山蒼子植株再生體系的優(yōu)化*

王 陽 張付豪 竇 敏 許 婷 陳 昊

(中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中南林業(yè)科技大學(xué)經(jīng)濟(jì)林育種與栽培國家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 長沙 410004)

山蒼子(Litseacubeba)為樟科木姜子屬的落葉灌木或小喬木，廣布于我國長江以南各省區(qū)，其中湖南省是我國山蒼子種質(zhì)資源的主要分布區(qū)之一，在低山和丘陵區(qū)均有分布(谷戰(zhàn)英等， 2017)。山蒼子作為中國特色芳香油植物資源之一，其葉、花和果皮均含有芳香油，是重要的芳香植物(劉曉棠等， 2008)。從山蒼子果實(shí)和葉子中所提取的山蒼子油中醛類成分約占總成分的70%(Lietal.， 2014)，其中檸檬醛含量高達(dá)60%～90%(吳厚玖等， 1997)。檸檬醛是生產(chǎn)抗氧化劑、殺蟲劑、抗微生物藥物的重要原料，在香料工業(yè)和醫(yī)療工業(yè)上有重要用途(Luoetal.， 2004； Ameretal.， 2006； 喻阿坤等， 2019)。

受檸檬醛等代謝產(chǎn)物的影響，山蒼子枝條傷口處易被氧化，使得山蒼子扦插和嫁接較為困難，目前，山蒼子主要以野生植株的種子進(jìn)行實(shí)生繁殖，但其種子發(fā)芽率較低，常導(dǎo)致育苗失敗。此外，山蒼子屬于雌雄異株植物，實(shí)生苗木會發(fā)生性狀分離，導(dǎo)致其優(yōu)良性狀在雜種后代中難以保存(吳松成等， 2003； 王玉昆等， 2005)。植物組織培養(yǎng)技術(shù)因具有繁殖系數(shù)高、繁殖速度快和易保持母體優(yōu)良性狀等優(yōu)點(diǎn)，目前已成為工廠化育苗的重要途徑(Robertonetal.， 1988； Thomas， 2008； Kimetal.， 2017)。此外，建立愈傷組織誘導(dǎo)與不定芽分化體系可為植物遺傳轉(zhuǎn)化研究提供技術(shù)支撐。因此，建立高效的山蒼子愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生體系，不僅可以進(jìn)行山蒼子良種的工廠化繁育，還可以為山蒼子遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立奠定基礎(chǔ)。

目前，關(guān)于山蒼子組織培養(yǎng)研究的報(bào)道相對較少。Mao等(2000)研究發(fā)現(xiàn)，6-BA是山蒼子莖尖誘導(dǎo)不定芽的適宜細(xì)胞分裂素。尹紅(2000)以山蒼子莖段為外植體，篩選出愈傷組織形成的適宜激素質(zhì)量濃度組合和pH值。通過對不同外植體的脫分化效果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，莖段外植體盡管愈傷組織誘導(dǎo)效率高于葉片外植體，但其誘導(dǎo)效率和狀態(tài)仍不能滿足后續(xù)增殖和分化的要求(馬崇堅(jiān)等， 2005； 雷明等， 2008)。通過后續(xù)研究的改進(jìn)，山蒼子莖段愈傷組織的誘導(dǎo)率可達(dá)100%，但不定芽分化率低，最高僅為28.57%，且分化出的不定芽生根率僅為45.33%，也未進(jìn)行后續(xù)再生植株的移栽試驗(yàn)(林麗媛等， 2013)。已有研究結(jié)果表明，山蒼子組織培養(yǎng)過程中存在愈傷組織誘導(dǎo)效率不穩(wěn)定，再分化與生根效率低，未進(jìn)行再生植株移栽試驗(yàn)等問題，尚不能應(yīng)用于種苗工廠化繁育。鑒于此，本研究以山蒼子莖段為外植體，進(jìn)行山蒼子組培條件的優(yōu)化和再生植株的移栽試驗(yàn)，通過對愈傷組織誘導(dǎo)和增殖條件的比較，獲得具有分化能力的愈傷組織，并對不定芽分化和生根條件進(jìn)行了優(yōu)化，顯著提高了山蒼子不定芽分化率與生根率，再生植株移栽成活率高，可以滿足山蒼子良種的工廠化繁育需求，為后續(xù)山蒼子遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立提供了技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選取種植于中南林業(yè)科技大學(xué)山蒼子實(shí)驗(yàn)基地的健康、無病蟲害的山蒼子優(yōu)良雌株，取其春稍半木質(zhì)化莖段的節(jié)間(不帶芽)作為誘導(dǎo)愈傷組織的外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的表面滅菌 將外植體置于玻璃瓶中，先用洗衣粉浸泡15min，再于流水下沖洗1 h后，轉(zhuǎn)至超凈工作臺上進(jìn)行外植體的表面滅菌處理。75%的乙醇處理外植體25 s，用0.1%的HgCl2處理8min，無菌水沖洗4～5次，最后用無菌濾紙吸干外植體表面的水分(張付豪等， 2019)。在培養(yǎng)皿中將莖段切為0.5cm長的小段，將其橫放于培養(yǎng)基上。

1.2.2 山蒼子愈傷組織的誘導(dǎo) 以1/2 MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加的植物生長調(diào)節(jié)劑為6-芐氨基嘌呤(6-benzylaminopurine，6-BA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-dichlorophenoxyacetic acid，2,4-D)、萘乙酸(naphthylacetic acid，NAA)，按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(33)，設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種3個(gè)外植體，重復(fù)3次。28天后觀察并統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率、褐化率及生長狀況。

1.2.3 愈傷組織的繼代增殖 將愈傷組織從莖段上切下并去除褐化部分后，接種到含不同質(zhì)量濃度6-BA、NAA的1/2 MS培養(yǎng)基上。按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(32)，設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種3～5塊愈傷組織，重復(fù)3次。28天后觀察并統(tǒng)計(jì)愈傷組織增殖系數(shù)、質(zhì)地及生長狀況。

1.2.4 不定芽分化 將致密的愈傷組織接種到含不同質(zhì)量濃度6-BA和吲哚丁酸(indole-3-butyric acid，IBA)的1/2 MS培養(yǎng)基上。按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(32)，設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理接種15瓶，每瓶接種2塊愈傷組織，重復(fù)3次。28天后觀察并統(tǒng)計(jì)不定芽分化率及平均不定芽數(shù)。

1.2.5 生根培養(yǎng) 將生長至3～5cm的不定芽轉(zhuǎn)至含不同質(zhì)量濃度IBA和活性炭的1/2 MS培養(yǎng)基上。按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(32)，設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種1個(gè)不定芽，重復(fù)3次。28天后記錄生根情況，統(tǒng)計(jì)不定芽生根率及平均根數(shù)。

1.2.6 煉苗與移栽 將生長健壯和根系粗壯的再生植株先擰松組培瓶瓶蓋煉苗1天，隨后以瓶蓋半開狀態(tài)煉苗1天，最后從組培瓶中取出，洗凈根系上附著的培養(yǎng)基后，置于盛有水的玻璃瓶中完全打開瓶蓋煉苗2天。煉苗完成后將其移栽于營養(yǎng)土、營養(yǎng)土∶珍珠巖= 3∶1(V/V)、紅壤土∶營養(yǎng)土∶珍珠巖= 2∶1∶1(V/V)、紅壤土∶營養(yǎng)土∶珍珠巖= 1∶1∶1(V/V)的移栽基質(zhì)中，移栽后放置于濕度為60%～70%的人工氣候室，覆蓋一層保鮮膜保濕培養(yǎng)2天后揭取。移栽28天后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。

1.3 培養(yǎng)條件

本研究培養(yǎng)基中均添加30 g·L-1蔗糖(除生根培養(yǎng)基中添加20 g·L-1蔗糖外)、7 g·L-1瓊脂，pH值調(diào)至5.8，于121℃高壓滅菌20min后使用。組培材料放置于培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，光照強(qiáng)度為20μmol·m-2s-1，光照時(shí)間為14 h·d-1的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

愈傷組織誘導(dǎo)率=形成愈傷組織的外植體數(shù)/接種成活的外植體數(shù)× 100%； 愈傷組織褐化率=愈傷組織褐化數(shù)/接種的愈傷組織數(shù)× 100%； 愈傷組織增殖系數(shù)=增殖后的愈傷組織質(zhì)量/增殖前的愈傷組織質(zhì)量； 不定芽分化率=分化出不定芽的愈傷組織數(shù)/接種的愈傷組織數(shù)× 100%； 不定芽生根率=生根的不定芽數(shù)/接種的不定芽數(shù)× 100%； 再生植株移栽成活率=移栽成活的再生植株數(shù)/移栽的再生植株數(shù)× 100%； 采用SPSS 25.0和Excel 2010對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、統(tǒng)計(jì)和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物生長調(diào)節(jié)劑對莖段愈傷組織誘導(dǎo)的影響

由表1可知 ，不同植物生長調(diào)節(jié)劑配比的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，山蒼子莖段愈傷組織的誘導(dǎo)率均為100%，但愈傷組織褐化率及生長狀況存在顯著差異。各因素不同水平下極差的大小反應(yīng)其對山蒼子愈傷組織褐化率的影響程度，極差分析發(fā)現(xiàn)，對愈傷組織褐化率的影響由高到低依次為6-BA、2,4-D和NAA。6-BA質(zhì)量濃度的增加導(dǎo)致愈傷組織褐化率顯著升高，當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為0.2 mg·L-1時(shí)，處理1(添加2,4-D)和處理2(添加NAA)的褐化率最低，但二者的愈傷組織狀態(tài)存在顯著差異。處理2誘導(dǎo)的愈傷組織結(jié)構(gòu)致密，誘導(dǎo)量多，而處理1誘導(dǎo)的愈傷組織結(jié)構(gòu)較致密，誘導(dǎo)量少。當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為2.0 mg·L-1時(shí)，愈傷組織褐化率最高，誘導(dǎo)量極少，生長狀態(tài)差。

以上結(jié)果表明，低質(zhì)量濃度的6-BA適宜山蒼子愈傷組織的誘導(dǎo)，處理2(1/2 MS + 0.2 mg·L-16-BA + 0.3 mg·L-1NAA + 30 g·L-1蔗糖 + 7 g·L-1瓊脂)為山蒼子莖段愈傷組織誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基，其愈傷組織的誘導(dǎo)率為100%，誘導(dǎo)出的愈傷組織為淡黃色，質(zhì)地致密，生長量大，生長狀態(tài)較好，不易發(fā)生褐化。將山蒼子莖段接種于處理2培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后，莖段兩端切口處開始膨大，并出現(xiàn)淡黃色愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)21天后，愈傷組織體積增大，質(zhì)地致密(圖1A、B)。

2.2 植物生長調(diào)節(jié)劑對愈傷組織繼代增殖的影響

由表2可知，6-BA對山蒼子愈傷組織的增殖系數(shù)影響最大，其次為NAA。6-BA質(zhì)量濃度的增加，導(dǎo)致愈傷組織增殖系數(shù)顯著降低，在相同6-BA質(zhì)量濃度下，隨著NAA質(zhì)量濃度的升高，增殖系數(shù)呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢。不同質(zhì)量濃度6-BA和NAA組合的培養(yǎng)基上，愈傷組織的質(zhì)地顯著不同，其中處理8的愈傷組織為疏松顆粒狀，顏色較綠(圖2A)，增殖系數(shù)最高，達(dá)3.80。處理7的愈傷組織質(zhì)地致密，顏色較暗，有光澤(圖2B)，增殖系數(shù)為3.43，與處理8差異不顯著。當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為1.5 mg·L-1時(shí)，愈傷組織均表現(xiàn)為疏松水漬狀(圖2C)，生長狀況較差，且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，褐化程度逐漸加重甚至死亡(圖2D)。在本研究后續(xù)的不定芽分化試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，致密型愈傷組織具有再分化能力，可分化出不定芽，而疏松顆粒狀愈傷組織增殖系數(shù)較高，但不具備再分化能力，且隨著繼代次數(shù)的增加逐漸褐化死亡。

以上結(jié)果表明，低濃度的6-BA和高質(zhì)量濃度的NAA適宜于山蒼子愈傷組織的增殖。通過綜合比較，處理7和處理8的增殖系數(shù)盡管均較高，但處理7誘導(dǎo)形成的愈傷組織致密，生長狀況良好，更利于后續(xù)分化，因此，處理7(1/2 MS + 0.5 mg·L-16-BA + 1.0 mg·L-1NAA + 30 g·L-1蔗糖 + 7 g·L-1瓊脂)為山蒼子愈傷組織繼代增殖的最適培養(yǎng)基。將生長一致的愈傷組織接種于處理7的培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天時(shí)，愈傷組織無明顯變化，繼續(xù)培養(yǎng)21天時(shí)，愈傷組織體積明顯增大，生長狀態(tài)良好(圖1C、D)。

表1 植物生長調(diào)節(jié)劑對山蒼子莖段愈傷組織誘導(dǎo)的影響①

2.3 植物生長調(diào)節(jié)劑對不定芽分化的影響

由表3可知，當(dāng)不定芽分化培養(yǎng)基中未添加6-BA和IBA以及IBA質(zhì)量濃度高于6-BA時(shí)，愈傷組織未分化出不定芽。當(dāng)6-BA和IBA質(zhì)量濃度均較高時(shí)，不定芽分化率和平均不定芽數(shù)極低。隨著IBA質(zhì)量濃度的降低，不定芽分化率和平均不定芽數(shù)也逐漸升高，當(dāng)IBA質(zhì)量濃度為 0.1 mg·L-1時(shí)，山蒼子不定芽分化率和平均不定芽數(shù)均顯著高于1.0 mg·L-1的處理。在添加0.1 mg·L-1IBA的處理中，6-BA質(zhì)量濃度從2.0 mg·L-1降低到0.5 mg·L-1時(shí)，山蒼子不定芽分化率顯著提高，當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，不定芽分化率和平均不定芽數(shù)均最高，分別為45.59%和8.14。因此，6-BA和IBA質(zhì)量濃度均較低時(shí)，有利于山蒼子不定芽分化。

以上結(jié)果表明，6-BA和IBA的較低質(zhì)量濃度配比是山蒼子不定芽分化的關(guān)鍵。處理1(1/2 MS + 0.5 mg·L-16-BA + 0.1 mg·L-1IBA + 30 g·L-1蔗糖 + 7 g·L-1瓊脂)為山蒼子不定芽分化的最適培養(yǎng)基，不定芽分化率最高，為45.59%，分化旺盛，平均不定芽數(shù)達(dá)8.14，不定芽生長狀態(tài)較好。將狀態(tài)良好的愈傷組織接種到處理1的培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天時(shí)，愈傷組織逐漸出現(xiàn)芽點(diǎn)(圖1E)； 培養(yǎng)14天時(shí)，愈傷組織體積逐漸變大，表面開始分化出較多不定芽(圖1F)； 培養(yǎng)21天時(shí)，愈傷組織表面的不定芽明顯長大(圖1G)； 培養(yǎng)28天時(shí)，不定芽生長旺盛(圖1H)。

表2 植物生長調(diào)節(jié)劑對山蒼子愈傷組織繼代增殖的影響①

圖1 山蒼子莖段愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生過程

表3 植物生長調(diào)節(jié)劑對山蒼子不定芽分化的影響①

圖2 山蒼子愈傷組織繼代過程中的不同質(zhì)地

2.4 IBA和活性炭對不定芽生根的影響

由表4可知，IBA和活性炭對山蒼子不定芽生根率及平均根數(shù)具有顯著影響。在添加活性炭的培養(yǎng)基中，盡管根生長迅速，但生根率較低，根數(shù)少，根細(xì)長，長勢弱，移栽不易成活(圖3A)。在不添加活性炭的培養(yǎng)基中，生根率高，根萌發(fā)快，生根數(shù)多，根粗壯，移栽易成活(圖3B、C)。由此認(rèn)為，添加活性炭可能不利于山蒼子不定芽生根。無論培養(yǎng)基中是否添加活性炭，當(dāng)培養(yǎng)基中IBA質(zhì)量濃度從0.2 mg·L-1提高到1.0 mg·L-1時(shí)，生根率都呈先升高后降低的趨勢(表4)。在不添加活性炭的培養(yǎng)基中，IBA質(zhì)量濃度為0.5 mg·L-1時(shí)的不定芽生根率和平均根數(shù)顯著高于其他質(zhì)量濃度(表4)。

綜合分析以上結(jié)果，選擇處理2(1/2 MS + 0.5 mg·L-1IBA + 20 g·L-1蔗糖 + 7 g·L-1瓊脂)為山蒼子不定芽生根的最適培養(yǎng)基，不定芽生根率達(dá)93.33%，平均根數(shù)達(dá)6.74，根粗壯，再生植株生長健壯。將山蒼子不定芽接種于處理2培養(yǎng)基上培養(yǎng)14天時(shí)，不定芽莖段皮部開始萌發(fā)出根； 培養(yǎng)28天時(shí)，根粗壯，長勢良好(圖1I、J)。

表4 IBA和活性炭對山蒼子不定芽生根的影響①

圖3 添加活性炭(A)與不添加活性炭(B和C)的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成的不定根對比

2.5 不同移栽基質(zhì)對山蒼子再生植株移栽成活的影響

由表5可知，不同移栽基質(zhì)對山蒼子再生植株移栽成活具有顯著影響。將山蒼子再生植株移栽至營養(yǎng)土∶珍珠巖(V/V= 3∶1)的混合基質(zhì)中時(shí)，移栽成活率最高(83.33%)，移栽至其他基質(zhì)中時(shí)，移栽成活率均較低，最低僅為27.78%。因此，將山蒼子再生植株移栽至營養(yǎng)土∶珍珠巖(V/V= 3∶1)的混合基質(zhì)中培養(yǎng)7天后，葉片展開，移栽植株生長狀況良好(圖1K)，培養(yǎng)28天后，移栽植株生長健壯，植株長高，葉片長大，有新葉長出，無病蟲害現(xiàn)象發(fā)生(圖1L)。

表5 基質(zhì)對山蒼子再生植株移栽成活的影響

3 討論

植物生長調(diào)節(jié)劑的種類、質(zhì)量濃度和配比是影響愈傷組織誘導(dǎo)和增殖以及愈傷組織褐化的關(guān)鍵因素(郎玉濤等， 2007； 李琰等， 2010)。雖然添加適宜濃度的2,4-D有利于多種植物愈傷組織的形成(符文英等， 2004； Leeetal.， 2012； 矯麗曼等， 2017)，但本研究發(fā)現(xiàn)NAA更有利于山蒼子莖段愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖。有研究表明，高濃度的6-BA可刺激愈傷組織產(chǎn)生酚類物質(zhì)，酚類物質(zhì)被氧化后產(chǎn)生的醌類物質(zhì)可抑制愈傷組織的生長(李冬杰等， 2005)。本研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的6-BA同樣易使山蒼子愈傷組織發(fā)生褐化，導(dǎo)致其死亡，因此，本研究選擇較低濃度的6-BA以及適宜濃度的NAA進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)，愈傷組織的誘導(dǎo)率可達(dá)100%，愈傷組織在后續(xù)培養(yǎng)中也具有較高的增殖系數(shù)。

前人研究表明，不定芽分化與不同愈傷組織質(zhì)地聯(lián)系密切，只有適宜的愈傷組織質(zhì)地才能誘導(dǎo)分化出不定芽(張文泉等， 2018)。本研究發(fā)現(xiàn)，在山蒼子愈傷組織繼代增殖過程中，不同培養(yǎng)基上增殖培養(yǎng)的愈傷組織在質(zhì)地上存在明顯差異，只有致密型愈傷組織具有分化能力，隨著繼代次數(shù)的增加仍可不斷分化； 而疏松顆粒狀愈傷組織和疏松水漬狀愈傷組織均不具備分化能力，且隨著繼代次數(shù)的增加逐漸褐化死亡。木本植物培養(yǎng)中愈傷組織分化不定芽是較難的一個(gè)環(huán)節(jié)，不定芽分化率的高低不僅與愈傷組織的質(zhì)量有關(guān)，還需要較高濃度的細(xì)胞分裂素和較低濃度的生長素，這不僅取決于植物生長調(diào)節(jié)劑的種類，還取決于它們之間的比例(譚曉風(fēng)等， 2013； 辛亞龍等， 2017； 馬彥軍等， 2017； 袁云香， 2020)。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，當(dāng)生長素濃度高于細(xì)胞分裂素濃度時(shí)，有利于山蒼子愈傷組織的誘導(dǎo)與增殖； 當(dāng)細(xì)胞分裂素濃度高于生長素濃度時(shí)，有利于山蒼子不定芽分化。前人對山蒼子愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生研究中發(fā)現(xiàn)，添加為2.0 mg·L-1的6-BA和0.1 mg·L-1的IBA有利于不定芽分化，不定芽分化率為28.57%，平均不定芽數(shù)最高為2.86； 當(dāng)6-BA濃度從2.0 mg·L-1升高至5.0 mg·L-1時(shí)，不定芽分化率逐漸降低，愈傷組織褐化死亡率也逐漸升高(林麗媛等， 2013)。而本研究發(fā)現(xiàn)，6-BA和IBA的較低濃度配比有利于山蒼子不定芽分化。在添加0.1 mg·L-1或0.5 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基中，隨著6-BA添加濃度的降低，山蒼子不定芽分化率及平均不定芽數(shù)均逐漸升高。當(dāng)添加0.5 mg·L-1的6-BA和0.1 mg·L-1的IBA時(shí)，不定芽分化率最高，可達(dá)45.59%，平均不定芽數(shù)可達(dá)8.14，顯著提高了山蒼子不定芽分化率及平均不定芽數(shù)。

蔗糖是植物組織培養(yǎng)基的重要成分，其濃度不僅影響愈傷組織誘導(dǎo)、增殖和不定芽分化，也對生根有一定的影響。有研究表明，較低的蔗糖濃度有利于試管苗生根(劉均利等， 2020)。而前人對山蒼子不定芽生根培養(yǎng)研究中，在添加濃度為30 g·L-1蔗糖的培養(yǎng)基上，生根率最高僅為45.33%(林麗媛等， 2013)。因此，本研究進(jìn)行生根培養(yǎng)時(shí)，將前人所使用的蔗糖濃度從30 g·L-1降低到20 g·L-1，并添加濃度為0.5 mg·L-1的IBA，顯著提高了不定芽的生根率(高達(dá)93.33%)，誘導(dǎo)出的根較粗，移栽易成活。此外，培養(yǎng)基中添加活性炭具有吸附酚類等有害物質(zhì)含量的作用，對許多植物的生根具有一定的促進(jìn)作用(劉根林等， 2001； Chutipaijitetal.， 2018)。但本研究發(fā)現(xiàn)，不添加活性炭誘導(dǎo)出的根較粗，移栽易存活，而添加活性炭誘導(dǎo)出的根萌發(fā)較慢，根細(xì)長，長勢較弱，移栽不易存活，這可能是由于活性炭的吸附作用降低了生長素的濃度而影響山蒼子不定芽的生根。

移栽成活是工廠化繁育的關(guān)鍵，而移栽基質(zhì)是試管苗移栽成活的基礎(chǔ)，通常移栽基質(zhì)要求可以提供根系所需要的養(yǎng)分，并保持一定的含水量(陳寶玲等， 2014)。本研究發(fā)現(xiàn)，添加紅壤土?xí)股缴n子再生植株移栽不易存活，這可能是由于紅壤土易板結(jié)，會限制根系生長。而營養(yǎng)土含有大量礦物質(zhì)和有機(jī)質(zhì)，能為再生植株生長提供所必須的營養(yǎng)。將珍珠巖與營養(yǎng)土混合，可以增加土壤透氣性，防止土壤板結(jié)，促進(jìn)根系生長。因此，本研究使用營養(yǎng)土與珍珠巖的混合基質(zhì)用于山蒼子再生植株的移栽，獲得了較高的移栽成活率。

4 結(jié)論

本研究以山蒼子莖段為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，建立了植物再生體系，該培養(yǎng)體系顯著提高了山蒼子不定芽的分化率與生根率，再生植株移栽成活率高，研究結(jié)果為山蒼子良種的工廠化繁育奠定了基礎(chǔ)，也為山蒼子遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立提供了技術(shù)支撐。