粉葛化學(xué)成分的研究

孟曉偉， 賴云飛， 張普照， 邵 峰， 朱衛(wèi)豐， 劉榮華

(江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004)

粉葛為豆科葛屬植物甘葛藤PuerariathomsoniiBenth.的干燥根[1]，在全國(guó)分布廣泛，主產(chǎn)地為廣西、廣東、江西、云南、四川等地，并且在老撾、泰國(guó)、緬甸、不丹等亞洲國(guó)家也均有分布[2]，收載于2020年版《中國(guó)藥典》，是常用藥食同源中藥，具有解肌退熱、生津止渴、通經(jīng)活絡(luò)、解酒毒等功效，用于治療外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛、眩暈頭痛、中風(fēng)偏癱、胸痹心痛等疾病[1]，與葛根功能主治完全相同，并且食用歷史悠久，淀粉含量高，市場(chǎng)需求大，是制作葛粉的主要原料，也可作雜食食用。

目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)同屬植物葛根的藥效物質(zhì)及作用機(jī)制的關(guān)注較多。越來(lái)越多的研究表明，葛根、粉葛功能主治雖然相同，但兩者藥效物質(zhì)及臨床使用具有一定差異[3-5]，對(duì)粉葛藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究較少，僅Arao等[6]從中分離得到5個(gè)三萜皂苷類成分，而且大多集中于葛根素含量測(cè)定或質(zhì)量控制。因此，采用現(xiàn)代色譜分離技術(shù)方法對(duì)粉葛進(jìn)行系統(tǒng)化學(xué)成分研究，從中分離鑒定出29個(gè)化合物，其中11個(gè)為首次從該屬植物中分離得到。

1 材料

Avance Ⅲ 600型核磁共振儀(以TMS為內(nèi)標(biāo)，德國(guó)Bruker公司)；TripleTOF5600液相色譜高分辨串聯(lián)質(zhì)譜儀(ESI-MS，美國(guó)AB公司)；LC-3000型制備高效液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司)；安捷倫1260分析高效液相色譜儀、安捷倫1200制備高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)。制備型色譜柱(250 mm×21.2 mm，10 μm) (美國(guó)Phenomenex公司)；Sepax GP-Phenyl (250 mm×10 mm，10 μm) 半制備型色譜柱(蘇州賽分科技股份有限公司)；硅膠G(100～200、200～300目，青島海洋化工有限公司)；MCI (CHP-20P，日本三菱化學(xué)公司)；凝膠(Sephadex LH-20，瑞士Pharmacia Biotech公司)；反相硅膠C18(50 μm，日本富士公司)。粉葛購(gòu)于江西江中中藥飲片有限公司(產(chǎn)地廣西玉林)，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院葛菲教授鑒定為豆科葛屬植物甘葛藤PuerariathomsoniiBenth.的干燥根。半制備及制備液相所用試劑為色譜純；其他均為分析純。

2 提取與分離

取飲片45.0 kg，粉碎，乙醇加熱回流提取3次，濾過，合并濾液，減壓回收溶劑，得浸膏3.2 kg，加入10 L純凈水混懸，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，回收有機(jī)溶劑，分別得石油醚部位、乙酸乙酯部位0.18 kg、正丁醇部位1.28 kg、水部位。

乙酸乙酯部位分別用石油醚-丙酮(65∶35)、乙酸乙酯-甲醇(50∶50)進(jìn)行硅膠柱層析，薄層色譜檢測(cè)合并相同流分，得Fr.1 (59.6 g)、Fr.2 (74.0 g)、Fr.3 (71.3 g)、Fr.4 (27.9 g)。Fr.1經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱，二氯甲烷∶甲醇(1∶1)洗脫，得流分Fr.1.1～Fr.1.5，F(xiàn)r.1.3經(jīng)制備反相HPLC，乙腈-水 (25∶75～55∶45)洗脫，得流分Fr.1.31～Fr.1.38，F(xiàn)r.1.34經(jīng)半制備反向HPLC，乙腈-水(20∶80)洗脫，得到化合物1(6.5 mg)；Fr.1.35經(jīng)半制備反向HPLC，乙腈-水(35∶65)洗脫，得到化合物2(7.0 mg)、3(6.3 mg)、4(7.1 mg)；Fr.1.37經(jīng)半制備反向HPLC，乙腈-水(45∶55)洗脫，得到化合物5(7.7 mg)。Fr.2～Fr.4依次經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜脫色、制備反相HPLC分離、半制備反相HPLC純化，乙腈-水(40∶60～70∶30)洗脫。最終，從Fr.2中分離得到9個(gè)化合物，分別為6(8.0 mg)、7(6.1 mg)、8(7.5 mg)、9(7.0 mg)、10(6.8 mg)、11(6.5 mg)、12(8.5 mg)、14(7.2 mg)、13(7.0 mg)；從Fr.3中分離得到2個(gè)化合物，分別為15(8.0 mg)、16(8.9 mg)；從Fr.4中分離得到化合物17(8.2 mg)。

正丁醇部位經(jīng)硅膠柱，乙酸乙酯-甲醇(40∶60～20∶80)洗脫，TLC分析合并相同流分，得到Fr.5(99.3 g)、Fr.6(700.0 g)、Fr.7(163.7 g)、Fr.8(39.0 g)。Fr.5～Fr.7依次經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱脫色、制備反相HPLC分離、半制備反相HPLC純化，甲醇-水 (30∶70～70∶30)洗脫。最終，從Fr.5中分離得到8個(gè)化合物，分別為18(6.0 mg)、19(7.5 mg)、20(7.8 mg)、21(6.4 mg)；從Fr.6中分離得到4個(gè)化合物，分別為22(8.3 mg)、23(7.0 mg)、24(9.0 mg)、25(9.5 mg)；從Fr.7中分離得到4個(gè)化合物，分別為26(6.7 mg)、27(8.0 mg)、28(8.1 mg)、29(10.8 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色晶體，分子式C10H8O3，ESI-MSm/z: 177.054 5[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：7.80 (2H, dd,J=7.8, 1.9 Hz, H-2′,6′), 7.53～7.45 (3H, m, H-3′,4′,5′), 6.58 (1H, s,H-4), 6.54 (1H, s,H-2);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：173.4 (C-1), 115.6 (C-2), 165.4 (C-3), 99.9 (C-4), 131.0 (C-1′), 129.2 (C-2′,6′), 130.0 (C-3′,5′),132.5 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，鑒定為5-hydroxy-4-phenyl-2(5H)-furanone。

化合物2：無(wú)色油狀物，[α]D20=+23.5 (c=0.10, MeOH)，分子式C9H16O3，ESI-MSm/z: 173.117 1[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：6.76 (1H, dd,J=15.6, 5.0 Hz, H-3), 5.80 (1H, dd,J=15.6, 1.6 Hz, H-2), 4.06 (1H, dt,J=7.1, 5.0, 1.6 Hz, H-4), 1.42～1.12 (8H, m, H-5～8), 0.75 (3H, t,J=6.9 Hz, H-3～9);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：170.1 (C-1), 152.7 (C-2), 120.9 (C-3), 71.6 (C-4), 37.5 (C-5), 32.9 (C-6), 26.1 (C-7), 23.6 (C-8), 14.4 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，鑒定為(+)-(4S)-(2E)-4-羥基-2-壬烯酸。

化合物3：無(wú)色針狀結(jié)晶，分子式C9H10O3，ESI-MSm/z: 167.070 4[M+H]+。1H-NMR (氘代甲醇, 600 MHz)δ：7.86 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3, 5), 6.80 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2, 6), 4.29 (2H, q,J=7.1 Hz, -CH2-), 1.35 (3H, d,J=7.1 Hz, -CH3);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：168.3 (C=O), 122.5 (C-1), 132.7 (C-2, 6), 116.1 (C-3, 5), 163.5 (C-4), 61.7 (-OCH2-), 14.7 (-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，鑒定為尼泊金乙酯。

化合物4：白色粉末，分子式C9H10O3，ESI-MSm/z: 167.070 2[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：7.68 (1H, d,J=15.8 Hz, H-3), 7.48 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.81 (2H, d,J=8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.39 (1H, d,J=16.0 Hz, H-2), 4.73 (2H, s, H-1″), 3.75 (3H, s,-OCH3);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：168.3 (C-1), 114.0 (C-2), 147.7 (C-3), 127.0 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.9 (H-3′, 5′), 161.6 (C-4′), 61.6 (C-1″), 170.4 (C-2″), 52.6 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，鑒定為(E)-2-methoxy-2-oxethyl-3-(4-hydroxyphenyl)acrylate。

化合物5：白色粉末，分子式C16H12O4，ESI-MSm/z: 269.081 1[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.17 (1H, s, H-2), 8.10 (1H, d,J=9.5 Hz, H-5), 7.36 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 7.07～ 7.04 (2H, m,H-6, 8), 6.84 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 3.93 (3H, s,-OCH3);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.9 (C-2), 126.2 (C-3), 178.1 (C-4), 128.2 (C-5), 166.1 (C-7), 101.2 (C-8), 158.8 (C-9), 119.0 (C-10), 124.1 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-6, 3′, 5′), 159.8 (C-4′), 56.6 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，鑒定為異芒柄花素。

化合物6：白色粉末，分子式C16H12O5，ESI-MSm/z: 285.076 0[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.15 (1H, s, H-2), 8.05 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 7.15 (1H, brs, H-2′), 6.94 (2H, m, H-5′, 6′), 6.84 (2H, m, H-6, 8), 3.88 (3H, s,-OCH3);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.9 (C-2), 124.8 (C-3), 178.1 (C-4), 128.5 (C-5), 116.2 (C-6), 164.6 (C-7), 103.2 (C-8), 159.8 (C-9), 116.5 (C-10), 126.0 (C-1′), 118.2 (C-2′), 147.8 (C-3′), 148.8 (C-4′), 114.1 (C-5′), 122.8 (C-6′), 56.4 (-OCH3)。與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，鑒定為毛蕊異黃酮。

化合物7：無(wú)色膠體，分子式C22H26O8，ESI-MSm/z: 419.168 2[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：6.64 (4H, s,H-2′, 6′，2″, 6″), 4.70 (2H, d,J=3.7 Hz, H-2, 6), 4.25 (2H, m, H-4β, 8β), 3.87 (2H, m, H-4α, 8α), 3.83 (12H, s, 4×-OCH3), 3.13 (2H, m, H-1, 5);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：55.5(C-1, 5), 87.6(C-2, 6), 72.8(C-4, 8), 133.1(C-1′, 1″), 104.5(C-2′, 6′, 2″, 6″), 149.3 (C-3′, 5′, 3″, 5″), 136.1(C-4′, 4″), 56.8(4×-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，鑒定為丁香脂素。

化合物8：黃色油狀物，分子式C16H16O5，ESI-MSm/z: 289.107 3[M+H]+。1H-NMR(CD3OD, 600 MHz)δ：7.38 (1H, d,J=8.7 Hz, H-5), 6.84 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.61 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.57 (1H, dd,J=8.7, 2.5 Hz, H-6), 6.51 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 6.16 (1H, d,J=1.3 Hz, H-3), 5.95 (1H, ddd,J=6.0, 3.7, 1.3 Hz, H-1″), 3.83 (3H, s,-OCH3), 3.25 (1H, dd,J=14.6, 3.6 Hz, H-2″β), 2.81 (1H, dd,J=14.6, 5.9 Hz, H-2″α);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ：168.1 (C-2), 113.3 (C-3), 176.9 (C-4), 132.1 (C-5), 107.7 (C-6), 165.1 (C-7), 102.4 (C-8), 159.5 (C-9), 111.8 (C-10), 127.5 (C-1′), 131.8 (C-2′, 6′), 115.8 (C-3′, 5′), 157.3 (C-4′), 85.8 (C-1″), 39.6 (C-2″), 55.9 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，鑒定為lobatchrosin。

化合物9：無(wú)定形粉末，分子式C15H14O5，ESI-MSm/z: 275.091 5[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：7.65 (1H, d,J=8.9 Hz, H-6′), 6.97 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2, 6), 6.63 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3, 5), 6.31 (1H, dd,J=8.9, 2.3 Hz, H-5′), 6.24 (1H, d,J=2.3 Hz, H-3′), 5.11 (1H, dd,J=7.6, 4.8 Hz, H-α), 2.98 (1H, dd,J=14.0, 4.8 Hz, H-β), 2.79 (1H, dd,J=14.0, 7.6 Hz, H-β);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：205.0 (C=O), 129.3 (C-1), 131.5 (C-2, 6), 116.1 (C-3, 5), 157.1 (C-4), 74.4 (C-α), 42.2(C-β), 112.2 (C-1′), 166.8 (C-2′), 103.8 (C-3′), 166.8 (C-4′), 109.4 (C-5′), 133.6 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，鑒定為4,2′,4′-tetrahydroxydihydrochalcone。

化合物10：無(wú)色針晶，分子式C16H14O4，ESI-MSm/z: 271.096 6[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：7.70 (1H, d,J=8.7 Hz, H-5), 6.98 (2H, d,J=8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.65 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.49 (1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 6.46 (1H, dd,J=8.7, 2.1 Hz, H-6), 5.22 (2H, dd,J=8.0, 3.4 Hz, H-2), 3.90 (3H, s,7-OCH3), 2.96 (1H, dd,J=14.1, 3.4 Hz, H-3β), 2.54 (1H, dd,J=14.1, 8.0 Hz, H-3α);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：78.5 (C-2), 41.1 (C-3), 201.7 (C-4), 134.5 (C-5), 109.6 (C-6), 162.9 (C-7), 99.9 (C-8), 165.8 (C-9), 117.6 (C-10), 130.3 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 115.9 (C-3′, 5′), 156.9 (C-4′), 56.1 (7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，鑒定為4′-hydroxy-7-methoxyflavanone。

化合物11：黃色粉末，分子式C15H14O5，ESI-MSm/z: 275.091 5[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：7.28 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 6.84 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.60 (2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.43～6.39 (2H, m,H-6, 8), 6.10 (1H, d, J=1.2 Hz, H-3), 5.94～5.89 (1H, m, H-11), 3.24 (1H, dd,J=14.6, 3.6 Hz, H-12β), 2.79 (1H, dd,J=14.6, 6.0 Hz, H-12α);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：168.5 (C-2), 112.4 (C-3), 177.1 (C-4), 132.2 (C-5), 109.2 (C-6), 159.8 (C-7), 103.9 (C-8), 163.3 (C-9), 110.7 (C-10), 85.8 (C-11), 39.7 (C-12), 127.7 (C-1′), 131.8 (C-2′, 6′), 115.8 (C-3′, 5′), 157.2 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，鑒定為mirkoin。

化合物12：黃色固體，分子式C15H10O5，ESI-MSm/z: 271.060 3[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.02 (1H, s, H-2), 7.36 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.31 (1H, d,J=2.1 Hz, H-6), 6.20 (1H, d,J=2.1 Hz, H-8);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.8 (C-2), 123.3 (C-3), 182.2 (C-4), 163.8 (C-5), 100.2 (C-6), 166.1 (C-7), 94.8 (C-8), 158.8 (C-9), 106.2 (C-10), 124.7 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.2 (C-3′, 5′), 159.7 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，鑒定為染料木素。

化合物13：白色無(wú)定形粉末，分子式C12H12O6，ESI-MSm/z: 253.070 7[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：7.61 (1H, d,J=15.9 Hz, H-7), 7.05 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2), 6.96 (1H, dd,J=8.1, 2.0 Hz, H-6), 6.78 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5), 6.32 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8), 4.73 (2H, s, H-10), 3.75 (3H, s,-OCH3);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：127.5 (C-1), 115.2 (C-2), 146.9 (C-3), 149.9 (C-4), 116.5 (C-5), 123.2 (C-6), 148.1 (C-7), 113.9 (C-8), 168.4 (C-9), 61.6 (C-10), 170.4 (C-11), 52.6(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，鑒定為caffeoylglycolic acid methyl ester。

化合物14：黃色固體，分子式C20H18O4，ESI-MSm/z: 323.128 3[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.06 (1H, s, H-2), 8.02 (1H, d,J=8.7 Hz, H-5), 7.19 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2′), 7.14 (1H, dd,J=8.2, 2.1 Hz, H-6′), 6.91 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6), 6.82 (1H, s, H-8), 6.78 (1H, d,J=8.2 Hz, H-5′), 5.33 (1H, t,J=7.3 Hz, H-2″), 3.31 (1H, m, H-1″), 1.71 (6H, s, H-4″, 5″);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.6 (C-2), 126.2 (C-3), 178.3 (C-4), 128.7 (C-5), 116.4 (C-6), 164.6 (C-7), 103.2 (C-8), 156.4 (C-9), 118.2 (C-10), 129.3 (C-1′), 131.4 (C-2′), 133.0 (C-3′), 159.8 (C-4′), 115.7 (C-5′), 128.5 (C-6′), 26.0 (C-1″), 123.9 (C-2″), 124.1 (C-3″), 17.9 (C-4″), 29.3 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道基本一致，鑒定為新補(bǔ)骨脂異黃酮。

化合物15：淡黃色粉末，分子式C23H22O10，ESI-MSm/z: 459.129 2[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.19 (1H, s, H-2), 8.13 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 7.38 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 7.20 (1H, d,J=2.3 Hz, H-8), 7.18 (1H, dd,J=8.8, 2.3 Hz, H-6), 6.85 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.10 (1H, d,J=7.4 Hz, H-1″), 4.46 (1H, dd,J=12.0, 2.2 Hz, H-6″β), 4.24 (1H, dd,J=11.9, 6.8 Hz, H-6″α), 3.77 (1H, ddd,J=9.3, 6.8, 2.2 Hz, H-5″),3.55～3.51 (2H, m, H-2″, 3″), 3.43～3.38 (1H, m, H-2″), 2.08 (3H, s, CH3-CO);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：155.0 (C-2), 126.2 (C-3), 178.0 (C-4), 128.3 (C-5), 117.0 (C-6), 163.3 (C-7), 104.9 (C-8), 159.1 (C-9), 120.2 (C-10), 124.0 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 158.8 (C-4′), 101.6 (C-1″), 74.7 (C-2″), 77.7 (C-3″), 71.5 (C-4″), 75.7 (C-5″), 64.7 (C-6″), 172.7(CH3-CO), 20.8(CH3-CO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，鑒定為6″-O-乙酰黃豆苷。

化合物16：無(wú)色針晶，分子式C15H10O4，ESI-MSm/z: 255.065 4[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.12 (1H, s, H-2), 8.04 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 7.35 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.93 (1H, dd,J=8.8, 2.2 Hz, H-6), 6.83 (2H, dd,J=8.6 Hz, H-3′, 5′),6.84(1H, d,J=2.2 Hz, H-8);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.7 (C-2), 124.3 (C-3), 178.2 (C-4), 128.5 (C-5), 116.4 (C-6), 164.6 (C-7), 103.2 (C-8), 159.8 (C-9), 118.2 (C-10), 125.9 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.2 (C-3′, 5′),158.7 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道基本一致，鑒定為大豆苷元。

化合物17：白色粉末，分子式C26H28O14，ESI-MSm/z: 565.156 2[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.10 (1H, s, H-2), 7.35 (2H, d,J=8.0 Hz, C-2′, 6′), 6.83 (2H, d,J=8.0 Hz, H-3′, 5′), 6.26 (1H, s, H-6), 4.98 (1H, d,J=2.3 Hz, H-1″), H-1?與溶劑峰重疊, 4.02～3.45 (12H, m,H-2″～6″,2?～5?);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.8 (C-2), 124.3 (C-3), 182.5 (C-4), 163.4 (C-5), 100.6 (C-6), 164.8 (C-7), 104.2 (C-8), 158.7 (C-9, 4′), 106.4 (C-10), 123.2 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 75.0 (C-1″), 73.0 (C-2″), 80.6 (C-3″),71.7 (C-4″), 65.5 (C-5″), 69.0 (C-6″), 111.0 (C-1?), 78.0 (C-2?′), 79.9 (C-3?), 75.5 (C-4?), 81.3 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道基本一致，鑒定為染料木素-8-C-芹菜糖(1→6)葡萄糖苷。

化合物18：無(wú)色晶體，分子式C10H19N3O2，ESI-MSm/z: 214.155 1[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：4.19 (1H, ddd,J=9.9, 6.6, 2.1 Hz, H-9), 4.02 (1H, t,J=2.3 Hz, H-6), 3.55 (1H, dt,J=12.2, 8.2 Hz, H-3β), 3.51～3.45 (1H, m, H-3α), 2.47 (1H, pd,J=7.1, 2.5 Hz, H-10), 2.33～2.28 (1H, m, H-5β), 2.03～1.98 (1H, m, H-4β), 1.93 (2H, m, H-4α, 5α), 1.08 (3H, d,J=7.3 Hz, H-11), 0.92 (3H, d,J=6.9 Hz, H-12);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：172.6 (C-1), 46.2 (C-3), 23.3 (C-4), 29.5 (C-5), 61.5 (C-6), 167.6 (C-7), 60.0 (C-9), 29.9 (C-10), 18.9 (C-11), 16.7 (C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報(bào)道基本一致，鑒定為L(zhǎng)-丙酰-L-脯氨酸胺。

化合物19：黃色粉末，分子式C26H26O9，ESI-MSm/z: 483.165 4[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.16 (1H, s, H-2), 8.08 (1H, d,J=9.4 Hz, H-5), 7.36 (2H, d,J=8.1 Hz, H-2′,6′), 7.15 (2H, m, H-6, 8), 6.99 (1H, dd,J=15.5, 6.9 Hz, H-3?), 6.84 (2H, d,J=8.1 Hz, H-3′, 5′), 5.89 (1H, dd,J=15.5, 1.6 Hz, H-2?), 5.09 (1H, d,J=7.0 Hz, H-1?), 4.51 (1H, dd,J=12.0, 2.2 Hz, H-6″β), 4.29 (1H, dd,J=11.9, 7.3 Hz, H-6″α), 3.80 (1H, m, H-4″), 3.56～3.52 (2H, m, H-5″, 2″), 3.41 (1H, m, H-3″), 1.86 (3H, dd,J=6.9, 1.4 Hz, H-4?)；13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：155.0 (C-2), 126.2 (C-3), 177.9 (C-4), 128.3 (C-5), 117.0 (C-6), 163.2 (C-7), 104.9 (C-8), 159.0 (C-9), 120.2 (C-10), 124.0 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 158.8 (C-4′), 101.5 (C-1″), 74.7 (C-2″), 77.7 (C-3″), 71.7 (C-4″), 75.6 (C-5″), 64.6 (C-6″), 167.8 (C-1?), 123.2 (C-2?), 147.0 (C-3?), 18.3 (C-4?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報(bào)道基本一致，鑒定為6″-巴豆酰基大豆苷。

化合物20：無(wú)色針晶，分子式C21H20O10，ESI-MSm/z: 433.113 6[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.07 (1H, s, H-2), 7.34 (2H, d,J=8.0 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (2H, d,J=8.0 Hz, H-3′, 5′), 6.27 (1H, s, H-6), 4.12～3.42 (6H, m, H-2″～6″);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.7 (C-2), 124.3 (C-3), 182.4 (C-4), 164.6 (C-5), 100.3 (C-6), 163.3 (C-7), 104.3 (C-8), 157.9 (C-9), 106.4 (C-10), 123.1 (C-1′), 131.3 (C-2′, 6′), 1162 (C-3′, 5′), 158.7 (C-4′), 75.3 (C-1″), 72.8 (C-2″), 80.0 (C-3″), 71.7 (C-4″), 82.5 (C-5″), 62.8 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]報(bào)道基本一致，鑒定為8-β-D-glucopyranosylgenistein。

化合物21：淡黃色粉末，分子式C8H14O4，ESI-MSm/z: 175.096 5[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：4.09 (2H, t,J=6.6 Hz，H-1′), 2.58 (4H, brs,H-2, H-3), 1.64～1.59 (2H, m, H-2′), 1.43～1.37 (2H, m, H-3′), 0.94 (3H, t,J=7.4 Hz, H-4′);13C-NMR (CD3OD, 150 Hz)δ：174.4 (C-1), 30.1 (C-2), 29.7 (C-3), 176.1 (C-4), 65.5 (C-1′), 31.8 (C-2′), 20.1 (C-3′), 14.0 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]報(bào)道基本一致，鑒定為丁二酸單丁酯。

化合物22：無(wú)色針晶，分子式C21H20O9，ESI-MSm/z: 417.118 7[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.20 (1H, s, H-2), 8.14 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.37 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 7.24 (1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 7.21 (1H, dd,J=8.9, 2.4 Hz, H-6), 6.84 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.10 (1H, d,J=7.5 Hz, H-1″), 3.92 (1H, dd,J=12.1, 2.3 Hz, H-6″β), 3.71 (1H, dd,J=12.1, 5.8 Hz, H-6″α), 3.56 ～3.52 (1H, m, H-5″), 3.52～3.50 (1H, m, H-2″), 3.50～3.48 (1H, m, H-3″), 3.42～3.38 (1H, m, H-4″);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：155.1 (C-2), 126.2 (C-3), 178.1 (C-4), 128.3 (C-5), 117.1 (C-6), 163.5 (C-7), 104.9 (C-8), 159.3 (C-9), 120.2 (C-10), 124.1 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 158.8 (C-4′), 101.8 (C-1″), 74.7 (C-2″), 77.9 (C-3″), 71.2 (C-4″), 78.4 (C-5″), 62.4 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，鑒定為大豆苷。

化合物23：無(wú)色針晶，分子式C26H28O14，ESI-MSm/z: 565.155 8[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.15 (1H, s, H-2), 7.38 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 6.72 (1H, d,J=2.2 Hz, H-8), 6.52 (1H, d,J=2.2 Hz, H-6), 4.98 (2H, dd,J=7.7 Hz, H-1″), 4.96 (1H, d,J=2.5 Hz, H-1?), 4.07～4.00 (1H, m, H-6″β, 4?β), 3.94 (1H, d,J=2.5 Hz, H-2″), 3.77 (1H, d,J=9.6 Hz, H-4?α), 3.68 (1H, m, H-5″), 3.63～3.57 (3H, m, H-6″α，5?β，5?α), 3.48～3.46 (2H, m, H-2″, 3″), 3.35～3.31 (1H, m, H-4″);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：155.4 (C-2), 124.9 (C-3), 182.5 (C-4), 163.4 (C-5), 101.2 (C-6), 164.6 (C-7), 96.0 (C-8), 159.2 (C-9), 108.0 (C-10), 123.1 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 158.9 (C-4′), 101.6 (C-1″), 74.7 (C-2″), 77.8 (C-3″), 71.6 (C-4″), 77.2 (C-5″), 69.1 (C-6″), 111.2 (C-1?), 78.2 (C-2?), 80.5 (C-3?), 75.0 (C-4?), 65.7 (C-5?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[28]報(bào)道基本一致，鑒定為染料木素-7-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物24：無(wú)色結(jié)晶，分子式C21H20O10，ESI-MSm/z: 433.113 6[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.13 (1H, s, H-2), 7.38 (2H, d,J=8.0 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (2H, d,J=8.0 Hz, H-3′, 5′), 6.69 (1H, d,J=2.2 Hz, H-8), 6.50 (1H, d,J=2.2 Hz, H-6), 5.04 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″), 3.90 (1H, dd,J=12.2, 2.2 Hz, H-6″β), 3.70 (1H, dd,J=12.2, 5.6 Hz, H-6″α), 3.53～3.49 (1H, m, H-5″), 3.49～ 3.46 (2H, m), 3.42～3.38 (1H, m, H-4″);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：155.3 (C-2), 125.0 (C-3), 182.5 (C-4), 163.6 (C-5), 101.1 (C-6), 164.8 (C-7), 95.8 (C-8), 159.3 (C-9), 108.0 (C-10), 123.1 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 158.9 (C-4′), 101.6 (C-1″), 74.7 (C-2″), 77.8 (C-3″), 71.2 (C-4″), 78.4 (C-5″), 62.4 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，鑒定為染料木苷。

化合物25：白色粉末，分子式C22H22O9，ESI-MSm/z: 431.134 1[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.13 (1H, s, H-2), 7.38 (2H, d,J=8.0 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (2H, d,J=8.0 Hz, H-3′, 5′), 6.69 (1H, d,J=2.2 Hz, H-8), 6.50 (1H, d,J=2.2 Hz, H-6), 5.04 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″), 3.90 (1H, dd,J=12.2, 2.2 Hz, H-6″β), 3.70 (1H, dd,J=12.2, 5.6 Hz, H-6″α), 3.53～3.49 (1H, m, H-5″), 3.49～3.46 (2H, m, H-2″, 3″), 3.42～3.38 (1H, m, H-4″);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：155.3 (C-2), 125.0 (C-3), 182.5 (C-4), 163.6 (C-5), 101.1 (C-6), 164.8 (C-7), 95.8 (C-8), 159.3 (C-9), 108.0 (C-10), 123.1 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 116.3 (C-3′, 5′), 158.9 (C-4′), 101.6 (C-1″), 74.7 (C-2″), 77.8 (C-3″), 71.2 (C-4″), 78.4 (C-5″), 62.4 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29]報(bào)道基本一致，鑒定為芒柄花苷。

化合物26：白色固體，分子式C9H12N2O，ESI-MSm/z: 165.102 4[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：7.39～7.21 (5H, m, H-2～6), 3.77 (1H, dd,J=9.0, 4.3 Hz, H-2′), 3.33 (1H, m, H-3′β), 2.99 (1H, dd,J=14.6, 9.0 Hz, H-3′α);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：137.3 (C-1), 130.0 (C-2, 6), 130.4 (C-3, 5), 128.4 (C-4),173.7 (C-1′), 57.6 (C-2′), 38.3 (C-3′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[30]報(bào)道基本一致，鑒定為L(zhǎng)-苯丙氨酸。

化合物27：黃色粉末，分子式C27H30O14，ESI-MSm/z: 579.171 8[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.20 (1H, s, H-2), 8.05 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 7.38 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.99 (1H, d,J=8.8 Hz, H-6), 6.85 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.08 (1H, d,J=10.0 Hz, H-1″), 4.95 (1H, d, J=2.4 Hz, H-1?), 4.16 (1H,brs, H-2″), 3.99 (1H, dd,J=11.7, 4.4 Hz, H-6″β), 3.85 (1H, d,J=11.2 Hz, H-6″α), 3.72 (1H, d,J=10.4 Hz,H-6?β), 3.69～3.60 (4H, m，H-3″, 5″, 3?, 5?), 3.53 (1H, t,J=8.8 Hz, 6?α), 3.37 (1H, dd,J=9.6, 3.8 Hz, H-2?), 3.28 (1H, d,J=9.4 Hz, H-4″)；13C-NMR (CD3OD,150 MHz)δ：154.5 (C-2), 125.6 (C-3), 178.3 (C-4), 128.1 (C-5), 116.2 (C-6, 3′, 5′), 163.2 (C-7), 113.0 (C-8), 158.7 (C-9), 118.4 (C-10), 124.2 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 75.6 (C-1″), 72.8 (C-2″), 80.0 (C-3″), 71.5 (C-4″, 4?), 81.4 (C-5″), 67.6 (C-6″), 100.1 (C-1?), 73.8 (C-2?), 75.2 (C-3?), 73.6 (C-5?), 62.4 (C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[31]報(bào)道基本一致，鑒定為6″-O-α-D-glucopyranosylpuerarin。

化合物28：淡黃色粉末，分子式C26H28O16，ESI-MSm/z: 597.115 2[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.18 (1H, s, H-2), 8.06 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.38 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.99 (1H, d,J=8.9 Hz, H-6), 6.85 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.10 (1H, d,J=10.0 Hz, H-1″), 4.97 (1H, d,J=2.6 Hz, H-1?), 4.01 (1H, d,J=11.1 Hz, H-6″β), 3.97 (1H, d,J=9.7 Hz, H-4?β), 3.90 (1H, d,J=2.5 Hz, H-2?), 3.76 (2H, m, H-6″α，H-4?α), 3.62～3.50 (6H, m, H-2″～5″, 5?α, 5?β);13C-NMR (CD3OD,150 MHz)δ：154.5 (C-2), 125.5 (C-3), 178.3 (C-4), 128.1 (C-5), 116.2 (C-6, 3′, 5′), 162.9 (C-7), 112.9 (C-8), 158.6 (C-4′, 9), 118.4 (C-10), 124.2 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 75.8 (C-1″), 73.1 (C-2″), 79.7 (C-3″), 71.5 (C-4″), 81.4 (C-5″), 68.9 (C-6″), 111.0 (C-1?), 78.0 (C-2?), 80.5 (C-3?), 75.0 (C-4?), 65.5 (C-5?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[31]報(bào)道基本一致，鑒定為大豆苷元-8-C-芹菜糖(1→6)葡萄糖苷。

化合物29：白色粉末，分子式C21H20O9，ESI-MSm/z: 417.118 7[M+H]+。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz)δ：8.19 (1H, s, H-2), 8.06 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.37 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.99 (1H, d,J=8.9 Hz, H-6), 6.85 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.10 (1H, d,J=9.9 Hz, H-1″), 4.13～3.46 (6H, m, H-2″～6″);13C-NMR (CD3OD, 150 MHz)δ：154.5 (C-2), 125.6 (C-3), 178.3 (C-4), 128.1 (C-5), 116.2 (C-3′, 5′, 6), 163.0 (C-7), 113.2 (C-8), 158.7 (C-4′, C-9), 118.5 (C-10), 124.2 (C-1′), 131.4 (C-2′, 6′), 75.6 (C-1″), 73.0 (C-2″), 80.0 (C-3″), 71.7 (C-4″), 82.8 (C-5″), 62.8 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[32]報(bào)道基本一致，鑒定為葛根素。

4 討論

采用正相和反相硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、反相高效液相色譜等分離純化方法，結(jié)合核磁、質(zhì)譜等波譜技術(shù)，對(duì)粉葛進(jìn)行化學(xué)成分研究，結(jié)果從中分離鑒定出29個(gè)化合物，包括8個(gè)異黃酮苷元(5、6、8、11、2、14、16、29)、10個(gè)異黃酮苷(15、17、19、20、22～25、27、28)、5個(gè)有機(jī)酸酯(2～4、13、21)、2個(gè)氨基酸、4個(gè)黃烷酮等其他成分，其中化合物1、2、4、7、9、11、13、18、19、21、26為首次從葛屬植物中分離得到。

葛屬植物所含成分的結(jié)構(gòu)類型主要為異黃酮，葛根、粉葛主要成分類型相同，均為葛根素、大豆苷等異黃酮類，但前者含有葛酚苷類特征性成分，而后者目前暫未發(fā)現(xiàn)[5]。另外，葛根、粉葛的藥典標(biāo)準(zhǔn)除葛根素含量的要求不同外，功效主治、主要化學(xué)成分結(jié)構(gòu)類型和含量均相同，但兩者成分種類也存在一些差異，是否可以此為依據(jù)進(jìn)行區(qū)別尚不明確，有待進(jìn)一步研究。