病證結(jié)合的腸易激綜合征動(dòng)物模型研究進(jìn)展

劉新明，劉斯文，2，劉書芹，駱雄飛，2*

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193；2.國(guó)家中醫(yī)藥管理局推拿手法生 物效應(yīng)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一種功能性紊亂胃腸障礙，主要表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的腹痛，與排便相關(guān)或伴隨排便習(xí)慣改變[1-2]。排便習(xí)慣異常可表現(xiàn)為便秘、腹瀉，便秘與腹瀉交替，同時(shí)可有腹脹的癥狀［3-4］，且該病缺乏可解釋癥狀的形態(tài)學(xué)改變和生化異常，根據(jù)羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)，共識(shí)[1]將本病分為便秘型、腹瀉型、混合型、不定型4 個(gè)分型。本病的發(fā)病率已達(dá)消化系統(tǒng)疾病的15.9%，且呈逐年遞增趨勢(shì)[5]，不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量及身心健康，而且給我國(guó)造成一定程度的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

動(dòng)物模型有助于探尋致病機(jī)制、研發(fā)新藥，隨著中醫(yī)藥的發(fā)展，研究者逐漸考慮到辨證論治的核心思想，倡導(dǎo)制備病證結(jié)合的證候模型[6]。IBS 作為中醫(yī)藥治療的優(yōu)勢(shì)病種[7]，根據(jù)最新的專家共識(shí)[2]，其辨證分型有10 種，但病證結(jié)合模型研究以肝郁脾虛證、脾腎陽虛證、脾胃濕熱證和肝郁氣滯證[8]為主，現(xiàn)將該方面的研究進(jìn)展綜述如下。

1 肝郁脾虛型

共識(shí)提出肝郁脾虛是導(dǎo)致IBS 發(fā)生的重要病機(jī)，是目前研究最多的證型[2]，根據(jù)中醫(yī)證候流行病學(xué)調(diào)查顯示，肝郁脾虛型占44.5%[9]，多見于腹瀉型IBS?；瘜W(xué)藥物復(fù)制肝郁脾虛模型的方法與其致病因素相距甚遠(yuǎn)，不能全面系統(tǒng)反映病證的實(shí)質(zhì)[10]，模擬中醫(yī)藥治療該病的特征[11]。目前該模型常用早期心理應(yīng)激+物理化學(xué)刺激造模。

母嬰分離法是IBS 的一種代表性造模方式，且作為情志刺激，也可導(dǎo)致肝郁[8]；束縛應(yīng)激使大鼠內(nèi)臟敏感性增高，也是肝郁證造模的主要方法[12]；番瀉葉被認(rèn)為是苦寒瀉下脾虛造模的首選藥物[13]。研究者[12]將上述三因素復(fù)合造模的模型，從模型的疾病特征、證候特征以及生物學(xué)指標(biāo)三方面論證此模型符合IBS肝郁脾虛型，并且用痛瀉要方進(jìn)行方藥反證，證明此模型符合肝郁脾虛型。旺建偉等[14]通過觀察采用乳鼠直腸擴(kuò)張刺激法結(jié)合母嬰分離法、乙酸腸道感染刺激法、束縛刺激法復(fù)制的三種IBS模型，通過觀察體質(zhì)量、便數(shù)變化、精神狀態(tài)、內(nèi)臟高敏性、結(jié)腸組織病理變化、5-羥色胺（5-HT）、c-fos 的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)乳鼠直腸擴(kuò)張刺激法結(jié)合母嬰分離動(dòng)物模型與痛瀉要方效應(yīng)最佳，關(guān)聯(lián)性最大，為IBS 和新的藥物治療干預(yù)發(fā)展研究的優(yōu)良模型。亦有母子分離8 周的復(fù)合造模方法[15]，但分離時(shí)間較長(zhǎng)，影響因素較多。

郭軍雄等[16]將雌雄各半的Wistar 大鼠，通過慢性束縛+番瀉葉灌胃法復(fù)制的肝郁脾虛型病證結(jié)合模型，造模后，模型組出現(xiàn)典型的IBS 肝郁脾虛證表現(xiàn)，其他癥狀及Th1/Th2 平衡改變也符合IBS 肝郁脾虛證表現(xiàn)，是一種較好的研究中醫(yī)藥治療IBS 療效機(jī)制的動(dòng)物模型。此外，研究發(fā)現(xiàn)該模型具有一定的時(shí)效性，此種方法建立的穩(wěn)定模型，能持續(xù)2 周。郭紅采用饑飽失常+番瀉葉灌胃+強(qiáng)迫游泳2 周的方法復(fù)制肝郁脾虛證IBS 大鼠模型[17]，以結(jié)腸敏感度、腸道動(dòng)力學(xué)變化確立疾病，以糖水偏好指數(shù)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、大鼠體重變化評(píng)估肝郁脾虛證型。雖然此法應(yīng)用多種客觀實(shí)驗(yàn)評(píng)估模型的準(zhǔn)確性，但是文獻(xiàn)中并未描述具體操作方法，復(fù)制的難度系數(shù)較大。采用乙醚麻醉后乙酸灌腸合并束縛1 周造模[18]，通過觀察模型一般情況、體質(zhì)量、飲食量、腹部回縮反射等指標(biāo)的變化證明此模型符合IBS 肝郁脾虛型，但造模時(shí)間短、因素單一，不符合IBS 的致病特點(diǎn)。

2 脾腎陽虛型

飲食不節(jié)、苦寒瀉下、過勞等諸多因素導(dǎo)致脾虛，日久累及腎陽，以致脾腎陽虛，或者由肝郁脾虛逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槠⒛I陽虛。根據(jù)此理論基礎(chǔ)，目前有關(guān)脾腎陽虛IBS 模型主要有：1）復(fù)合模型法：母嬰分離2 周＋番瀉葉灌胃4 周法和番瀉葉灌胃4 周+避水應(yīng)激10 d[19]。在模型評(píng)價(jià)方面，這項(xiàng)研究提出四維評(píng)價(jià)體系：宏觀體征-理化指標(biāo)-藥物反證-造模因素反推，值得研究者借鑒。李依潔等[20]采用4 周番瀉葉灌胃聯(lián)合2 周冰醋酸灌腸+固定器束縛、2 周球囊直腸刺激+夾尾刺激制備大鼠模型，從小鼠的行為學(xué)、糞便的含水量、Bristol 分型、腸道黏膜病理組織學(xué)、藥物反證等驗(yàn)證造模的成功。2）藥物注射法：采用腹腔注射利血平14 d，成功復(fù)制脾陽虛大鼠模型[21]。該模型操作簡(jiǎn)單、易于重復(fù)，但容易造成胃腸道損傷，與疾病的診斷不相符，所以有效性有待驗(yàn)證。

3 脾胃濕熱型

脾胃濕熱證多因過食肥甘厚味，或肝郁脾虛、運(yùn)化失常以致濕熱內(nèi)蘊(yùn)。根據(jù)此理論基礎(chǔ)，徐秋穎通過高糖高脂飲食+不可預(yù)知的應(yīng)激干預(yù)[22]，其中不可預(yù)知的干預(yù)方法為：每日隨機(jī)安排禁水、夾尾、45℃環(huán)境放置、4℃冰水游泳、晝夜顛倒、禁食及水平振蕩中的一種，建立脾胃濕熱型IBS 模型，采用大鼠的腹瀉指數(shù)、痛閾與腸道敏感性、體質(zhì)量、行為／心理（敞箱實(shí)驗(yàn)、糖水?dāng)z取量）等指標(biāo)證明此模型符合脾胃濕熱表現(xiàn)。譚潔等[23]將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組（脾胃濕熱）、模型組（脾胃濕熱+慢性應(yīng)激），采用慢性應(yīng)激+濕熱刺激法造模，濕熱刺激的方法在高糖高脂飲食的基礎(chǔ)上，再加上高溫高濕環(huán)境以及二鍋頭灌胃；慢性應(yīng)激的方法同上。造模后進(jìn)行對(duì)比研究，模型組大鼠的一般情況、體質(zhì)量、體溫、糞便性狀及行為等方面均出現(xiàn)符合脾胃濕熱證和脾胃濕熱型IBS 癥狀，并且腸道組織學(xué)無明顯改變，說明該模型在一定程度上與人類腹瀉型IBS（脾胃濕熱型）相似。相對(duì)來說，譚潔的造模方法更全面，除了飲食因素，還將環(huán)境因素考慮在內(nèi)，不失為一種可取的造模方法，但以上兩種造模方法均缺乏方藥驗(yàn)證該模型的準(zhǔn)確性。

4 肝郁氣滯型

此類型與心理因素密切相關(guān)，情志異常則肝失疏泄、氣機(jī)不暢，導(dǎo)致腸道功能紊亂，引起腹痛、腹脹、便秘等癥，多見于便秘型IBS?；谝陨现虏±碚摚壳案斡魵鉁C模型的復(fù)制多采用：1）不可預(yù)知的慢性應(yīng)激法[24]：冰水游泳5 min，45℃環(huán)境5 min，斷水、禁食24 h，夾尾刺激1 min，水平震蕩30 min（每分鐘160 次）。每種刺激3 次，刺激方法隨機(jī)安排，共造模21 d。許多研究均以此法造模，個(gè)別細(xì)節(jié)有變動(dòng)，但都大同小異。2）夾尾+饑飽失常+藥物反證法[25]：以夾尾使大鼠保持激怒狀態(tài)，同時(shí)隔天喂食，食量不限，食物為高脂飼料，共造模7 d，結(jié)合大鼠的生物學(xué)表現(xiàn)并用四磨湯判定造模成功。此模型還有直腸球囊擴(kuò)張刺激+限水法[26]，并從大鼠的行為學(xué)及腹部撤離反射驗(yàn)證模型的有效性，但是限水不是疾病形成的自然狀態(tài)，且未提及是否符合肝郁氣滯證的證候特點(diǎn)，故此方法尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。

5 小結(jié)

現(xiàn)有的IBS 模型，多是通過建立內(nèi)臟痛覺過敏或（和）施加不可預(yù)知的慢性應(yīng)激刺激建立，多數(shù)能從臨床表現(xiàn)、分子生物學(xué)角度模擬本病的變化。常用的束縛應(yīng)激法作用短暫，模型穩(wěn)定性欠佳，造模方法缺乏公認(rèn)性和普適性[27]；母嬰分離法是目前常用的研究腹瀉型IBS 病生理機(jī)制的一種動(dòng)物模型[28]，但該模型動(dòng)物個(gè)體差異性較大，很多研究中常必須疊加其他形式的應(yīng)激才能更全面地模擬IBS 的癥狀[29]，所以近年的研究，多以復(fù)合應(yīng)激法復(fù)制模型。

隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化的發(fā)展，研究中醫(yī)的特色理論和臨床療效，均要用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法。中醫(yī)病證結(jié)合動(dòng)物模型是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的重要環(huán)節(jié)[30]，也是保證研究結(jié)果真實(shí)性、可靠性、重現(xiàn) 性、創(chuàng)新性、先進(jìn)性及科學(xué)性的基本前提[31]，但目前缺乏公認(rèn)的病證結(jié)合動(dòng)物模型。

中醫(yī)動(dòng)物模型，造模方法主要分為三類：西醫(yī)病理模型、中醫(yī)病因模型和病證結(jié)合模型[32]，但病證結(jié)合模型不應(yīng)該是西醫(yī)病理模型和中醫(yī)病因模型簡(jiǎn)單的疊加，理想的病證結(jié)合模型，應(yīng)該從病因、癥狀、病程上兼具本病的特點(diǎn)[33]，復(fù)制的模型以能夠用公認(rèn)的方藥進(jìn)行反證，模型穩(wěn)定、能重復(fù)為原則。對(duì)模型的判定，當(dāng)以動(dòng)物表征參數(shù)與人體疾病原型、臨床證候的診斷依據(jù)基本相同乃至相同才能作為證候動(dòng)物模型造模成功的標(biāo)準(zhǔn)[34]，而實(shí)際上，模型終歸是模型，無法完全復(fù)制目標(biāo)疾病。為了評(píng)價(jià)模型模擬程度，現(xiàn)行學(xué)派主要分為動(dòng)物表征和動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)評(píng)價(jià)兩大體系，具體操作已有范例可循[35]。需要亟待解決的是：1）如何將中醫(yī)辨證應(yīng)用到動(dòng)物模型中，進(jìn)而評(píng)價(jià)所造模型的契合度；2）在模型的評(píng)價(jià)方面，可以加入公認(rèn)的客觀的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證；3）在進(jìn)行藥物反證時(shí)，應(yīng)考慮到方藥對(duì)不同證型具有重疊效果，顯示出辨證施治的特異性。

針對(duì)以上幾個(gè)問題，提出幾點(diǎn)建議：1）從國(guó)家層面加大中醫(yī)藥研究領(lǐng)域的投入，加強(qiáng)國(guó)內(nèi)外不同行業(yè)之間的交流與合作，吸收國(guó)內(nèi)外先進(jìn)的技術(shù)，逐步構(gòu)建規(guī)范化的病證結(jié)合模型體系；2）動(dòng)物模型的制備方法，應(yīng)具有中醫(yī)理論特色，將動(dòng)物特有的“四診”信息結(jié)合現(xiàn)代檢測(cè)手段，收集動(dòng)物模型的相關(guān)指標(biāo)，挖掘宏觀指標(biāo)與微觀指標(biāo)的相關(guān)性，逐步揭示中醫(yī)“證”物質(zhì)基礎(chǔ)，領(lǐng)悟中醫(yī)本質(zhì)，并靈活應(yīng)用到科研工作中；3）將中醫(yī)的“天人相應(yīng)”“七情”“六淫”等因素考慮在內(nèi)，模擬中醫(yī)疾病的發(fā)生發(fā)展過程，有助于構(gòu)建契合度更高的病證結(jié)合模型。

隨著對(duì)不同造模方法進(jìn)行對(duì)比，逐步優(yōu)化研究方案，建立公認(rèn)的重復(fù)性、穩(wěn)定性好的IBS 病證結(jié)合動(dòng)物模型，不僅有助于更加深入地研究IBS 的細(xì)胞、分子水平的機(jī)制，而且是中醫(yī)藥走上現(xiàn)代化的必經(jīng)之路。