循環(huán)免疫復(fù)合物檢測(cè)在3種自身免疫性疾病診斷中的應(yīng)用*

吳阿陽,梅序橋,劉惠美,許煜煌,鄭杰鵬,林恒杰,楊忠杰

福建醫(yī)科大學(xué)附屬漳州市醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建漳州 363000

自身免疫性疾病是以免疫功能異常為主或伴皮膚、關(guān)節(jié)、血管等多系統(tǒng)損害的一類慢性炎癥性疾病，該類疾病一般具有較長(zhǎng)的病程，臨床常表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作和慢性遷延，目前臨床以類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)及彌漫性甲狀腺腫(Graves)病等較為常見。其中，RA是以炎性滑膜炎為主的自身免疫性疾病，患者會(huì)出現(xiàn)手關(guān)節(jié)及足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)對(duì)稱性、侵蝕性的關(guān)節(jié)炎癥，早期確診率不高，以至于多數(shù)患者未能及時(shí)得到治療，造成不可逆損傷[1]。臨床對(duì)其血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目主要為類風(fēng)濕因子(RF)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-CCP)等。SLE具有多種多樣的臨床表現(xiàn)，是一種與全身多種臟器有關(guān)的疾病，以大量自身抗體及補(bǔ)體形成為特征，因其臨床表現(xiàn)缺乏特異性，病程復(fù)雜，有漏診誤診的可能[2]。臨床對(duì)其血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目主要為抗核抗體、抗ds-DNA抗體、抗Sm抗體、抗心磷脂抗體。 Graves病是由于自身免疫功能紊亂導(dǎo)致甲狀腺功能異常的一種自身免疫性甲狀腺疾病，其病情較為隱匿，早期缺乏典型的臨床癥狀和指征較容易造成漏診或誤診[3]。臨床對(duì)其血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目主要為甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)與抗甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)。雖然不同的自身免疫性疾病有著各式各樣的臨床表現(xiàn)，診斷標(biāo)準(zhǔn)也有著很大的差距，且在疾病早期幾乎都沒有明顯癥狀[4]，而自身抗體在此時(shí)患者的血清中是可以檢測(cè)出的。正常情況下，機(jī)體內(nèi)的循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)可被快速降解，因此在血清中檢測(cè)不到或僅有很低濃度[5]，當(dāng)機(jī)體內(nèi)的CIC無法被快速降解時(shí)，將導(dǎo)致CIC堆積，最終導(dǎo)致免疫復(fù)合物病。CIC檢測(cè)對(duì)某些疾病的診斷、療效監(jiān)測(cè)、疾病活動(dòng)性、預(yù)后評(píng)估和發(fā)病機(jī)制研究等具有重要的參考價(jià)值。CIC在自身免疫性疾病中檢測(cè)的報(bào)道并不多。研究表明，多種相關(guān)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)能夠顯著提高自身免疫性疾病診斷的準(zhǔn)確性，降低疾病的漏診率和誤診率[6-8]。因此，本研究擬通過收集臨床確診RA、SLE及Graves病患者血清，對(duì)其血清中CIC濃度進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果探討CIC在自身免疫性疾病診斷中的價(jià)值，從而為臨床輔助診斷自身免疫性疾病提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年4月至2021年2月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬漳州市醫(yī)院確診的RA患者108例(RA患者組)、SLE患者100例(SLE患者組)、Graves病患者80例(Graves病患者組)作為研究對(duì)象。所有RA患者均符合2010年美國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)(ACR)與歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)聯(lián)合修訂的RA診斷新標(biāo)準(zhǔn)，RA患者組按疾病活動(dòng)性評(píng)分28(DAS28)評(píng)估[9]分為低活動(dòng)期RA患者組(2.65.1分)26例。RA患者組男性32例，女性76例，平均年齡為(42.51±10.26)歲。所有SLE患者均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)(ACR)修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)狼瘡疾病活動(dòng)性指數(shù)(SLE-DAI)評(píng)分[10]將SLE患者組分為SLE緩解期患者組(DAI ≤10分)44例，SLE活動(dòng)期患者組(DAI>10分)56例。SLE患者組男性29例，女性71例，平均年齡為(40.71±14.11)歲。入選Graves病患者均符合Graves病診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]。Graves病患者組男性26例，女性54例，平均年齡為(43.52±11.47)歲。將Graves病患者組根據(jù)血清TPOAb水平分為TPOAb低水平組(TPOAb≤35 IU/mL)15例、TPOAb中水平組(351 026 IU/mL)22例。健康對(duì)照組選自同期在本院健康體檢中心進(jìn)行常規(guī)體檢者30例。健康對(duì)照組排除SLE、RA、Graves病，經(jīng)詳細(xì)體格檢查及病史、家族史問詢，無自身免疫性疾病及其他慢性基礎(chǔ)疾病。健康對(duì)照組男性8例，女性22例，平均年齡為(42.24±11.75)歲。各組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，各組患者及健康對(duì)照組受試者知情并簽署同意書。

1.2儀器與試劑 CIC-Clq(含IgG抗體)檢測(cè)試劑盒購自杭州歐蒙醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)有限公司、37℃電熱恒溫箱購自上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司、TECAN RMP150酶標(biāo)儀購自上海帝肯貿(mào)易有限公司、TDZ5-WS低速自動(dòng)平衡離心機(jī)購自湖南長(zhǎng)沙湘儀儀器有限公司。

1.3方法 CIC采用固相Clq酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，進(jìn)行半定量測(cè)定，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，主要有樣本稀釋、加樣、孵育、洗滌、加酶、孵育、洗滌、加底物，最后在TECAN RMP150酶標(biāo)儀上完成比色。以試劑盒自帶的3個(gè)不同濃度的CIC標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)曲線。待測(cè)樣本通過比色后A值經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)曲線換算成相應(yīng)檢測(cè)濃度。檢測(cè)結(jié)果以 CIC≥20 RU/mL 為陽性，CIC<20 RU/mL為陰性。

2 結(jié) 果

2.14組血清CIC濃度比較 RA患者組、SLE患者組、Graves病患者組與健康對(duì)照組血清CIC濃度依次為(44.51±13.48)、(48.73±14.36)、(36.22±10.49)、(7.73±1.94)RU/mL。RA患者組血清CIC濃度與健康對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.14，P<0.05)；SLE患者組血清CIC濃度與健康對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.70，P<0.05)；Graves病患者組血清CIC濃度與健康對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.05，P<0.05)。

2.2低活動(dòng)期RA患者組、中活動(dòng)期RA患者組、高活動(dòng)期RA患者組血清CIC濃度比較 低活動(dòng)期RA患者組、中活動(dòng)期RA患者組、高活動(dòng)期RA患者組血清CIC濃度依次為(36.78±10.52)、(44.86±10.51)、(53.97±15.79)RU/mL。血清CIC濃度隨著RA疾病活動(dòng)度的升高而升高，中活動(dòng)期RA患者組與低活動(dòng)期RA患者組血清CIC濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.43，P<0.05)；高活動(dòng)期RA患者組與低活動(dòng)期RA患者組血清CIC濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.05，P<0.05)；高活動(dòng)期RA患者組與中活動(dòng)期RA患者組血清CIC濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.97，P<0.05)。

2.3SLE緩解期患者組、SLE活動(dòng)期患者組血清CIC濃度比較 56例SLE活動(dòng)期患者組血清CIC濃度為(74.49±21.35)RU/mL，高于44例SLE緩解期患者組血清CIC濃度[(14.58±3.64)RU/mL]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=18.39,P<0.05)。

2.4Graves病患者組各亞組間血清CIC濃度比較 TPOAb高水平組血清CIC濃度[(51.43±15.32)RU/mL]與TPOAb低水平組[(23.60±8.74)RU/mL]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.35，P<0.05);TPOAb高水平組血清CIC濃度與TPOAb中水平組[(33.66±10.95)RU/mL]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.39，P<0.05)。

3 討 論

自身免疫性疾病是一類慢性炎癥性疾病，在長(zhǎng)期的慢性發(fā)展過程中，機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生大量針對(duì)自身抗原的自身抗體,進(jìn)而形成致病性免疫復(fù)合物沉積。正常情況下機(jī)體內(nèi)的免疫復(fù)合物可被快速降解，有助于外來抗原的清除，但在疾病的長(zhǎng)期發(fā)展過程中，免疫復(fù)合物無法及時(shí)被機(jī)體清除，便沉積于機(jī)體的某些部位或在機(jī)體內(nèi)隨血液循環(huán)，體內(nèi)過量的CIC的能夠激活補(bǔ)體，并沉積于毛細(xì)血管壁、腎小球基底膜及其他血管外組織中，進(jìn)而誘導(dǎo)炎性反應(yīng)導(dǎo)致器官損傷，如腎小球腎炎、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)締組織病、病毒或細(xì)菌感染。 故CIC通過補(bǔ)體的經(jīng)典激活途徑啟動(dòng)了炎癥的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，在自身免疫性疾病的炎癥進(jìn)展中起到重要作用[12]。對(duì)患者血清CIC濃度檢測(cè)，以及動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CIC濃度變化，對(duì)判斷體內(nèi)CIC形成、病程的動(dòng)態(tài)觀察及預(yù)后的判斷具有重要意義。近年來，有學(xué)者開展了CIC與自身免疫性疾病的相關(guān)性研究，普遍認(rèn)為患者血清CIC濃度與自身免疫性疾病的發(fā)生有著非常密切的關(guān)系[13-14]。因此，本研究擬通過收集臨床確診RA、SLE及Graves病患者血清，檢測(cè)其血清CIC濃度，來評(píng)價(jià)CIC檢測(cè)在自身免疫性疾病診斷中的價(jià)值，為臨床早期輔助診斷自身免疫性疾病提供合理的理論依據(jù)。

目前國內(nèi)外檢測(cè)CIC方法很多,較常見的檢測(cè)方法包括血小板凝聚試驗(yàn)、聚乙二醇沉淀法、蛋白質(zhì)印記法等。本研究采用固相Clq酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)患者血清CIC濃度。該方法建立在免疫球蛋白的Fc段與Clq特異性結(jié)合的基礎(chǔ)上，因此該試驗(yàn)方法具有較高的靈敏度與較強(qiáng)的特異度，因其操作簡(jiǎn)便，也具有較好的重復(fù)性，適宜于臨床推廣應(yīng)用。本研究結(jié)果顯示，RA患者組、SLE患者組、Graves病患者組血清 CIC濃度明顯高于健康對(duì)照組，表明CIC在自身免疫性疾病中具有一定診斷意義。RA患者隨著病情發(fā)展，患者血清CIC濃度呈上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明CIC對(duì)于RA的輔助診斷具有一定價(jià)值，檢測(cè)CIC可作為RA不同活動(dòng)期及檢測(cè)預(yù)后療效的可靠指標(biāo)[15]；SLE活動(dòng)期組血清CIC濃度明顯高于SLE緩解期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明SLE患者病情的嚴(yán)重程度在血清CIC濃度及其動(dòng)態(tài)變化上有所體現(xiàn)，對(duì)于判斷SLE患者的病情發(fā)展具有一定價(jià)值[16-17]； Graves病患者組血清 CIC濃度明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且隨著病情的發(fā)展，患者血清CIC濃度也呈上升趨勢(shì)，說明在Graves病中血清TPOAb水平與CIC濃度有關(guān)，兩者對(duì)于Graves病的進(jìn)展也具有一定診斷參考價(jià)值，由此可見CIC也可作為Graves病患者疾病進(jìn)展的相關(guān)免疫學(xué)監(jiān)測(cè)指標(biāo)[18]。

綜上所述，血清CIC濃度在一定程度上反映了自身免疫性疾病的進(jìn)展情況，在RA、SLE、Graves病3種自身免疫性疾病中均有不同程度的升高，且隨著病情的發(fā)展，血清CIC濃度隨之上升。由此可見，血清CIC濃度檢測(cè)在自身免疫性疾病的輔助診斷中具有一定價(jià)值，對(duì)于該病的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后監(jiān)測(cè)具有較好的輔助診療價(jià)值。