三白草地上部分化學(xué)成分及抗氧化活性研究

高 秀，柏 旭，蔡 建，范 亮，王俊人，張麗芳，劉威良，董建偉

三白草地上部分化學(xué)成分及抗氧化活性研究

高 秀1, 2，柏 旭1，蔡 建1, 2，范 亮1，王俊人1，張麗芳1, 2，劉威良1, 2，董建偉3*

1. 曲靖師范學(xué)院生物資源與食品工程學(xué)院，云南 曲靖 655011 2. 曲靖師范學(xué)院 云南省高校特色果酒技術(shù)創(chuàng)新與應(yīng)用工程研究中心，云南 曲靖 655011 3. 曲靖師范學(xué)院化學(xué)環(huán)境科學(xué)學(xué)院，云南 曲靖 655011

對三白草地上部分的化學(xué)成分及其抗氧化活性進(jìn)行研究。采用MCI HP20、硅膠、Sephadex LH-20等多種色譜材料進(jìn)行分離純化，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。采用DPPH方法和ABTS方法評價各化合物的體外抗氧化活性。從三白草地上部分丙酮提取物中分離得到17個化合物，分別鑒定為里卡靈A（1）、里卡靈B（2）、二氫愈瘡木脂酸（3）、rel-(8,8′)-dimethyl-(7,7′)-bis (3,4-methylenedioxyphenyl) tetrahydrofuran（4）、odoratisol C（5）、nectandrin B（6）、三白草酮（7）、surinomensin（8）、樟葉素（9）、三白草醇E（10）、三白草醇（11）、馬薩婷 B（12）、stigmasta-4,22-dien-3-one（13）、(24)-24-ethylcholest-4-en-3,6-dione（14）、sauruchinenol A（15）、鄰苯二甲酸二丁酯（16）、丹皮酚（17）?；衔?7為首次從該屬植物中分離得到，化合物4、5、13、14為首次從該植物中分離得到，化合物1、3、7、11具有一定的體外抗氧化活性。

三白草；抗氧化；里卡靈A；三白草醇；丹皮酚

三白草(Lour.) Baill為三白草科（Saururaceae）三白草屬Linn.濕生草本植物，產(chǎn)于河北、山東、河南和長江流域及其以南各省區(qū)，生于低濕溝邊、塘邊或溪旁。三白草根莖或全草具有利尿消腫、清熱解毒的功效，用于治療水腫、小便不利、淋瀝澀痛、帶下；外治瘡瘍腫毒、濕疹等癥[1]。從三白草中報道的化學(xué)成分包括木脂素、二萜、生物堿、黃酮等[2]，其中木脂素三白草酮類化合物為主要特征成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，上述成分具有抗炎、抗癌[2]、抗病毒[3]、保肝、抑制血小板聚集[4]等活性。三白草甲醇提取后石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物對ABTS自由基有潛在的清除作用[5]，其中的二芳基丁烷型木脂素sarurin A及8--4′型木脂素machilin D則具有顯著的抑制低密度脂蛋白氧化的活性[6]。因此，本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對三白草地上部分開展化學(xué)成分及其體外抗氧化活性研究，以期發(fā)現(xiàn)具有顯著抗氧化活性的單體成分。本研究從三白草地上部分丙酮提取物開展了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離得到17個化合物，分別鑒定為里卡靈A（licarin A，1）、里卡靈B（licarin B，2）、二氫愈瘡木脂酸（dihydroguaiaretic acid，3）、rel-(8,8′)-dimethyl- (7,7′)-bis (3,4-methylenedioxyphenyl) tetrahydrofuran（4）、odoratisols C（5）、nectandrin B（6）、三白草酮（sauchinone，7）、surinamensin（8）、樟葉素（polysyphorin，9）、三白草醇E（saucerneol E，10）、三白草醇（saucerneol，11）、馬納薩亭B（manassantin B，12）、豆甾-4,22-二烯-3酮（tigmasta-4,22-dien- 3-one，13）、(24)-24-ethylcholest-4-en-3,6-dione（14）、sauruchinenol A（15），鄰苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，16）。其中，化合物17為首次從三白草屬分離得到，化合物4、5、13、14為首次從該植物中分離得到，并且化合物13和14為首次從該植物中得到的甾體類成分。此外，本實驗還進(jìn)一步研究了所得天然單體化合物的體外抗氧化活性。結(jié)果顯示，化合物1、3、7、11表現(xiàn)出了顯著的抗氧化活性。

1 儀器與材料

Bruker Avance 400 MHz（瑞士Bruker公司，），Bruker Tensor-27型傅里葉變換紅外光譜儀（德國Bruker公司）；amaZon SL型離子阱質(zhì)譜儀（美國Bruker公司）；TU-1901型紫外可見分光光度儀（北京普析通用公司）；MK3型酶標(biāo)儀（賽默飛世爾公司）；96孔板（Nest biotech）；柱色譜硅膠（青島海洋化工廠，100～200、200～300目）；GF254薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠）；柱色譜聚酰胺（80～100目，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；MCI HP20（日本三菱化學(xué)公司）；Sephadex LH-20（Pharmacia公司，瑞典）；顯色劑（10%硫酸乙醇溶液，噴灑后適當(dāng)加熱）；Greagent分析純有機試劑（泰坦科技股份有限公司）；DPPH、ABTS（蓋德化工）；-抗壞血酸（Sigma-Aldrichh）。

藥材三白草地上部分于2015年5月采自安徽亳州，并由曲靖師范學(xué)院韓利紅教授鑒定為三白草(Lour.) Baill的干燥地上部分，標(biāo)本（201508M）存放在曲靖師范學(xué)院生物資源與食品工程學(xué)院標(biāo)本室。

2 方法

2.1 提取與分離

三白草干燥地上部分20 kg用丙酮冷浸提取3次，每次24 h，合并提取液，減壓蒸餾除去有機溶劑。將提取物分散于水中用醋酸乙酯萃取3次，回收溶劑后，得醋酸乙酯部分986 g。用（80～100目）聚酰胺拌樣進(jìn)行MCI HP20柱色譜分離，以甲醇-水（3∶7→10∶0）梯度洗脫，經(jīng)TLC分析，合并相同組分得Fr. 1～7。Fr. 1（9 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（9.8∶0.2→1∶1）梯度洗脫，TLC檢測，合并相同組分，得到Fr. 1.1～1.4。Fr. 1.2經(jīng)Sephadex LH-20［甲醇-水（7∶3）］色譜，得化合物11（269.8 mg）。Fr. 2（19 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（8.5∶1.5）洗脫得到Fr. 2.1～2.4，F(xiàn)r. 2.3（2.54 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以二氯甲烷-醋酸乙酯（100∶1）洗脫得到Fr. 2.3.1～2.3.3，F(xiàn)r. 2.3.3再經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（8:2）洗脫得化合物10（127 mg）。Fr. 3（12.57 g）經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（9∶1）洗脫，得Fr. 3.1～3.5，F(xiàn)r. 3.2經(jīng)石油醚-醋酸乙酯（8∶2）洗脫得化合物13（269 mg）；Fr. 3.3經(jīng)石油醚-醋酸乙酯（8.5∶1.5）洗脫得化合物14（89 mg）。Fr. 4（97 g）經(jīng)反相MCI HP20柱色譜，甲醇-水（60∶40→95∶5）梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測，合并相同部分得Fr. 4.1～4.7。Fr. 4.3（8.92 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（9.8∶0.2）洗脫得到Fr. 4.3.1～4.3.10。Fr. 4.3.3（2.12 g）經(jīng)Sephadex LH-20［甲醇-水（7∶3）］，再經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（8.5∶1.5）洗脫得到化合物1（71.0 mg）；Fr. 4.3.5（2.8 g）經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（9∶1），石油醚-醋酸乙酯（8∶2）反復(fù)洗脫得到化合物15（69 mg），化合物16（112 mg）。Fr. 4.7（5.26 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以二氯甲烷-醋酸乙酯（9.8∶0.2）洗脫得到化合物6（121.0 mg）。Fr. 4.4（2.47 g）經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（8.5∶1.5→1∶1）梯度洗脫，TLC檢測，合并相同組分，得到Fr. 4.4.1～4.4.4。Fr. 4.4.3經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（7.5∶2.5→1∶1）梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20［甲醇-水（7∶3）］色譜，得化合物3（82.2 mg）。Fr. 4.4.2經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（8.5∶1.5）洗脫，得化合物5（64.5 mg）。Fr. 5（3.72 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（7.5∶2.5）洗脫得到Fr. 5.1～5.4，F(xiàn)r. 5.3（1.65 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，經(jīng)Sephadex LH-20［甲醇-水（7∶3）］色譜，F(xiàn)r.5.3.3再經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（7∶3）洗脫得化合物7（200 mg）。Fr. 5.2（1.27 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（8∶2）洗脫得化合物12（156 mg）。Fr. 6（4.78 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（9.8∶0.2→9∶1）梯度洗脫，TLC檢測，合并相同組分，得到Fr. 6.1～6.4。Fr. 6.1（1.65 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（9.8∶0.2）洗脫，得化合物4（16.9 mg）。Fr. 6.2（2.67 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（80∶1）洗脫，TLC檢測，合并相同組分，得到Fr. 6.2.1～6.2.4。Fr. 6.2.3經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（8∶2），石油醚-丙酮（9∶1）洗脫，TLC檢測，得化合物8（33.6 mg）和9（20.3 mg）。Fr. 6.3（2 g）經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（9.8∶0.2→1∶1）梯度洗脫，TLC檢測，得化合物17（21 mg），合并剩余相同組分，經(jīng)丙酮反復(fù)重結(jié)晶，得化合物2（168 mg）。

2.2 抗氧化活性實驗

2.2.1 DPPH法 將2 mmol/mL濃度的20 μL DPPH乙醇溶液加入到96孔板，然后加入20 μL抗壞血酸，160 μL無水乙醇和不同質(zhì)量濃度（1、0.8、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/mL）的待測化合物溶液，并在室溫下避光放置30 min。在波長513 nm處，通過酶標(biāo)儀測量每個孔的吸光度（）值，并計算其DPPH的清除活性。

2.2.2 ABTS法 將100 μL過硫酸鉀溶液和ABTS的混合溶液（1∶1，在室溫下暗處放置12～16 h）加入到96孔板中，然后加入20 μL ABTS溶液，再分別加入180 μL抗壞血酸或不同質(zhì)量濃度（1、0.8、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/mL）的待測化合物溶液，以PB溶液為空白對照，室溫下避光放置20 min后，于波長734 nm處檢測值，計算其ABTS清除活性。

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀液體，ESI-MS/: 349 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.87 (2H, s, H-2, H-6), 6.78 (1H, d,= 1.7 Hz, H-6￠), 6.67 (1H, d,= 8.6 Hz, H-2￠), 6.25 (1H, d,= 15.7 Hz, H-7￠), 6.00 (1H, dd,= 15.7, 6.6 Hz, H-8￠), 4.99 (1H, d,= 9.4 Hz, H-7), 3.78 (3H, s, 3-OCH3), 3.74 (3H, s, 5￠-OCH3), 3.33 (1H, m, H-5￠), 1.78 (3H, d,= 6.6 Hz, H-9￠), 1.23 (3H, d,= 6.8 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)C132.1 (C-1), 109.0 (C-2), 146.6 (C-3), 145.9 (C-4), 114.2 (C-5), 120.0 (C-6), 93.8 (C-7), 45.7 (C-8), 17.6 (C-9), 132.3 (C-1￠), 109.3 (C-2￠), 144.2 (C-3￠), 146.8 (C-4￠), 133.3 (C-5￠), 113.4 (C-6￠), 131.0 (C-7￠), 123.5 (C-8￠), 18.4 (C-9￠), 56.0 (OCH3), 56.1 (OCH3)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[7]，故鑒定化合物1為里卡靈A。

化合物2：淡黃色油狀液體，ESI-MS/: 347 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.90 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 6.82 (1H, dd,= 8.0, 1.8 Hz, H-6), 6.76 (1H, s, H-2￠), 6.72 (1H, s, H-6￠), 6.71 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.31 (1H, d,= 15.6 Hz, H-7￠), 6.07 (1H, dq,= 15.7, 6.6 Hz, H-8￠), 5.83 (2H, s, -OCH2O-), 5.04 (1H, d,= 9.1 Hz, H-7), 3.83 (3H, s, OCH3), 3.39～3.27 (1H, m, H-8), 1.82 (3H, dd,= 6.6 Hz, H-9￠), 1.31 (3H, d,= 6.8 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 133.8 (C-1), 108.1 (C-2), 147.7 (C-3), 146.6 (C-4), 109.4 (C-5), 120.2 (C-6), 93.4 (C-7), 45.8 (C-8), 17.8 (C-9), 132.2 (C-1￠), 107.5 (C-2￠), 147.98 (C-3￠), 144.8 (C-4￠), 134.4 (C-5￠), 113.4 (C-6￠), 131.1 (C-7￠), 123.3 (C-8￠), 18.5 (C-9￠), 101.2 (-OCH2O-), 55.9 (OCH3)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[7]，故鑒定化合物2為里卡靈 B。

化合物3：淡黃色油狀液體，ESI-MS/: 353 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.52 (2H, d,= 2.0 Hz, H-2, 2′), 6.79 (2H, d,= 7.9 Hz, H-5, 5′), 6.58 (2H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6, 6′), 2.52～2.38 (4H, m, H-7, 7′), 1.73 (2H, m, H-8, 8′), 0.82 (6H, d,= 6.6 Hz, H-9, 9′), 3.80 (6H, s, OCH3×2)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 133.6 (C-1, 1′), 111.3 (C-2, 2′), 146.2 (C-3, 3￠), 143.5 (C-4, 4￠), 113.9 (C-5, 5′), 121.7 (C-6, 6′), 41.1 (C-7, 7′), 37.5 (C-8, 8′), 13.9 (C-9, 9′), 55.8 (-OCH3×2)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[8]，故鑒定化合物3為二氫愈瘡木脂酸。

化合物4：淡黃色油狀液體，ESI-MS/: 363 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.91 (2H, d,= 1.6 Hz, H-2, 2′), 6.77 ( 2H, d,= 8.0 Hz, H-5, 5′), 6.83 (2H, dd,= 8.1, 1.6 Hz, H-6, 6′), 4.6 (2H, d,= 9.3 Hz H-7, 7′), 1.74 (2H, m, H-8, 8′), 1.02 (6H, d,= 6.1 Hz, H-9, 9′), 5.94 (4H, s, -OCH2O-)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):119.8 (C-1, 1′), 119.78 (C-2, 2′), 147.8 (C-3, 3′), 147.0 (C-4, 4′), 106.6 (C-5, 5′), 107.9 (C-6, 6′), 88.3 (C-7, 7′), 51.0 (C-8, 8′), 13.9 (C-9, 9′), 101.0 (-OCH2O-×2)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[9]，故鑒定化合物4為rel-(8,8′)-dimethyl- (7,7′)-bis(3,4-methylenedioxyphenyl) tetrahydrofuran。

化合物5：淡黃色油狀液體，ESI-MS/: 367 [M＋Na]+。1H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.04 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 6.92 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 6.98 (1H, dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-6), 4.40 (1H, d,= 9.3 Hz, H-7), 1.83–1.74 (1H, m, H-8), 1.05 (3H, d,= 6.6 Hz, H-9), 6.83 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2′), 6.84 (1H, d,= 8.1Hz, H-5′), 6.88 (1H, dd,= 8.1, 2.3 Hz, H-6′), 5.11 (1H, d,= 8.6 Hz, H-7′), 2.29 –2.18 (1H, m, H-8′), 0.66 (3H, d,= 7.0 Hz, H-9′), 3.90 (3H, s, 3-OCH3), 3.85 (3H, s, 3′-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 133.2 (C-1), 109.5 (C-2), 146.6 (C-3), 145.2 (C-4), 114.2 (C-5), 119.3 (C-6), 87.4 (C-7), 47.7 (C-8), 14.9 (C-9), 132.8 (C-1′), 109.8 (C-2′), 146.2 (C-3′), 144.6 (C-4′), 113.9 (C-5′), 119.9 (C-6′), 83.2 (C-7′), 46.0 (C-8′), 15.0 (C-9′), 55.9 (-OCH3), 55.9 (-OCH3′)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[10]，故鑒定化合物5為odoratisols C。

化合物6：淡黃色油狀液體C20H24O5，1H-NMR (400 MHz, acetone-6): 0.66 (6H, d,= 5.6 Hz, H-9, 9￠), 2.27 (2H, m, H-8, 8￠), 3.86 (6H, s, 2×OCH3), 5.42 (2H, d,= 6.5 Hz, H-7, 7￠), 5.70 (2H, brs, 2×OH), 6.73～6.86 (6H, m, Ar-H)；13C-NMR (100 MHz, acetone-6): 134.2 (s, C-1, 1), 111.3 (d, C-2, 2), 148.7 (s, C-3, 3), 146.6 (s, C-4, 4), 115.8 (d, C-5, 5), 120.2 (d, C-6, 6), 85.7 (d, C-7, 7￠), 44.6 (d, C-8, 8￠), 14. 7 (q, C-9, 9￠), 56.4 (OCH3×2)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[11]，故鑒定化合物6為nectandrin B。

化合物7：無色針狀晶體（丙酮），ESI-MS/: 349 [M＋Na]+。1H NMR (400 MHz, CDCl3): 6.41 (1H, s, H-3), 6.85 (1H, s, H-6), 3.05 (1H, d,= 5.0 Hz, H-7), 2.47, (1H, m, H-8), 1.23 (3H, d,= 7.1 Hz, H-9), 2.53 (1H, m, H-1′), 1.92 (1H, m, H-7′ax), 1.66 (1H, m, H-7′eq), 0.74 (3H, d,= 7.8 Hz, H-9′), 5.94 (2H, d,= 1.3 Hz, -OCH2O-), 5.92 (2H, d,= 16.0 Hz, 4-OCH2O-5), 5.66 (2H, d,= 20.0 Hz, 4′-OCH2O-5′), 2.50 (1H, d,= 5.0 Hz, H-6′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 115.7 (C-1), 144.9 (C-2), 99.1 (C-3), 143.2 (C-4), 146.6 (C-5), 106.5 (C-6), 35.0 (C-7), 34.7 (C-8), 21.2 (C-9), 37.5 (C-1′), 199.7 (C-2′), 100.1 (C-3′), 168.6 (C-4′), 100.4 (C-5′), 37.5 (C-6′), 25.2 (C-7′), 33.4 (C-8′), 20.9 (C-9′), 101.3 (-OCH2O-), 98.6 (-OCH2O-)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[12]，故鑒定化合物7為sauchinone。

化合物8：淡黃色油狀液體，C22H28O6，1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.87 (1H, s, H-3￠), 6.86 (1H, d,= 8.2 Hz, H-6￠) 6.79 (1H, dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-5￠), 6.54 (2H, s, H-2, 6), 6.28 (1H, d,= 15.7 Hz, H-7￠), 6.08 (1H, dd,= 15.7, 6.6 Hz, H-8￠), 4.53 (1H, d,= 8.2 Hz, H-7), 4.03 (1H, dd,= 8.2, 6.3 Hz, H-8), 3.89～3.72 (12H, m, OCH3), 1.81 (3H, dd,= 6.6, 1.5 Hz, H-9￠), 1.13 (3H, d,= 6.3 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 135.6 (C-1), 104.2 (C-2), 153.2 (C-3), 137.6 (C-4), 153.2 (C-5), 104.2 (C-6), 78.7 (C-7), 84.1 (C-8), 17.2 (C-9), 133.5 (C-1￠), 109.1 (C-2￠), 150.7 (C-3￠), 146.6 (C-4￠), 118.8 (C-5￠), 119.0 (C-6￠), 130.4 (C-7￠), 125.0 (C-8￠), 18.4 (C-9￠), 60.8 (4-OMe), 56.1 (3, 5-OMe)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[13]，故鑒定化合物8為surinamensin。

化合物9：無色油狀液體，C23H30O7，1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.51 (1H, s, H-2), 6.50 (1H, s, H-6), 6.26 (1H, d,= 15.7 Hz, H-7￠), 6.10 (1H, dd,= 15.6, 6.5 Hz, H-8￠), 4.52 (1H, d,= 8.3 Hz, H-7), 3.87～3.70 (15H, m, OMe), 1.80 (3H, dd,= 6.6, 1.6 Hz, H-9￠), 1.15 (3H, d,= 6.2 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 136.3 (C-1), 104.1 (C-2), 153.1 (C-3), 137.4 (C-4), 153.1(C-5), 104.1 (C-6), 79.3 (C-7), 86.4 (C-8), 17.6 (C-9), 133.8 (C-1￠), 102.7 (C-2￠), 152.7 (C-3￠), 136.4 (C-4￠), 152.7 (C-5￠), 102.7 (C-6￠), 130.6 (C-7￠), 125.6 (C-8￠), 18.3 (C-9￠), 60.7 (4-OMe), 56.0 (3, 5, 3￠, 5￠-OMe)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[14]，故鑒定化合物9為polysyphorin。

化合物10：黃色油狀液體，C30H34O8。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.97 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5￠), 6.92～6.87 (3H, m, H-2￠, 22, 62), 5.94 (2H, s, 3-OCH2-4), 5.44 (2H d,= 5.9 Hz, H-7, 7￠), 4.62 (1H, d,= 8.4 Hz, H-72), 4.10 (1H, dd,= 8.2, 6.3 Hz, H-82), 3.90 (6H s, OMe), 2.27 (2H dd,= 11.2, 6.2 Hz, H-8, 8￠), 1.15 (3H d,= 6.2 Hz, H-92), 0.70 (6H d,= 6.3, Hz, H-9, 9￠)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 134.0 (s, C-1), 107.5 (d, C-2), 147.7 (s, C-3), 146.4 (s, C-4), 108.0 (d, C-5), 119.0 (d, C-6), 83.5 (d, C-7), 44.0 (d, C-8), 14.7 (q, C-9), 136.6 (s, C-1￠), 110.1 (d, C-2￠), 150.5 (s, C-3￠), 146.3 (s, C-4￠), 118.7 (d, C-5￠), 118.8 (d, C-6￠), 83.3 (d, C-7￠), 44.0 (d, C-8￠), 14.7 (q, C-9￠). 133.1 (s, C-12), 108.9 (d, C-22), 144.4 (s, C-32), 147.2 (s, C-42), 113.9 (d, C-52), 121.0 (d, C-62), 78.3 (d, C-72), 83.8 (d, C-82), 16.8 (q, C-92), 101.0 (3-OCH2O-4), 55.9 (42-OMe), 55.8 (32-OMe)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[15]，故鑒定化合物10為sauceneol E。

化合物11：黃色油狀液體，ESI-MS/: 561 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.76～7.00 (9H, m, Ar-H), 5.44 (2H, d,= 6.3 Hz, H-7, 7′), 2.26 (2H, m, H-8, 8′), 0.69 (6H, t,= 6.0 Hz, H-9, H-9′), 4.66 (1H, d,= 8.0 Hz, H-7′′), 4.20 (1H, dq,= 8.0, 6.2 Hz, H-8′′), 1.15 (3H, d,= 6.2 Hz, H-9′′), 3.93～3.76 (12H, m, OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 133.1 (C-1), 109.2 (C-2), 144.7 (C-3), 146.3 (C-4), 119.0 (C-5), 114.3 (C-6), 83.3 (C-7), 44.0 (C-8), 14.8 (C-9), 136.3 (C-1′), 110.3 (C-2′), 150.4 (C-3′), 146.6 (C-4′), 118.8 (C-5′), 118.1 (C-6′), 83.3 (C-7, 7′), 44.0 (C-8′), 14.8 (C-9′), 132.8 (C-1′′), 110.2 (C-2′′), 149.0 (C-3′′), 148.8 (C-4′′), 111.0 (C-5′′), 120.0 (C-6′′), 78.1 (C-7′′), 83.7 (C-8′′), 16.8 (C-9′′), 55.9 (-OCH3)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[16]，故鑒定化合物11為saucerneol。

化合物12：黃色油狀液體，ESI-MS/: 725 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.00～6.75 (12H, m, H-Ar), 5.47 (2H, d,= 5.8 Hz, H-7, 7′), 2.29 (2H, m, H-8, 8′), 0.71 (6H, d,= 6.0 Hz, H-9, 9′), 4.66 (1H, d,= 8.0 Hz, H-7′′), 4.62 (1H, d,= 8.0 Hz, H-7′′′), 4.17 (2H, m, H-8′′, 8′′′), 1.15 (6H, t,= 7.0 Hz, H-9′′, 9′′′), 5.91 (2H, s, -OCH2O-), 3.97～3.68 (12H, s, OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 136.2 (C-1), 110.1 (C-2), 146.2 (C-3), 150.4 (C-4), 108.0 (C-5), 118.1 (C-6), 83.4 (C-7), 44.0 (C-8), 14.8 (C-9), 136.3 (C-1′), 110.1 (C-2′), 146.3 (C-3′), 150.3 (C-4′), 107.5 (C-5′), 118.3 (C-6′), 83.4 (C-7′), 44.0 (C-8′), 14.8 (C-9′), 132.6 (C-1′′), 110.1(C-2′′), 147.3 (C-3′′), 148.7 (C-4′′), 118.7 (C-5′′), 119.9 (C-6′′), 83.3 (C-7′′), 83.2 (C-8′′), 16.7 (C-9′′), 134.1 (C-1′′′), 110.8 (C-2′′′), 147.7 (C-3′′′), 148.9 (C-4′′′), 118.7 (C-5′′′), 121.0 (C-6′′′), 78.1 (C-7′′′), 83.2 (C-8′′′), 16.8 (C-9′′′), 101.0 (-OCH2O), 55.8 (-OCH3)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[16]，故鑒定化合物12為manassantin B。

化合物13：無色油狀液體，ESI-MS/: 725 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.08 (1H, dq,= 3.0, 1.5 Hz, H-3), 4.53 (1H, brs, H-4), 3.11 (1H, dd,= 9.1, 2.5 Hz, H-5), 4.98 (1H, d,= 10.1 Hz, H-6), 2.14 (2H, m, H-8), 6.79 (1H, t,= 7.4 Hz, H-10), 2.30～2.22 (4H, m, H-9, 12), 2.03 (2H, m, H-13), 5.05 (1H, t,= 7.3 Hz, H-14), 1.60 (3H, s, H-16), 1.52 (3H, s, H-17), 1.70 (3H, s, H-19), 1.74 (3H, s, H-20)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 206.4 (C-1), 142.7 (C-2), 155.3 (C-3), 76.3 (C-4), 56.2 (C-5), 120.1 (C-6), 140.5 (C-7), 38.4 (C-8), 26.9 (C-9), 144.8 (C-10), 131.5 (C-11), 26.8 (C-12), 27.6 (C-13), 123.5 (C-14), 132.5 (C-15), 25.8 (C-16), 17.7 (C-17), 173.1 (C-18), 16.9 (C-19), 10.3 (C-20)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[17]，故鑒定化合物13為sauruchinenols A。

化合物14：無色針晶（醋酸乙酯），ESI-MS/: 433 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.65 (1H, s, H-4), 5.07 (1H, dd,= 15.2, 8.5 Hz, H-22), 4.96 (1H, d,= 8.4 Hz, H-23)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 35.6 (C-1), 34.0 (C-2), 199.8 (C-3), 123.8 (C-4), 171.8 (C-5), 33.0 (C-6), 32.0 (C-7), 35.6 (C-8), 53.8 (C-9), 38.6 (C-10), 21.0 (C-11), 39.5 (C-12), 42.3 (C-13), 55.9 (C-14), 24.3 (C-15), 28.9 (C-16), 55.9 (C-17), 12.2 (C-18), 17.4 (C-19), 40.5 (C-20), 21.1 (C-21), 138.2 (C-22), 129.4 (C-23), 51.2 (C-24), 31.9 (C-25), 21.2 (C-26), 19.0 (C-27), 25.4 (C-28), 12.3 (C-29)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[18]，故鑒定化合物14為stigmasta-4,22-dien-3-one。

化合物15：無色針晶（醋酸乙酯），ESI-MS/: 449 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.08 (1H, s, H-4)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 35.48 (C-1), 34.0 (C-2), 202.3(C-3), 125.4 (C-4), 161.1 (C-5), 199.5 (C-6), 46.8 (C-7), 34.2 (C-8), 50.9 (C-9), 39.8 (C-10), 20.9 (C-11), 39.1 (C-12), 42.5 (C-13), 56.5 (C-14), 24.0 (C-15), 28.0 (C-16), 55.8 (C-17), 11.98 (C-18), 17.5 (C-19), 36.0 (C-20), 18.7 (C-21), 33.8 (C-22), 26.0 (C-23), 45.7 (C-24), 29.1 (C-25), 19.0 (C-26), 19.9 (C-27), 23.0 (C-28), 11.9 (C-29)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[19-20]，故鑒定化合物15為(24)-24-ethylcholest-4-en-3, 6-dione。

化合物16：白色粉末，ESI-MS/: 301 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.71 (2H, dd,= 5.7, 3.3 Hz, H-3, 6), 7.52 (2H, dd,= 5.7, 3.3 Hz, H-4, 5), 4.31 (4H, t,= 6.7 Hz, H-1′), 1.72 (2H, tt,= 8.0, 6.6 Hz, H-2′), 1.44 (4H, m, H-3′), 0.96 (6H, t,= 7.4 Hz, H-4′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 167.7 (COO-), 132.3 (C-1, 2), 130.9 (C-4, 5), 128.8 (C-3, 6), 65.6 (C-1′), 30.6 (C-2′), 19.2 (C-3′), 13.7 (C-4′)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[21]，故鑒定化合物16為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物17：無色針晶（醋酸乙酯），ESI-MS/: 189 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):7.63 (1H, d,= 8.7 Hz, H-6), 6.43 (1H, m, H-5), 6.46 (1H, m, H-3), 3.85 (3H, s, OCH3), 2.56 (3H, s, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 113.9 (s, C-1), 165.2 (s, C-2), 100.8 (d, C-3), 166.1 (s, C-4), 107.6 (d, C-5), 132.3 (d, C-6), 202.6 (s, C-7), 26.2 (q, C-8), 55.5 (OCH3)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道基本一致[22]，故鑒定化合物17為丹皮酚。

3.2 體外抗氧化活性實驗結(jié)果

文獻(xiàn)報道三白草石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物對ABTS自由基有潛在的清除作用[5]，三白草中的二芳基丁烷型木脂素sarurin A及8--4′型木脂素machilin D具有顯著的抑制低密度脂蛋白氧化的活性[6]。因此，本實驗還進(jìn)一步研究了所得化合物1～16的體外抗氧化活性。

結(jié)果（表1）顯示，與陽性對照-抗壞血酸相比，化合物1、3、7、11均表現(xiàn)出了一定的抗氧化活性，但體外抗氧化活性不如-抗壞血酸。從化合物結(jié)構(gòu)類型看，所得天然產(chǎn)物中，木脂素類成分較萜類和甾體類有較好的體外抗氧化活性。

表1 化合物體外抗氧化活性

4 討論

本實驗從三白草地上部分共分離得到17個單體化合物，其中，合物17為首次從該屬植物中分離得到，化合物4、5、13、14為首次從該植物中分離得到。此外，本實驗還首次對從三白草中得到的單體化合物進(jìn)行體外抗氧化活性測試，結(jié)果表明，木脂素類成分具有一定的體外抗氧化活性，其中，里卡靈A（1）、二氫愈瘡木脂酸（3）、sauchinone（7）、三白草醇（11）顯示出一定的的抗氧化活性。該結(jié)果為三白草在體內(nèi)、體外抗氧化活性研究提供了較為堅實的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時也為其進(jìn)一步的開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Anti-oxidant chemical constituents from aerial parts of

GAO Xiu1, 2, BO Xu1, 2, CAI Jian1, 2, FAN Liang1, 2, WANG Jun-ren1, ZHANG Li-fang1, 2, LIU Wei-liang1, 2, DONG Jian-wei3

1. College of Biological Resources and Food Engineering, Qujing Normal University, Qujing 655011, China 2. Yunnan Engineering Research Center of Fruit Wine, Qujing Normal University, Qujing 655011, China 3. College of Chemistry and Environmental Science, Qujing Normal University, Qujing, 655011, China

Objective To study the chemical constituents and antioxidant activity of the aerial parts of Sanbaicao (). Methods The chemical constituents were isolated and purified by column chromatography on MCI HP20, silica gel, and Sephadex LH-20. Their structures were elucidated on the basis of spectroscopic data. DDPH and ABTS method were used to determine the antioxidant activity of the isolated compounds. Results Seventeen compounds were isolated from acetone extract of. The structures were identified as licarin A (1), licarin B (2), dihydroguaiaretic acid (3), rel-(8,8′)-dimethyl-(7,7′)-bis (3,4-methylenedioxyphenyl) tetrahydrofuran (4), odoratisol C (5), sauchinone (6), sauchinone (7), surinomensin (8), polysyphorin (9), and sauceneol E (10), saucerneol (11), manassantin B (12), tigmasta-4,22-dien-3-one (13), (24)-24-ethylcholest-4-en-3,6-dione (14), sauruchinenol A (15), dibutyl phthalate (16), paconol (17). Conclusion Compound 17 is isolated fromgenus for the first time, compounds 4, 5, 13, and 14, are isolated from this plant for the first time. In addition, Compounds 1, 3, 7, and 11 were found to have potential antioxidant activities.

(Lour.) Baill.; antioxidant activity; licarin A; saucerneol; paconol

R284.1

A

0253 - 2670(2022)24 - 7672 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.24.004

2022-05-18

云南省科技廳-云南省地方本科高?；A(chǔ)研究聯(lián)合專項項目（2017FH001-094 and 2017FH001-092）；云南省教育廳科學(xué)研究基金資助性項目（2016ZZX208）；地方高校國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201610684010）；云南省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究青年項目（2018FD081）

高 秀（1984—），女，博士研究生，從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail: 44417039@qq.com

董建偉（1991—），男，博士研究生，從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail: jwdongyn@mail.qjnu.edu.cn

[責(zé)任編輯 王文倩]