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    金桂花干花提取物的急性毒性及鎮(zhèn)痛、 抗炎作用的研究

    2022-12-28 05:02:02龐元美盧紅梅王斌覃培松韋燕清韋雪
    廣西農(nóng)學(xué)報(bào) 2022年4期
    關(guān)鍵詞:干花藥組生理鹽水

    龐元美 盧紅梅 王斌 覃培松 韋燕清 韋雪

    (1.廣西警察學(xué)院,廣西 南寧 530028;2.廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué),廣西 南寧 530007)

    金桂花(Osmanthus fragransvar. thunbergii Makino)屬木犀科木犀屬植物 ,廣泛栽種于南方地區(qū),藥材資源非常豐富。為溫帶樹種,葉對(duì)生,葉面光滑,多呈橢圓或長(zhǎng)橢圓形,花簇生,金黃色,味香持久。藥食同源,可觀賞、食用和藥用;花常用于制作點(diǎn)心,釀酒,茶水及香料等;有藥用價(jià)值的部分主要為桂花的花、果實(shí)及種子等。[1]古有記載:“治筋骨疼 痛,氣痛,散郁”和 “貼牙痛,取桂樹根上皮用”等?,F(xiàn)代研究表明桂花有抗氧化、增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)血脂、抗菌、抗癌、抗氧化及護(hù)肺等功效。[2-8]民間在風(fēng) 火牙疼方面有用桂花根莖來(lái)治療。目前大多數(shù)的報(bào)道主要是對(duì)桂花的根莖葉進(jìn)行了研究,有關(guān)桂花干花進(jìn)行研究的報(bào)道極少。本研究采用最大耐受劑量、醋酸扭體法及耳廓腫脹法,探討金桂花干花提取物的急性毒性及鎮(zhèn)痛、抗炎作用,以期為金桂花的開發(fā)提供參考數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 動(dòng)物

    昆明種小鼠,SPF級(jí)別,每只體重18~22 g,雌雄兼用,購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

    1.1.2 試劑

    二甲苯(批號(hào):2020年3月5日,天津市富寧精細(xì)化工);無(wú)水乙醇(批號(hào):170505,西隴科學(xué));冰醋酸(批號(hào):20170221,廣東光華科技)。

    1.1.3 藥材

    金桂花干花提取物采摘自廣西境內(nèi);阿司匹林腸溶片(批號(hào):191203,舒泰神生物制藥);生理鹽水(四川科倫藥業(yè))。

    1.1.4 儀器

    電子天平(FB203C,上海佑科儀器儀表);電熱套(KDM型,山東鄄城華魯);循環(huán)水式真空泵(SHZ-D(Ⅲ),上海驚精其儀);Dura超純水儀(上海和泰儀器);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-2000B,上海亞榮);打孔器(直徑0.6 cm)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 金桂花干花提取物的制備

    稱取金桂花干花500 g,用4 L、60%乙醇浸泡48 h。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回流提取2 h,過(guò)濾除去藥渣,合并提取液。提取液在50℃減壓回收乙醇,濃縮得浸膏113.12 g,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2 藥物給藥濃度的配制

    金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組分別1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg,用生理鹽水配制成低、中及高三種不同的濃度,即分別為0.05 g/mL、 0.1 g/mL及0.2 g/mL。阿司匹林腸溶片去外層包衣后研成細(xì)粉,成年人用量0.75~1.5 g/次,體重 70 kg,再根據(jù)動(dòng)物劑量換算方法計(jì)算,小鼠給藥劑量范圍為0.132~0.264 g/kg/次,本次實(shí)驗(yàn)阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組設(shè)計(jì)為0.15 g/kg,用生理鹽水配置成7.5 mg/mL。[9]

    1.2.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)

    預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示金桂花干花提取物毒性極低,故本實(shí)驗(yàn)采用最大耐受劑量進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)[10],取20 只健康小鼠,雌雄各半,按性別和體重隨機(jī)分為兩組,金桂花干花提取物給藥組和生理鹽水組,給藥組劑量為5 g/kg,配成0.25 g/mL濃度,兩組小鼠按0.2 mL/10 g灌胃給藥,連續(xù)觀察14天,每天觀察和記錄小鼠的活動(dòng)、精神狀態(tài)、攝食量、體重變化、排泄物及死亡等方面情況。觀察期滿將存活的小鼠處死,解剖并用肉眼觀察各主要器官(心、肝、肺、腎及脾等)的情況。

    1.2.4 醋酸扭體法實(shí)驗(yàn)[11]

    小鼠60只,隨機(jī)分為5組,每組12只,即生理鹽水組、阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組,三組金桂花干花提取物不同給藥組(即低劑量組、中劑量組及高劑量組)。每天稱重小鼠一次,每只小鼠按體重灌胃給藥,0.2 mL/10 g給予相應(yīng)的藥,生理鹽水組給予生理鹽水,連續(xù)7 d。末次給藥30 min后,用濃度為0.6%的新配制的醋酸溶液對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射,每只小鼠注射0.2 mL,記錄小鼠的扭體反應(yīng)數(shù)量,記錄15 min,并計(jì)算小鼠的扭體抑制率,即疼痛抑制率。

    疼痛抑制率(%)=(生理鹽水組平均扭體次 數(shù)—給藥組平均扭體次數(shù))/生理鹽水組平均扭體次數(shù)×100%。

    1.2.5 耳廓腫脹法實(shí)驗(yàn)[12]

    小鼠60只,隨機(jī)分為5組,每組12只,即生理鹽水組、阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組,三組金桂花干花提取物不同給藥組(即低劑量組、中劑量組及高劑量組)。每天稱重一次,每只小鼠按體重灌胃給藥,0.2 mL/只給予相應(yīng)的藥,生理鹽水組給予生理鹽水,按連續(xù)7 d。末次給藥1 h后,各組小鼠分別于左耳兩面均勻涂抹0.03 mL二甲苯,右耳不做處理,作為對(duì)照。1 h后頸椎脫臼處死小鼠,先用剪刀把左右耳剪下,用打孔器(直徑0.6 cm)在左右耳同一位置分別對(duì)各組小鼠打孔取耳片,每個(gè)耳片為圓形,稱量重量并記錄,計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度等于每只小鼠左耳片與右耳片重量 相減。

    腫脹抑制率(%)=(生理鹽水組腫脹度平均 數(shù)—給藥組腫脹度平均數(shù))/生理鹽水組腫脹度平均數(shù)×100%。

    1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理

    采用Excel統(tǒng)計(jì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果以(±s) 表示,采用t檢驗(yàn)組間比較。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    與生理鹽水組比較,在14 d內(nèi)觀察期間給藥組小鼠的活動(dòng)、攝食量、尿液及糞便無(wú)異常,體重的增長(zhǎng)正常,精神較好,無(wú)死亡現(xiàn)象。解剖結(jié)果顯示各主要器官均未發(fā)現(xiàn)有任何肉眼可見的異常。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

    表1 金桂花干花提取物對(duì)小鼠體重變化的影響( ±s)

    表1 金桂花干花提取物對(duì)小鼠體重變化的影響( ±s)

    組別 劑量(g/kg) 小鼠數(shù)(只)性別 藥前體重(g)7天后體重增加值(g)14天后體重增加值(g)-生理鹽水組5 ♂ 20.38±1.1 5.57±0.9 5.33±1.4-5 ♀ 20.41±1.0 6.01±1.1 5.92±1.5給藥組 5 5 ♂ 20.12±0.9 5.39±0.8 5.02±1.3 5 5 ♀ 20.07±1.2 5.74±1.3 5.17±1.0

    2.2 金桂花干花提取物對(duì)醋酸誘導(dǎo)小鼠疼痛反應(yīng)的影響

    與生理鹽水組比較,金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組均能減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù),低劑量組和中劑量組有顯著性差異(P<0.05),疼痛抑制率分別為31.10%和46.01%,高劑量組有非常顯著性差異(P<0.01),疼痛抑制率較高,為50.35%,且隨著劑量的增大,疼痛抑制率逐漸增強(qiáng)。結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)醋酸誘導(dǎo)的小鼠疼痛反應(yīng)具有較強(qiáng)抑制作用,且與劑量呈正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

    表2 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用( ±s)

    表2 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用( ±s)

    注:與生理鹽水組比較,*P<0.05,**P<0.01

    組別 劑量(g/kg) 小鼠數(shù)(只) 扭體反應(yīng)數(shù)量(次) 鎮(zhèn)痛率(%)生理鹽水組 - 12 38.23±3.0 -阿司匹林組 0.15 12 20.12±2.6* 47.37低劑量組 1 12 26.34±2.7* 31.10中劑量組 2 12 20.64±3.2* 46.01高劑量組 4 12 18.98±1.8** 50.35

    2.3 金桂花干花提取物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠炎癥反應(yīng)的影響

    與空白對(duì)照組比較,金桂花干花提取物低劑量組、中劑量組及高劑量組均能減輕小鼠腫脹度,低劑量組和中劑量組有顯著性差異(P<0.05),腫脹抑制率分別為35.33%和41.48%,高劑量組有非常顯著性差異(P<0.01),腫脹抑制率較高,為62.80%,且劑量越大,腫脹抑制率越強(qiáng)。提示實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠炎癥反應(yīng)具有較強(qiáng)抑制作用,且與劑量呈正相關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

    表3 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的抗炎作用( ±s)

    表3 金桂花干花提取物對(duì)小鼠的抗炎作用( ±s)

    注:與生理鹽水組比較,*P<0.05,**P<0.01

    組別 劑量(g/kg) 小鼠數(shù)(只) 平均腫脹度(mg) 腫脹抑制率(%)生理鹽水組 - 12 11.21±1.7 -阿司匹林組 0.15 12 6.34±2.1** 43.44低劑量組 1 12 7.25±1.5* 35.33中劑量組 2 12 6.56±2.7* 41.48高劑量組 4 12 4.17±2.0** 62.80

    3 討論

    非甾體抗炎藥的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗風(fēng)濕等方面的療效確切,至今已有100多年應(yīng)用歷史,絕大多數(shù)藥物屬于非處方藥,在臨床治療中應(yīng)用非常廣泛,但也是一類不良反應(yīng)發(fā)生較多的藥物。[13]開發(fā)出效果好且不良反應(yīng)較少的新型非甾體抗炎藥是研究方向。

    急性毒性試驗(yàn)中小鼠的活動(dòng)、攝食量、尿液及糞便無(wú)異常,體重的增長(zhǎng)正常,精神較好,無(wú)死亡現(xiàn)象,初步結(jié)果表明金桂花干花提取物未顯示出明顯急性毒性,基本無(wú)毒。醋酸扭體法和耳廓腫脹法實(shí)驗(yàn)表明,金桂花干花提取物在低劑量組、中劑量組及高劑量組(1 g/kg、2 g/kg及4 g/kg)下均可較明顯減少醋酸誘導(dǎo)的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)和減輕二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹度,提高疼痛抑制率和腫脹抑制率,提示其具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛及抗炎作用,且作用與劑量呈正相關(guān)系。金桂花干花提取物的鎮(zhèn)痛抗炎作用與阿司匹林相比,顯示出更好的鎮(zhèn)痛及抗炎藥效活性。對(duì)于金桂花干花提取物尚未確定和闡明的活性成分及作用機(jī)制,值得做進(jìn)一步研究及開發(fā)。

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