可變剪接在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展

張雅晴，劉禮新

（1.甘肅省婦幼保健院；2.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄形成的前體mRNA經(jīng)過去除內(nèi)含子，使外顯子按照一定的順序重新拼接在一起，形成成熟mRNA的過程稱為剪接；而不同的外顯子組合產(chǎn)生不同的成熟mRNA的過程稱為可變剪接（alternative splicing，AS），也稱為選擇性剪接［1］。大約95%的人類蛋白編碼基因通過AS產(chǎn)生多種mRNA亞型，增加了真核生物基因表型和蛋白質(zhì)功能的多樣性［2-3］?？勺兗艚拥淖罱K蛋白產(chǎn)物會(huì)表現(xiàn)出不同的結(jié)構(gòu)或相互拮抗的功能，并且在相同的細(xì)胞類型中可能由于表達(dá)水平的差異而導(dǎo)致不同的表型。近幾十年來，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)腫瘤組織比正常組織多高達(dá)30%的AS事件［4］。腫瘤細(xì)胞中異常AS事件，產(chǎn)生特殊的剪接亞型，影響細(xì)胞功能，控制腫瘤發(fā)生、發(fā)展。深入了解AS機(jī)制可為開發(fā)靶向癌癥治療策略提供新的機(jī)會(huì)。

去除內(nèi)含子、連接外顯子、產(chǎn)生成熟mRNA的剪接過程是由剪接體完成的，剪接體是RNA和蛋白質(zhì)組成的復(fù)合物，由U1、U2、U4、U5、U6小核糖核蛋白（small nuclear ribonucleoprotein，snRNP）和200多種蛋白質(zhì)組成［5-6］。剪接的關(guān)鍵在于剪接體各組分通過識(shí)別mRNA上高度保守的一種GU-AG序列，即內(nèi)含子5'端為GU，3'端為AG；這類內(nèi)含子以同樣的方式被剪接，然后兩端的外顯子進(jìn)行拼接［7］。細(xì)胞內(nèi)的可變剪接過程受到多種因素調(diào)控，如剪接位點(diǎn)的堿基序列、RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)和剪接調(diào)控元件等［8］。剪接位點(diǎn)的識(shí)別和選擇以及剪接體的聚集需要順式作用元件和反式作用因子［9］。順式作用元件，分為內(nèi)含子剪接增強(qiáng)子（intronic splicing enhancer，ISE）和內(nèi)含子沉默子（intronic splicing silencer，ISS），以及外顯子增強(qiáng)子（exonic splicing enhancer，ESE）和外顯子沉默子（exonic splicing enhancer silencer，ESS），是除可變外顯子和內(nèi)含子外唯一提供與反式作用因子結(jié)合的基因位點(diǎn)。在癌癥中，AS事件已經(jīng)多次被觀察到，其原因是編碼順式作用元件［10］或剪接因子［11］或AS機(jī)制中相關(guān)基因的突變［1，12］影響剪接位點(diǎn)的識(shí)別。

異常AS事件與多種疾病相關(guān)，如阿爾茨海默病、先天性肌無力綜合征、脊髓肌肉萎縮、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、心血管疾病和糖尿病等。大多數(shù)疾病都是由于位于規(guī)范RNA剪接位點(diǎn)的基因突變或剪接體、剪接調(diào)節(jié)因子表達(dá)水平的改變?cè)斐傻?。除了這些，AS與惡性腫瘤也密切有關(guān)。

腫瘤發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過程，涉及多個(gè)基因的異常表達(dá)。在癌細(xì)胞中，剪接因子的異常表達(dá)導(dǎo)致可變剪接事件的紊亂，導(dǎo)致蛋白表達(dá)異常，促進(jìn)惡性進(jìn)展。越來越多的證據(jù)證明了異常AS在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的重要作用。一項(xiàng)對(duì)33種不同癌癥類型的癌癥基因組圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)的分析表明，119個(gè)剪接因子基因的突變可能是癌癥的驅(qū)動(dòng)因素［13］。除了基因突變，在癌癥中，超過70%的剪接因子和84%的RNA結(jié)合蛋白在mRNA水平上調(diào)控異常［14-15］。通過突變或改變對(duì)剪接機(jī)制和調(diào)節(jié)因子的干擾導(dǎo)致癌基因和抑癌基因的異常AS，形成特異性異構(gòu)體，促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展。與正常細(xì)胞不同，在癌癥細(xì)胞中，由于剪接過程干擾和無效的無意義介導(dǎo)的mRNA衰減（nonsense mediated mRNA decay，NMD），大量異常轉(zhuǎn)錄本積累。NMD是mRNA質(zhì)量控制系統(tǒng)的一部分，它負(fù)責(zé)異常轉(zhuǎn)錄本的降解。在癌細(xì)胞中，NMD調(diào)節(jié)也經(jīng)常被破壞，導(dǎo)致異常轉(zhuǎn)錄本的積累［16-17］。2013年有學(xué)者提出，異常剪接是癌癥的新標(biāo)志［18］。異常選擇性剪接的發(fā)生能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移、血管新生、免疫逃逸等惡性行為。

1 AS與增殖、凋亡

異常AS能夠通過產(chǎn)生具有異常增殖特性或抗凋亡特性的剪接異構(gòu)體參與癌基因激活。細(xì)胞周期中不同步驟的調(diào)節(jié)改變會(huì)導(dǎo)致癌細(xì)胞的無序增殖。許多參與細(xì)胞周期調(diào)控的基因表現(xiàn)出剪接變異。例如，基因CCND1編碼細(xì)胞周期蛋白D1有兩個(gè)剪接異構(gòu)體：細(xì)胞周期蛋白D1a和細(xì)胞周期蛋白D1b［19］。Cyclin D1b的形成與基因外顯子4和內(nèi)含子4連接的G/A多態(tài)性直接相關(guān)［20］。Cyclin D1a可與CDK4/6相互作用形成復(fù)合物，并負(fù)責(zé)腫瘤抑制蛋白R(shí)b的磷酸化，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。Cyclin D1b也能與CDK4相互作用，但不能磷酸化Rb［21-22］。細(xì)胞周期蛋白D1b和細(xì)胞周期蛋白D1a之間可能存在著一種平衡，前者通過對(duì)抗細(xì)胞周期蛋白D1a的功能來限制癌癥的生長(zhǎng)［23］。

RNA結(jié)合序列蛋白5（RNA-binding motif protein 5，RBM5）作為腫瘤抑制基因和剪接因子，通過識(shí)別表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）前體mRNA錯(cuò)誤的3'剪接位點(diǎn)，提高無意義mRNA的產(chǎn)生，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖［24］。整合素α6（integrin subunit alpha 6，ITGA6）前體mRNA可變剪接成兩個(gè)剪接亞型：TGA6A和ITGA6B。在結(jié)腸癌細(xì)胞中，原癌基因MYC可以通過上皮剪接調(diào)節(jié)蛋白2（epithelial splicing regulatory protein 2，ESRP2）調(diào)節(jié)ITGA6整合素基因的啟動(dòng)子激活和剪接，從而有利于結(jié)直腸癌細(xì)胞中促增殖性ITGA6A異構(gòu)體的產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞增殖［25］。在肺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了RNA結(jié)合序列蛋白10（RNA-binding motif protein 10，RBM10）的突變，影響NUMB剪接調(diào)控，并誘導(dǎo)腫瘤的增殖［26］。

凋亡是生物體內(nèi)重要的生理過程，機(jī)體通過凋亡清除衰老及異常細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞則表現(xiàn)出凋亡被抑制的特性?？勺兗艚邮堑蛲鲞^程中重要的調(diào)控形式，同一基因轉(zhuǎn)錄的mRNA前體通過不同的剪接產(chǎn)生不同轉(zhuǎn)錄本，翻譯得到不同的蛋白異構(gòu)體。例如：Bcl-x可以獲得兩種不同的剪接亞型，Bcl-xl和Bcl-xs，其中Bcl-xl抑制凋亡，Bcl-xs促進(jìn)凋亡［27］。有報(bào)道稱多聚嘧啶區(qū)結(jié)合蛋白1（polypyrimidine tract-binding protein 1，PTBP1）過表達(dá)可產(chǎn)生促進(jìn)細(xì)胞凋亡的Bcl-xs；相反，下調(diào)PTBP1可產(chǎn)生Bcl-xl，抑制細(xì)胞凋亡［28］。誘導(dǎo)的MCL-1作為Bcl-2家族調(diào)控因子中的凋亡因子，當(dāng)其表達(dá)降低時(shí)可引起細(xì)胞凋亡，而MCL-1基因的選擇性剪接可由剪接因子SRSF5和SRSF1調(diào)控［29］。

Caspase是在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用的蛋白質(zhì)。其中一種caspase-3是一種促凋亡蛋白，在細(xì)胞凋亡過程中通過裂解被激活［30］。它具有一個(gè)催化結(jié)構(gòu)域，使其在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮作用。caspase-3的AS產(chǎn)生了另一種亞型caspase-3s［31］。這種異構(gòu)體在癌癥組織中的表達(dá)明顯高于在健康組織，并且無催化位點(diǎn)，這種亞型抑制細(xì)胞凋亡。

抗凋亡因子如survivin也會(huì)發(fā)生AS。在生理背景下，該蛋白弱表達(dá)，但在大多數(shù)人類癌癥中已觀察到其過表達(dá)。最近通過高通量測(cè)序獲得的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)了14種新的異構(gòu)體［32］。其中survivin-ΔEx3通過與caspase-3和Bcl-2結(jié)合，阻斷其裂解，保持抗凋亡功能［33］。Survivin-3B，它在腫瘤中特異性表達(dá)，具有抗凋亡的特性，它能結(jié)合caspase-8和caspase-6促進(jìn)免疫逃逸和化療耐藥［34-35］，靶向survivin-3B，可能對(duì)癌癥治療有用。另外兩個(gè)異構(gòu)體，survivin-2B［36］和survivin-2α［37］被描述為促凋亡異構(gòu)體。

綜上可見，AS對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響可能為腫瘤治療提供新的治療靶點(diǎn)。

2 AS與侵襲、轉(zhuǎn)移

侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤治療的兩大障礙。上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）在腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)過程中被異常激活。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（Transforming growth factor-β，TGF-β）作為EMT的主要誘導(dǎo)因子，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β激活激酶1（transforming growth factor-beta activated kinase 1，AK1）在EMT過程中選擇性剪接以排斥外顯子12［38］。CD44是細(xì)胞膜上的一種糖蛋白，是腫瘤中被廣泛認(rèn)可的干細(xì)胞標(biāo)志物。在EMT中，CD44的選擇性剪接是通過剪接因子ESRP1的調(diào)控而改變的，它決定了CD44與細(xì)胞表面受體酪氨酸激酶之間的相互作用，所生成的CD44s可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞EMT的發(fā)生和發(fā)展［39］。ESRP1和hnRNPM可以競(jìng)爭(zhēng)前體mRNA中富含GU的結(jié)合位點(diǎn)，并調(diào)節(jié)外顯子包含或跳躍，促進(jìn)細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化［40］。最近研究發(fā)現(xiàn)，hnRNPM和ESRP1是EMT剪接程序的關(guān)鍵調(diào)控因子，并且與乳腺癌相關(guān)［41］。

RAC1的活性剪接異構(gòu)體，包括外顯子4，被稱為RAC1b，在多種腫瘤類型中過表達(dá)。Rac1b在乳腺癌小鼠模型中被確定為Srsf1的直接剪接靶點(diǎn)，已被證明通過產(chǎn)生活性氧（ROS）介導(dǎo)EMT。Rac1b過表達(dá)后，ROS增加誘導(dǎo)EMT轉(zhuǎn)錄因子Snail，上調(diào)vimentin，從而導(dǎo)致EMT的誘導(dǎo)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展［42］。

3 AS與血管生成

新生血管形成是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵特征之一。許多蛋白質(zhì)作為血管生成激活因子，包括成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、腫瘤壞死因子-α和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）。VEGF-A由8個(gè)外顯子組成，由6、7、8號(hào)外顯子交替選擇3'和5'產(chǎn)生不同亞型，控制血管生成。VEGF-A可以促進(jìn)血管生成和抗血管生成，被用于抗血管生成治療［43］。據(jù)報(bào)道，抑制絲氨酸/精氨酸蛋白激酶1（Serine/arginine protein kinase1，SRPK1）可 以 將VEGF的剪接轉(zhuǎn)化為VEGF120，具有抗血管生成作用，從而抑制腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)［44］。來自小鼠視網(wǎng)膜模型的證據(jù)表明，SRPK抑制劑1（SRPKIN-1）作為SRPK的抑制劑，可以調(diào)節(jié)VEGF的剪接，然后將其轉(zhuǎn)化為抗血管生成的VEGF-A165b亞型［45］。血管生成中其他因子的選擇性剪接，以提供腫瘤發(fā)育所需的所有營(yíng)養(yǎng)，需要進(jìn)一步論證。

4 AS與能量代謝

越來越多的證據(jù)表明，與癌癥相關(guān)的AS有助于促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和增殖，部分原因是影響腫瘤代謝重編。在腫瘤發(fā)展過程中，由于過度生長(zhǎng)，癌細(xì)胞可能會(huì)經(jīng)歷營(yíng)養(yǎng)剝奪和缺氧。與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞更傾向于通過有氧糖酵解途徑代謝葡萄糖，這使得一些基因編碼酶易受選擇性剪接的影響。糖酵解最后一步是磷酸烯醇丙酮酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸，該過程由PKM催化，PKM由兩個(gè)基因編碼：PKLR和PKM，每個(gè)基因產(chǎn)生兩種不同的變體［46-47］。PKLR主要在肝臟和造血細(xì)胞中表達(dá)，但大多數(shù)組織表達(dá)PKM，編碼PKM1和PKM2異構(gòu)體［48］。通過兩個(gè)互斥的外顯子（外顯子9和10）的選擇性剪接，PKM1在正常細(xì)胞中結(jié)構(gòu)性表達(dá)，而PKM2在腫瘤細(xì)胞中以細(xì)胞信號(hào)依賴的方式表達(dá)［49］。一項(xiàng)研究表明，PKM的選擇性剪接受剪接因子的調(diào)控，如hnRNPA1/hnRNPA2，PTB/nPTB和SRSF3［50］，提示剪接因子在腫瘤代謝的選擇性剪接中起重要作用。PKM2的上調(diào)在腫瘤中是常見的，有助于切換到糖酵解代謝，反映了PKM1和PKM2比率的調(diào)節(jié)，通過選擇性剪接來決定有氧糖酵解和線粒體氧化磷酸化之間的選擇，以響應(yīng)代謝應(yīng)激。腫瘤代謝受可變剪接事件影響的另一個(gè)方面是細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)，這是許多實(shí)體腫瘤內(nèi)部體積的共同特征。最近的一項(xiàng)RNA-seq研究表明，乳腺癌細(xì)胞在缺氧條件下培養(yǎng)時(shí)發(fā)生了廣泛的可變剪接變化，如主要內(nèi)含子保留事件（LDHA、TNFSF13和ARHGAP4）以及外顯子跳變（MARCH7、PCBP2和LRCH3）［51］。

脂肪酸代謝的改變也被認(rèn)為是腫瘤進(jìn)展過程中另一個(gè)重要的代謝異常。脂肪酸在能量?jī)?chǔ)存、膜合成和信號(hào)分子產(chǎn)生等方面發(fā)揮著重要作用［52］。脂肪酸必須轉(zhuǎn)化為?；o酶A（long-chain acyl-CoA synthetase，ACSL），?；o酶A合成酶催化脂肪酸的轉(zhuǎn)化［53］。ACSL家族包括五個(gè)異構(gòu)體，每個(gè)都由一個(gè)不同的基因編碼，并有幾個(gè)剪接變體［54］。其中ACSL4在肝臟腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常組織，其通過破壞脂質(zhì)代謝途徑參與腫瘤的發(fā)生。ACSL4的表達(dá)在乳腺癌細(xì)胞中也被觀察到促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。

5 AS與化學(xué)、靶向耐藥

腫瘤發(fā)生的一個(gè)重要基礎(chǔ)是基因表達(dá)譜的重新編程，這導(dǎo)致產(chǎn)生有利于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的蛋白質(zhì)［55］。這些蛋白在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間有差異表達(dá)，可以作為抗癌藥物的特異性靶點(diǎn)，在消除腫瘤細(xì)胞的同時(shí)降低其對(duì)正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性。然而，腫瘤細(xì)胞不可避免的耐藥性極大地限制了靶向藥物的臨床應(yīng)用。異?？勺兗艚邮歉淖兡[瘤細(xì)胞基因表達(dá)譜的主要因素，它通過改變靶向藥物的靶點(diǎn)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。伊馬替尼是一種抑制酪氨酸激酶的抗腫瘤藥物，常用于治療慢性骨髓性白血病，通過與BCL2家族成員BIM的BH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合，誘導(dǎo)其失活，從而促進(jìn)白血病細(xì)胞的凋亡［56］。然而，BIM-γ，一個(gè)跳過外顯子4的剪接異構(gòu)體，參與了白血病細(xì)胞對(duì)伊馬替尼的耐藥性［57］。BIM可能由于缺乏exon4而缺乏伊馬替尼的靶標(biāo)，從而進(jìn)一步誘發(fā)了對(duì)伊馬替尼的耐藥性。雌激素受體（ER）在雌激素刺激下誘導(dǎo)靶基因的轉(zhuǎn)錄，是乳腺癌發(fā)生的主要因素。因此，針對(duì)雌激素受體的抗癌藥物他莫昔芬通過改變雌激素受體的構(gòu)象和擾亂乳腺癌靶基因的轉(zhuǎn)錄來抑制癌細(xì)胞的增殖［58］。然而，一些乳腺癌患者對(duì)他莫昔芬產(chǎn)生了耐藥性。ER家族主要包括兩類成員：ERα和ERβ。激素主要通過激活ERα來刺激細(xì)胞增殖。ERα有三種形式異構(gòu)體，全長(zhǎng)異構(gòu)體ERα66和兩個(gè)截?cái)喈悩?gòu)體ERα36和ERα46。ERα36轉(zhuǎn)錄本跳過外顯子7和外顯子8缺乏轉(zhuǎn)錄激活域，因此不能直接激活靶基因轉(zhuǎn)錄［59］。然而，研究表明，ERα36可以激活備用通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖，包括MAPK/ERK和PI3K/ATK通路［60］。目前ERα36已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)與他莫昔芬耐藥密切相關(guān)。

許多乳腺癌和卵巢癌都存在BRCA1和BRCA2基因突變。這些蛋白是高效同源重組（HR）介導(dǎo)的雙鏈DNA斷裂修復(fù)所必需的。聚二磷酸腺苷核糖多聚酶（poly-ADP-ribose polymerase，PARP）參與單鏈DNA損傷的修復(fù)，從而減少了基因組中產(chǎn)生雙鏈斷裂的機(jī)會(huì)。因此，通過PARP抑制劑（PARPi）阻斷PARP酶對(duì)BRCA1/2基因失能的患者非常有效［61］。盡管PARP抑制劑已被證明可以提高生存期，但許多攜帶種系BRCA1或BRCA2突變的患者并不能從PARPi治療中獲益。此外，許多首次受益于PARPi或鉑治療的患者出現(xiàn)疾病進(jìn)展和耐藥［62］。植入BRCA1外顯子11突變腫瘤的小鼠表達(dá)了高水平的BRAC1-Δ11q，對(duì)PARPi抑制劑和順鉑耐藥［63］。抑制剪接體降低了BRAC1-Δ11q水平，并使外顯子11突變細(xì)胞系對(duì)PARPi增敏，這可能為表達(dá)高水平BRAC1-Δ11q的腫瘤重新增敏提供了一種策略。有趣的是BRAC1-Δ11q水平可以通過剪接體抑制劑或ASOs來降低，從而使細(xì)胞對(duì)PARP1抑制劑敏感［63-64］。

6 AS與免疫逃逸及免疫治療耐藥

腫瘤免疫治療是未來腫瘤治療策略的中心支柱，其中宿主免疫系統(tǒng)利用免疫檢查點(diǎn)抑制劑或過繼免疫細(xì)胞來消除腫瘤細(xì)胞。盡管與傳統(tǒng)治療方案相比，免疫療法有一些優(yōu)勢(shì)，但它在臨床環(huán)境中還未得到普及。這與某些腫瘤的高耐藥性有關(guān)，同一腫瘤實(shí)體的不同區(qū)域?qū)γ庖咧委煹姆磻?yīng)頻率不同。據(jù)報(bào)道，可變剪接通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)參與了腫瘤-免疫相互作用，即一些異常的選擇性剪接事件有助于腫瘤細(xì)胞免疫逃逸［65］。具體地說，腫瘤細(xì)胞可以通過異常的選擇性剪接分泌具有異常結(jié)構(gòu)的蛋白，作為誘餌結(jié)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑。同時(shí)異常的選擇性剪接事件介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞表面抗原的丟失，導(dǎo)致一些適應(yīng)性免疫細(xì)胞無法識(shí)別腫瘤細(xì)胞。

在腫瘤中，PD-1主要表達(dá)于免疫細(xì)胞表面，而PD-L1則表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞上?？筆D-1/PD-L1抗體（aPD-1/aPD-L1）可以與PD-1或PD-L1結(jié)合，從而阻止T細(xì)胞表面PD-1和腫瘤細(xì)胞PD-L1的相互作用，進(jìn)而部分恢復(fù)T細(xì)胞功能，從而增強(qiáng)T細(xì)胞殺死腫瘤細(xì)胞的作用，已經(jīng)被有效地用于治療多種癌癥。然而，一些腫瘤類型，如肺癌和胰腺癌，對(duì)這些抗體的反應(yīng)較差。最近，在多種癌癥中發(fā)現(xiàn)了一種癌源性PD-L1剪接異構(gòu)體，它可以從細(xì)胞中分離出來，在腫瘤微環(huán)境中積累，從而不同于在腫瘤細(xì)胞表面觀察到的野生型PD-L1表達(dá)［66］。值得注意的是，已經(jīng)證明PD-L1接異構(gòu)體與aPD-L1抗性有關(guān)。

CAR-T細(xì)胞是通過基因工程表達(dá)靶向腫瘤抗原的嵌合抗原受體的過繼性T細(xì)胞，通常用于治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤。腫瘤細(xì)胞表面的CD19抗原是CAR-T細(xì)胞中最常用的靶點(diǎn)。CARTER-19通過表達(dá)抗CD19的嵌合抗原受體來治療B細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的惡性腫瘤［67］。CARTER-19免疫治療已經(jīng)報(bào)道了顯著的臨床效果，它可能誘導(dǎo)針對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫效應(yīng)。但部分患者對(duì)CART-19療效較差，CART-19治療后癌癥復(fù)發(fā)的現(xiàn)象也不容忽視。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞表面抗原表位的丟失是抗CARTER-19的主要機(jī)制［68］。在B細(xì)胞淋巴瘤患者的耐藥和復(fù)發(fā)樣本中檢測(cè)到CD19Δex2豐度增加和CD19全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本水平下降。表達(dá)CD19Δex2的惡性B細(xì)胞無法被CARTER-19識(shí)別，導(dǎo)致對(duì)CARTER-19產(chǎn)生耐藥性。惡性B細(xì)胞中SRSF3的低表達(dá)誘導(dǎo)CD19Δex2的產(chǎn)生，這歸因于SRSF3作為參與CD19外顯子2保留的剪接因子［69］。

7 展望

異常的可變剪接改變了癌細(xì)胞中的蛋白質(zhì)表達(dá)模式，導(dǎo)致產(chǎn)生功能異常的蛋白質(zhì)異構(gòu)體，從而增強(qiáng)治療抗性，是近年來癌癥研究的熱點(diǎn)。然而，異常AS通過改變藥物作用的靶點(diǎn)和藥物信號(hào)通路，已成為靶向治療和免疫治療臨床應(yīng)用的主要障礙。幸運(yùn)的是，目前靶向可變剪接的藥物也在研發(fā)中，如小分子抑制劑與反義寡核苷酸（Antisense oligonucleotides，ASOs）。其中，ASOs是最有前途的治療藥物，其序列可以被設(shè)計(jì)成靶向癌細(xì)胞中的特定剪接事件，從而抑制腫瘤友好蛋白亞型的產(chǎn)生，并降低對(duì)靶向治療和免疫治療的耐藥性。因此，根據(jù)腫瘤異質(zhì)性產(chǎn)生不同序列的ASOs是未來腫瘤治療可行的研究方向。將這種特殊的ASOs與免疫治療藥物和靶向治療藥物相結(jié)合，可以最大限度地限制耐藥性的產(chǎn)生，同時(shí)為癌癥患者提供個(gè)體化、精準(zhǔn)的治療方案，達(dá)到預(yù)期的治療效果。因此，對(duì)可變剪接調(diào)控機(jī)制的深入研究拓展了我們對(duì)腫瘤發(fā)生的認(rèn)識(shí)，為腫瘤治療提供新的方向。