重度顱腦外傷病人血清T細胞激活性低分泌因子、γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10表達及其預(yù)后相關(guān)性

郭清保，楊彥龍，史正華，常濤，李立宏

顱腦外傷是由車禍、墜落等外力引起的危急重癥，預(yù)后較差［1-2］。當(dāng)下臨床多使用格拉斯哥昏迷評分（GCS）、影像學(xué)判斷顱腦外傷病人病情嚴重程度，但缺乏有效評估病人預(yù)后的指標［3］。有研究顯示，創(chuàng)傷性腦外傷病人的T細胞激活性低分泌因子（RANTES）與調(diào)節(jié)活化正常T細胞表達水平均存在異常，且可能與疾病死亡率存在聯(lián)系［4-5］。另外，γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10（IP-10）是一種趨化因子，其在創(chuàng)傷性腦損傷中水平上調(diào)，經(jīng)阿伐他汀治療后，IP-10水平顯著降低，其可能在創(chuàng)傷性腦損傷發(fā)展中起重要作用［6］。但RANTES、IP-10在重度顱腦外傷病人血清中的水平及其對重度顱腦外傷預(yù)后的評估價值鮮有報道?；诖耍狙芯客ㄟ^檢測重度顱腦外傷病人血清RANTES、IP-10水平，分析兩者與預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床評估重度顱腦外傷病人預(yù)后狀況提供臨床證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料將2016年1月至2019年7月中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的174例顱腦外傷病人作為研究對象，其中男114例，女60例，年齡范圍29～45歲，年齡（38.64±6.80）歲；體質(zhì)量指數(shù)范圍16.62～25.77 kg∕m2，體質(zhì)量指數(shù)（21.67±1.92）kg∕m2；利用GCS評分［7］分成輕度組58例（GCS 13～15分）、中度組58例（GCS 9～12分）、重度組58例（GCS 3～8分）。同時抽取58例同期健康體檢者設(shè)為健康組，其中男性37例，女性21例，年齡范圍27～48歲；體質(zhì)量指數(shù)范圍17.01～25.18 kg∕m2。各組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。

納入標準：（1）病人均因顱腦外傷送至本院就診；（2）病人入院時GCS評分為3～15分，且病人受傷后昏迷超過6 h；（3）病人近親屬對本研究均知情同意。排除標準：（1）合并感染性疾病或心、肺、腎疾病者；（2）患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變者；（3）合并嚴重多發(fā)傷者。本研究經(jīng)過中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會審批（批號20160217）。預(yù)后情況：于病人外傷6個月時，使用格拉斯哥預(yù)后評分（GOS）［7］評定，將GOS得分1～3分及未滿6個月死亡病人為預(yù)后不良亞組（n=25例），GOS得分4～5分為預(yù)后良好亞組（n=33例）。

表1各組一般資料比較

1.2 主要試劑與儀器人RANTES酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（艾美捷科技有限公司，貨號BEK-2088-1P）；人IP-10 ELISA試劑盒（上海廣銳生物科技有限公司，貨號R-836）。Q3000酶標儀購買于北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.3 方法

1.3.1 樣本收集于健康體檢者與重度顱腦外傷病人入院當(dāng)日清晨采集空腹外周靜脈血4～5 mL，室溫下凝集，以4 500 r∕min離心7 min，保存上清液，裝至無菌EP管中，保存于-80℃冰箱中，等待檢查。

1.3.2 血清RANTES、IP-10檢測嚴格按照對應(yīng)試劑盒說明書操作配制濃度不同的標準品，使用酶標儀檢測RANTES、IP-10于450 nm處的吸光度，并繪制標準品回歸曲線；解凍血清樣本，并平衡至室溫，將血清加入酶標板中，每孔100 μL，設(shè)置3個復(fù)孔；將酶標板放于37℃培養(yǎng)箱中，孵育25～30 min，每孔分別相應(yīng)添加含有100 μL RANTES、IP-10的生物素工作液，37℃孵育45～50 min，棄掉反應(yīng)液，利用磷酸緩沖液（PBS）洗滌3次；之后，每孔加入100 μL親和素-過氧化物酶復(fù)合物工作液，37℃孵育25～30 min，棄去反應(yīng)液，PBS洗滌3次；每孔加入顯色液90 μL，在37℃環(huán)境下孵育25 min，最后每孔加終止液10 μL，檢測各樣本于450 nm處的吸光度，根據(jù)標準曲線計算血清RANTES、IP-10濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法本研究利用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗，計量數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，采用xˉ±s表示，進行獨立樣本t檢驗，四組比較，進行單因素方差分析，進一步兩兩比較，行SNK-q檢驗；計數(shù)資料以例（%）表示，行χ2檢驗；采用Pearson法分析重度顱腦外傷病人血清RANTES水平與IP-10的相關(guān)性；以ROC曲線評價血清RANTES、IP-10對重度顱腦外傷病人預(yù)后的診斷價值。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清中RANTES、IP-10水平比較較健康組，其他三組血清RANTES、IP-10水平均顯著升高（P＜0.05）；較輕度組，中、重度組血清RANTES、IP-10水平均顯著升高（P＜0.05）；較中度組，重度組血清RANTES、IP-10水平均顯著升高（P＜0.05）。見表2。

表2 各組血清中RANTES、IP-10水平比較

表2 各組血清中RANTES、IP-10水平比較

注：RANTES為創(chuàng)傷性腦外傷病人的分泌因子，IP-10為γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10。①與健康組相比，P＜0.05。②與輕度組相比，P＜0.05。③與中度組相比，P＜0.05。

組別健康組輕度組中度組重度組F值P值例數(shù)58 58 58 58 RANTES∕（μg∕L）0.88±0.27 1.36±0.38①1.68±0.43①②2.06±0.60①②③76.09＜0.001 IP-10∕（ng∕L）194.08±48.33 247.49±54.45①290.53±62.76①②362.18±68.82①②③83.77＜0.001

2.2 重度顱腦外傷病人血清RANTES水平與IP-10的相關(guān)性Pearson法分析顯示，重度顱腦外傷病人血清RANTES水平與IP-10呈正相關(guān)（r=0.46，P＜0.05）。詳見圖1。

圖1 重度顱腦外傷病人血清T細胞激活性低分泌因子（RANTES）水平與γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10（IP-10）的相關(guān)性

2.3 兩組不同預(yù)后重度顱腦外傷病人血清RANTES、IP-10水平比較與預(yù)后良好亞組相比，預(yù)后不良亞組重度顱腦外傷病人血清RANTES、IP-10均明顯升高（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組不同預(yù)后重度顱腦外傷病人血清T細胞激活性低分泌因子（RANTES）與γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10（IP-10）比較

表3 兩組不同預(yù)后重度顱腦外傷病人血清T細胞激活性低分泌因子（RANTES）與γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10（IP-10）比較

注：RANTES為創(chuàng)傷性腦外傷病人的分泌因子，IP-10為γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10。

組別預(yù)后良好亞組預(yù)后不良亞組t值P值例數(shù)33 25 RANTES∕（μg∕L）1.73±0.45 2.45±0.68 4.85＜0.001 IP-10∕（ng∕L）321.29±63.37 406.32±72.45 4.76＜0.001

2.4 血清RANTES、IP-10對重度顱腦外傷病人預(yù)后的評估價值通過繪制血清RANTES、IP-10及兩者聯(lián)合對重度顱腦外傷病人預(yù)后評估價值的ROC曲線，其AUC 95%CI分別為0.82（0.70，0.94）、0.80（0.68，0.92）、0.90（0.82，0.99），截斷值為2.02 μg∕L、355.31 ng∕L，此時其靈敏度與特異度分別為72.0%、72.0%、88.0%與87.9%、78.8%、84.8%，約登指數(shù)為0.599、0.508、0.728。見圖2。

圖2 血清T細胞激活性低分泌因子（RANTES）水平與γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10（IP-10）對重度顱腦外傷病人不良預(yù)后的ROC曲線評價

3 討論

顱腦外傷是神經(jīng)外科較為常見的腦損傷疾病，其可引起顱內(nèi)壓升高、腦水腫，使腦血液循環(huán)受阻、腦血供應(yīng)不足，引發(fā)腦神經(jīng)細胞缺血缺氧，造成認知功能障礙，甚至導(dǎo)致死亡［8-9］。此外，GCS及CT、MRI影像學(xué)檢測是判定顱腦外傷的常用手段，但存在一定缺陷，因此，尋找可準確評估顱腦外傷疾病嚴重程度及預(yù)后的生物學(xué)標志物，對改善病人預(yù)后有重要意義。

RANTES是一種重要趨化性細胞因子，可趨化多種細胞，介導(dǎo)白細胞浸潤，激活淋巴細胞，調(diào)節(jié)細胞生長、分化，參與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等過程［10-11］。研究發(fā)現(xiàn)，RANTES在冠狀動脈粥樣硬化病人血清中水平顯著升高，其可作為早期診治無癥狀冠狀動脈粥樣硬化的靶標［12-13］。此外，Lewis等［14］研究發(fā)現(xiàn)RANTES在急性創(chuàng)傷性腦損傷病人血漿中表達失調(diào)，其水平與創(chuàng)傷性腦損傷后不良結(jié)局關(guān)系密切。以上研究表明，RANTES水平異?？赡芘c腦損傷類神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)。本研究中顱腦外傷病人血清RANTES水平顯著高于健康者，與Albert等［4］研究結(jié)果類似，且其水平隨病情加重而呈上升趨勢，提示RANTES可能在顱腦外傷病理進展中具有重要作用，RANTES有利于輔助評估病人疾病進展程度，推測高水平RANTES促進白細胞浸潤，促進炎癥反應(yīng)，加重機體免疫功能紊亂，從而促進顱腦外傷發(fā)展。

IP-10是一種Th1型趨化因子，屬于趨化因子CXC亞家族成員，其可聚集炎性細胞發(fā)生浸潤、趨化，促進分泌多種與肺炎、腦膜炎等炎癥類疾病相關(guān)的細胞因子［15-16］。研究發(fā)現(xiàn)，IP-10可通過誘導(dǎo)TNF-α產(chǎn)生，進而破壞血腦屏障完整性，從而在日本腦炎疾病進展中發(fā)揮重要作用［17-18］。此外，有研究認為急性腦損傷后交感神經(jīng)系統(tǒng)過度活化，可引起外周炎癥細胞因子∕趨化因子失調(diào)，進而加重繼發(fā)性腦損傷，其中IP-10作為趨化因子家族一員，其在急性腦損傷病人血漿中水平異常升高，IP-10可能在腦外傷發(fā)展進程中起重要作用［19-20］。以上研究表明，IP-10可能參與并影響神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性疾病的出現(xiàn)與疾病進展。本研究顯示健康者血清IP-10水平明顯低于顱腦外傷病人，且隨著疾病進展，IP-10水平越來越高，表明IP-10對顱腦外傷病情發(fā)展具有一定作用，推測與高水平IP-10促進炎性細胞浸潤、釋放多種炎性介質(zhì)，加重免疫炎癥反應(yīng)有關(guān)，進而促進顱腦外傷發(fā)展。

本研究中重度顱腦外傷病人血清RANTES水平與IP-10呈正相關(guān)，表明IP-10可與RANTES互相作用，從而共同對重度顱腦外傷的發(fā)展產(chǎn)生影響，但其相互影響的機制仍需進一步研究。本研究顯示，預(yù)后不良亞組重度顱腦外傷病人血清RANTES、IP-10均明顯高于預(yù)后良好亞組，血清RANTES、IP-10水平可能與重度顱腦外傷預(yù)后相關(guān)，及時監(jiān)控血清RANTES、IP-10水平對重度顱腦外傷診治、預(yù)后評估有一定潛在價值。進一步研究顯示，血清RANTES、IP-10對重度顱腦外傷病人不良預(yù)后預(yù)測價值的AUC分別為0.82、0.80，當(dāng)血清RANTES水平＞2.02 μg∕L或IP-10＞355.31 ng∕L時，重度顱腦外傷病人發(fā)生不良預(yù)后概率較高，提示血清RANTES、IP-10對重度顱腦外傷病人預(yù)后均有一定評估價值；兩者聯(lián)合重度顱腦外傷病人不良預(yù)后預(yù)測價值的AUC為0.90，其靈敏度88.0%，特異度為84.8%，提示RANTES、IP-10聯(lián)合檢測可有效提高對重度顱腦外傷病人預(yù)后的預(yù)測價值。

綜上所述，RANTES、IP-10在重度顱腦外傷病人中均呈高水平，兩者可能在顱腦外傷發(fā)展進程中發(fā)揮一定作用，兩者聯(lián)合可有效提高對重度顱腦外傷不良預(yù)后的診斷價值，有助于臨床篩查不良預(yù)后病人。但本研究未深入探究RANTES、IP-10在重度顱腦外傷中的作用機制、樣本較少，后期將進行深入探討。