感染，給診斷和治療帶來很大的困難。雖然三種病毒性疾病很相似，但是仍然存在細(xì)微的區(qū)別。（1）在中國PED的發(fā)病率和死亡率要高于其他兩種疾病，豬流行性腹瀉以仔豬發(fā)病率和死亡率最高，腹瀉、嘔吐為其典型的癥狀，但是以腹瀉為主，而且嘔吐多發(fā)生在采食以后，嘔吐的癥狀相對(duì)較輕，病理變化以小腸病變?yōu)橹?；?）TGE在寒冷的冬春季節(jié)發(fā)病率較高，也具有腹瀉、嘔吐的癥狀，但是以嘔吐癥狀為主，而且嘔吐多于采食之前就會(huì)發(fā)生，采食以后也會(huì)發(fā)生嘔吐，但是次數(shù)較少。病理變化也主要以胃、小腸病變?yōu)橹?，小腸壁變薄，呈透明狀，腸絨毛變短，這和豬流行性腹瀉的變化很相似；豬輪狀病毒病是一種人畜共患病，其死亡率相對(duì)較低，而且很少會(huì)出現(xiàn)嘔吐，從這點(diǎn)可以將其和PED、TGE進(jìn)行區(qū)別。

2.3 實(shí)驗(yàn)室診斷在疾病的診斷過程中，有時(shí)只通過流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷不能進(jìn)行確診，還需要進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測。

2.3.1 分離與鑒定PEDV將病毒進(jìn)行分離鑒定，是診斷豬流行性腹瀉的最可靠的方法。病豬開始腹瀉24h內(nèi)，采集病料如小腸或小腸內(nèi)容物，然后將病料進(jìn)行無菌處理，再接種于VERO細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過幾代盲傳，將病毒分離出來，再接種于仔豬，然后根據(jù)仔豬的病狀、病理變化進(jìn)行初步診斷。也可以將分離的病毒用免疫學(xué)診斷方法、PCR方法等進(jìn)行檢測。還可以將分離的病毒用免疫電鏡進(jìn)行觀察，這種檢測方法很有說服力，也最直接。將分離培養(yǎng)的病毒進(jìn)行處理，在電鏡下可以觀察到典型的病毒粒子。

2.3.2 免疫熒光抗體檢測技術(shù)免疫熒光抗體檢測是對(duì)所要檢測的抗體或者抗原用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，再用熒光顯微鏡通過觀察熒光對(duì)對(duì)應(yīng)的抗原或者抗體進(jìn)行分析的一種檢測方法。在1941年，免疫熒光抗體標(biāo)記技術(shù)由Coons等建立，當(dāng)時(shí)由于技術(shù)的限制，是利用異氰酸熒光黃將抗體進(jìn)行標(biāo)記，檢測小白鼠組織切片的可溶性肺炎球菌多糖。1988年，謝明星等采用間接免疫熒光方法對(duì)PED抗體的消長規(guī)律進(jìn)行了測定。1990年，崔現(xiàn)蘭等對(duì)豬場的PED抗體進(jìn)行了檢測，采用間接免疫熒光法陽性檢測率達(dá)到89%。

2.3.3 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)是診斷疫病最常用的檢測方法，此種檢測方法檢測速度快、特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確率較高。朱維正等[5]利用病豬的糞便作為病料，利用雙抗體ELISA法從病料中檢出PEDV,采用這種方法好的檢出率與應(yīng)用免疫電鏡檢測發(fā)檢出的陽性符合率達(dá)97.37%。潘溪利用斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)834份血清樣品進(jìn)行了檢測，陽性抗體率達(dá)21%，與用瓊擴(kuò)試驗(yàn)檢測方法更敏感，重復(fù)性更好。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)診斷方法速度快，可以用于大量樣品的檢測，尤其在流行病學(xué)的調(diào)查中應(yīng)用較廣。

2.3.4 中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)也是進(jìn)行病毒診斷的一種重要的技術(shù)方法。中和試驗(yàn)是一種免疫學(xué)試驗(yàn)，敏感性、特異性非常強(qiáng)。早在1988年，謝明星等人利用ELISA方法、免疫熒光方法、中和試驗(yàn)三種方法對(duì)早期感染的病豬進(jìn)行了檢測，通過研究證實(shí)三種方法都可以對(duì)豬傳染性腹瀉進(jìn)行早期診斷，而且中和試驗(yàn)也能廣泛應(yīng)用于流行病學(xué)調(diào)查。

2.3.5 分子生物學(xué)檢測方法分子生物學(xué)的發(fā)展，也促進(jìn)了疫病診斷學(xué)的發(fā)展。常用的分子生物學(xué)診斷方法主要有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)和熒光定量PCR方法。

（1）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法有RT-PCR、多重RT-PCR、RT-巢式PCR(RT-nested PCR)等幾種形式。RT-PCR技術(shù)應(yīng)用較廣，而且反應(yīng)敏感，可以非常靈敏的檢測出病毒含量極少的病毒RNA。這種方法雖然非常靈敏，但是用于臨床檢測比較繁瑣，一般多用于研究，臨床應(yīng)用還沒有推廣。

（2）熒光定量PCR方法就是將熒光基團(tuán)加入到PCR反應(yīng)體系中，利用熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化檢測PCR反應(yīng)產(chǎn)物的變化。熒光定量PCR方法在病原微生物檢測、基因病加測、傳染病檢測等領(lǐng)域已經(jīng)廣泛應(yīng)用。定量PCR方法的靈敏度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)PCR方法，而且檢測需要的時(shí)間短，沒有污染。

3 防控措施

豬流行性腹瀉是養(yǎng)豬生產(chǎn)中經(jīng)常發(fā)生的急性傳染病，對(duì)養(yǎng)豬生產(chǎn)的威脅很大，因此，做好預(yù)防工作非常重要。要通過加強(qiáng)對(duì)妊娠母豬、后備豬以及仔豬的飼養(yǎng)管理，提高飼養(yǎng)水平，做好衛(wèi)生消毒以及免疫預(yù)防措施來降低疫病的發(fā)生率。

3.1 預(yù)防免疫到目前為止，預(yù)防PED仍然以疫苗免疫為主。生產(chǎn)中常用的疫苗有豬流行性腹瀉滅活疫苗和豬流行性腹瀉弱毒疫苗兩種。滅活疫苗比較安全，疫苗的免疫效果受母源抗體的影響較小，母豬在分娩前20～30d肌肉注射疫苗可使仔豬獲得被動(dòng)免疫。滅活疫苗也可以用于疫區(qū)或者受威脅區(qū)的主動(dòng)免疫，但是效果不如被動(dòng)免疫。程慶華等在1995年研制的PED滅活疫苗對(duì)兩月齡的仔豬的仔豬保護(hù)率達(dá)90.42%，但是豬群中TGE、PED、PRV等混合感染的病例逐漸增多，滅活疫苗對(duì)混合感染的病例的效果不好，而且滅活疫苗在接種后14d可產(chǎn)生免疫力，免疫周期較短，注射劑量大，費(fèi)用高，對(duì)緊急接種免疫不太適合；弱毒疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的時(shí)間短，抗體水平比較高，用于主動(dòng)免疫的效果要比滅活疫苗效果好，但是弱毒苗容易受到母源抗體的影響，尤其是我國發(fā)生流行性腹瀉的地區(qū)較廣，接種疫苗的頻率高，仔豬母源抗體水平較高，如用弱毒疫苗接種有時(shí)會(huì)受到影響。

隨著PEDV、TGEV和PRV的混合感染病例的爭奪，人們對(duì)二聯(lián)苗和三聯(lián)苗等弱毒疫苗的研究也逐漸深入。佟有恩等在1999年研制了PED和TGE二聯(lián)弱毒疫苗，此苗穩(wěn)定性好，對(duì)預(yù)防PED和TGE有明顯的效果。對(duì)PED進(jìn)行主動(dòng)免疫，保護(hù)率高達(dá)100%。錢永清等人研制了三聯(lián)苗，對(duì)母豬和仔豬的保護(hù)率高達(dá)98%和93%。

3.2 強(qiáng)化飼養(yǎng)管理措施PED主要發(fā)生于冬季和早春（12月份至次年的3月份），究其原因主要是因?yàn)闅夂蚝洌瑴囟茸兓^大，再加上豬舍的保溫措施不到位，很容易引起豬群的抵抗力降低，誘發(fā)PED，因此，冬季來臨之前，一定要對(duì)豬舍進(jìn)行檢修，做好保溫措施。還要加強(qiáng)對(duì)飼料和飲水的管理，不要飼喂發(fā)霉變質(zhì)的飼料，冬季不要飼喂冰凍飼料，不要給豬群飲用冷水。要加強(qiáng)對(duì)后備母豬的管理，根據(jù)多年的實(shí)踐表明，一、二胎的母豬以及所產(chǎn)的仔豬發(fā)生PED以及TGEV的幾率較高，因此要做好后備母豬的管理，強(qiáng)化預(yù)防免疫措施。

3.3 做好豬舍的消毒和病豬的隔離工作豬場要強(qiáng)化消毒措施，養(yǎng)殖場的入口要有消毒池，各個(gè)豬舍的入口要設(shè)有消毒間，豬舍內(nèi)的糞便要及時(shí)清理。健康豬感染發(fā)病通常是由于接觸了被病豬排泄物污染了的飼料、飲水以及其他工具等引起的，因此豬場中一旦出現(xiàn)了發(fā)病豬，要立即隔離，積極治療，防止疫情在豬場內(nèi)進(jìn)一步擴(kuò)散流行。對(duì)病豬進(jìn)行隔離治療期間，飼養(yǎng)員不要出豬場，對(duì)病死豬要進(jìn)行無害化處理，病豬所在的豬舍以及飼喂人員所能到達(dá)的地方要用生石灰進(jìn)行消毒，徹底將病原消滅。

3.4 對(duì)病豬的治療對(duì)PED到目前為止還沒有特效藥物，出現(xiàn)病情后，主要采用對(duì)癥治療的措施。對(duì)于腹瀉、脫水的病豬要進(jìn)行補(bǔ)液，對(duì)出現(xiàn)體溫升高的病豬要及早采用魚腥草注射液、卡巴匹林鈣、柴胡注射液等藥物進(jìn)行退熱。還要做好病豬的護(hù)理，飼喂適口性好、易消化的飼料，給病豬增加營養(yǎng)，增強(qiáng)體質(zhì)。

4 結(jié)束語

隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，疫病的流行特點(diǎn)也在發(fā)生變化，各個(gè)地方PEDV并不是一成不變的，雖然已經(jīng)有了PEDV滅活苗和弱毒苗,對(duì)該病有一定程度的預(yù)防和保護(hù)，但是PEDV、TGEV和PRV等疫病的混合感染，以及豬瘟、豬圓環(huán)病毒病等疫病的發(fā)生流行，都對(duì)PED的發(fā)生產(chǎn)生很大的影響，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重的威脅。