MGIA 法與CTT 法檢測孕婦IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果的判讀與分析

陳 娟，錢宇佳，黃 蓉，凌 玉，陳亞軍，胡文靜（通信作者）

（南京市婦幼保健院檢驗(yàn)科 江蘇 南京 210004）

全自動血型儀微柱凝膠免疫分析技術(shù)（microcolumn gel immunoassay technique, MGIA），是近些年來發(fā)展迅速的全新血型血清學(xué)技術(shù)，在鑒定ABO 以及RhD 血型中的運(yùn)用范疇較廣[1]。MGIA 不僅能鑒定ABO 血型、RhD 血型，同時(shí)還可用于血型抗體和效價(jià)的檢測，通過抗體效價(jià)的檢測，盡早地預(yù)防胎兒和新生兒溶血?。╤emolytic disease of the fetus and newborn, HDFN）的發(fā)生。HDFN 是因?yàn)槟笅胙筒缓希阁w針對與其不同的胎兒紅細(xì)胞血型抗原產(chǎn)生了免疫性IgG 抗體，經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，導(dǎo)致胎兒或新生兒同種免疫性溶血引起的一系列臨床癥狀，患兒病死率較高[2-3]。國內(nèi)以ABO 和Rh 血型不合引起的HDFN 多見，因此，在母體妊娠期間，監(jiān)測針對胎兒父系抗原的抗體效價(jià)升高情況對HDFN 的預(yù)判有一定作用，臨床上通常對O 型孕婦（其丈夫非O 型）定期檢測血型抗體效價(jià)。本研究對IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)的孕婦樣本采用MGIA 法和傳統(tǒng)試管法（conventional tube technique, CTT）平行檢測，對比結(jié)果差異，旨在為全自動血型儀檢測IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)尋找合適的判讀方法。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2021 年10 月—2022年1 月南京市婦幼保健醫(yī)院產(chǎn)生IgG 型抗A 或者抗B 的O 型血孕婦血清241 例。其中，抗A 效價(jià)121 例、抗B 效價(jià)120 例。所有孕婦均知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①產(chǎn)生IgG 型抗A 或者抗B 的O 型孕婦；②檢查依從性較好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①未產(chǎn)生IgG 型血型抗體的孕婦；②精神障礙者。

1.2 儀器與試劑

全自動血型分析儀（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國有限公司，型號：VISION）；抗人球蛋白微柱凝膠檢測卡（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國有限公司，批號：

21125.01.1）；ABO 血型反定型用4%紅細(xì)胞試劑盒（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國有限公司，批號：A481Z）；4%不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞試劑盒（奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易中國有限公司，批號：3SS007Z）。0.2 M 巰基乙醇（2-ME）（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號：20217702）。凝聚胺試劑盒（珠海貝索生物工程有限公司，批號：

A210202）；血型血清離心機(jī)（珠海貝索生物工程有限公司，型號：BASO 2020-2）。電熱恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號：DK-8D）。

1.3 試驗(yàn)方法

取200 μL 孕婦血漿標(biāo)本和200 μL 的0.2 mol/L 2-ME應(yīng)用液充分混勻，試管加蓋置37 ℃水浴60 min，充分裂解血清中的IgM 類抗體。將經(jīng)2-ME 處理的血漿以0.9%氯化鈉溶液做倍比稀釋，選擇需檢測抗體的對應(yīng)紅細(xì)胞，以MGIA 法和CTT 法分別進(jìn)行檢測。

1.4 結(jié)果判讀與記錄

CTT 法以“1+”記錄結(jié)果；MGIA 法以“1+、2+、3+、4+”記錄結(jié)果。以MGIA 法“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果同CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較，同時(shí)以CTT 法“1+”的IgG型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果分別與MGIA 法“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果進(jìn)行比較，找出CTT法的“1+”與MGIA 法“1+、2+、3+、4+”中最有一致性的血型抗體效價(jià)的結(jié)果，作為MGIA 法報(bào)告IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)的結(jié)果。

1.5 MGIA 法反應(yīng)強(qiáng)度、現(xiàn)象及判讀說明

“1+”為紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠底部；“2+”為大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部；“3+”為大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠表面，少部分位于凝膠中上部；“4+”為紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠表面。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。五組間等級資料比較采用Z檢驗(yàn)，組間比較采用Wilcoxon 符號秩和檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較

MGIA 法“1+”、MGIA 法“2+”、MGIA 法“3+”和MGIA法“4+”的IgG型ABO血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果表明，MGIA 法的“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果進(jìn)行比較，MGIA 法的抗體效價(jià)結(jié)果高于CTT 法的抗體效價(jià)結(jié)果，見表1。

表1 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較

2.2 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果的分別比較

MGIA 法“1+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MGIA法“2+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MGIA 法“3+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型效價(jià)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此表明，MGIA 法的“1+、2+、3+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果均高于CTT 法“1+”的IgG型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果。而MGIA 法“4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明MGIA 法“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果具有一致性，見表2。

表2 MGIA 法“1+、2+、3+、4+”與CTT 法“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果分別比較

3.討論

血型抗體效價(jià)是判斷是否發(fā)生溶血反應(yīng)的一種檢測方法。血型抗體的效價(jià)偏高，會增加胎兒或新生兒溶血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，胎兒血型抗體的效價(jià)越高，發(fā)生溶血反應(yīng)的可能性越大，嚴(yán)重的會造成死胎或者新生兒死亡。血型抗體效價(jià)臨床上通常用于檢查由母嬰血型不合引起的HDNF，因此需要特別重視對HDNF 的產(chǎn)前檢測。在檢測方法上，對敏感度高和準(zhǔn)確性好的要求，也顯得尤為重要。

現(xiàn)有檢測方法包括化學(xué)發(fā)光法、單核細(xì)胞單層測定等，其中，CTT 法和MGIA 法是檢測血型抗體效價(jià)的常用方法。CTT 法測定血型抗體效價(jià)受到影響因素較多，技術(shù)人員的操作手法、肉眼判讀結(jié)果的尺度標(biāo)準(zhǔn)不同，都會對結(jié)果造成一定的差異，難以自動化和標(biāo)準(zhǔn)化，且檢測結(jié)果無法保存，更無法與孕婦前一次抗體效價(jià)作對比[4]。血清中真實(shí)的抗體滴度與不同操作人員判讀的滴度存在偏倚，因此檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性會受到很大影響。

近年來，越來越多的實(shí)驗(yàn)室更傾向于用MGIA 法檢測血型抗體效價(jià)，MGIA 法反應(yīng)的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成紅細(xì)胞凝集團(tuán)塊，在一定離心力作用下，該凝集團(tuán)塊位于膠表面或膠中，如紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，則完全沉降到微柱管底部。該法因具有操作簡便、易于標(biāo)準(zhǔn)化的優(yōu)點(diǎn)，適合臨床大批量的操作。

與CTT 法比較，MGIA 法檢測紅細(xì)胞抗體效價(jià)的敏感性更高，以“1+”判讀結(jié)果，MGIA 法顯著高于CTT 法的效價(jià)[5]。有學(xué)者認(rèn)為MGIA 法臨界值效價(jià)應(yīng)比CTT 方法高1 ～2 個(gè)稀釋度[6]。也有研究結(jié)果顯示，MGIA 法的滴度比CTT 法高3 倍左右，且其特異性也較高，重復(fù)性更好，主觀性較低[7-11]。本研究運(yùn)用全自動血型儀MGIA 法檢測IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)，可對結(jié)果自動拍照保存，并機(jī)器判斷結(jié)果，減少了人為因素引起的判讀誤差，準(zhǔn)確性更高。同時(shí)MGIA 法對于亞型，弱抗體、抗原的檢出率也明顯高于CTT 法，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)抗體效價(jià)的升高，有效地降低溶血性疾病的發(fā)生率。在實(shí)驗(yàn)室使用微柱凝膠檢測卡時(shí)，為了保證MGIA 法的準(zhǔn)確性，需要注意：①血液標(biāo)本不能有溶血、凝塊。②定期更換反定型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞。③堅(jiān)持雙人核對制度，以免造成不必要的判讀失誤。

目前國內(nèi)外對于新生兒溶血病產(chǎn)前檢測方面的專家共識普遍都基于CTT 法的血型抗體效價(jià)結(jié)果[12]，而并非MGIA 法。若以MGIA 法的“1+”報(bào)告抗體效價(jià)結(jié)果，可能會對臨床醫(yī)生產(chǎn)生誤導(dǎo)，因此對于MGIA 法檢測血型抗體效價(jià)，需要重新建立參考值。有學(xué)者認(rèn)為，血型抗體效價(jià)試驗(yàn)不僅要考慮稀釋倍數(shù)，也要考慮凝集強(qiáng)度，凝集強(qiáng)度反映了抗體的親和力[13]，如果只考慮稀釋倍數(shù)，不考慮抗體親和力，會使人誤解。還有學(xué)者認(rèn)為，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上確立微柱凝膠技術(shù)相應(yīng)的參考值[14]。

本研究將MGIA 法的“1+、2+、3+、4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果分別與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MGIA 法的“1+、2+、3+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果均存在顯著差異性，而MGIA 法的“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果卻有很好的一致性。

綜上所述，在以MIGA 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果制訂MIGA 參考值時(shí)還需結(jié)合凝集強(qiáng)度制訂參考值標(biāo)準(zhǔn)。而MIGA 法的“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)與CTT 法的“1+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果最為接近，因此可以選用MIGA 法“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果作為結(jié)果報(bào)告。此外，MIGA 法“4+”的IgG 型ABO 血型抗體效價(jià)結(jié)果還可以通過結(jié)合有的新生兒溶血病產(chǎn)前評判標(biāo)準(zhǔn)節(jié)約成本，更加方便實(shí)用。