谷胱甘肽生理功能、發(fā)酵生產(chǎn)及其在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用的研究進(jìn)展

楊世慧 王 軍 秦永發(fā) 黃家強(qiáng)*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)營(yíng)養(yǎng)與健康系，北京 100083；2.北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心，北京 100083；3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)春 130118；4.安徽古特生物科技有限公司，安慶 246000)

谷胱甘肽(glutathione，GSH)是細(xì)胞內(nèi)含量最豐富的低分子質(zhì)量硫醇化合物，它主要以還原型的形式存在于真核細(xì)胞內(nèi)，但也可以被氧化為谷胱甘肽二硫化物(GSSG)或與其他分子結(jié)合，如GSSG-輔酶A和GSSG-半胱氨酸。在細(xì)胞內(nèi)，約90%的GSH分布在胞漿中，還有少量分布在亞細(xì)胞器中，如線粒體、細(xì)胞核和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)[1]，在細(xì)胞外間隙也可以發(fā)現(xiàn)相對(duì)較低含量的GSH[2-3]。細(xì)胞內(nèi)GSH的穩(wěn)態(tài)水平取決于GSSG的合成、水解、循環(huán)以及細(xì)胞內(nèi)還原態(tài)、氧化態(tài)之間的平衡[2,4]。GSH失衡會(huì)在多種病理?xiàng)l件下觀察到，包括心臟代謝和心血管疾病、結(jié)核病、艾滋病、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病、阿爾茨海默氏病、不孕不育和癌癥[5-7]。在一些動(dòng)物試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，GSH具有抵抗氧化應(yīng)激、解毒、提高免疫能力、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育等功效，被添加到飼料中將有利于動(dòng)物的健康養(yǎng)殖。

目前，GSH在醫(yī)藥、食品及化妝品領(lǐng)域已有廣泛應(yīng)用，但在動(dòng)物保健領(lǐng)域的應(yīng)用尚處于起步階段，市場(chǎng)前景良好。本文就GSH的生理功能、發(fā)酵生產(chǎn)及其在動(dòng)物生長(zhǎng)與健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用和研究作以綜述，旨在為動(dòng)物的科學(xué)養(yǎng)殖與飼料生產(chǎn)提供參考。

1 GSH的生理功能

1.1 抗氧化作用

活性氧(ROS)是細(xì)胞正常代謝的產(chǎn)物，參與機(jī)體的正常生理生化過程。因此，平衡ROS的產(chǎn)生和消除多余ROS，對(duì)于維持良好的生理環(huán)境是至關(guān)重要的[8]。氧化應(yīng)激是由于正常的氧化平衡狀態(tài)被破壞時(shí)所引起的一種生理現(xiàn)象。通常情況下，細(xì)胞可以應(yīng)對(duì)輕微的氧化應(yīng)激，而超過細(xì)胞自身抗氧化能力所導(dǎo)致的嚴(yán)重氧化應(yīng)激會(huì)對(duì)DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)造成損傷，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。GSH是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中含量豐富的非酶類抗氧化劑，是細(xì)胞內(nèi)抵御氧化應(yīng)激的重要機(jī)制，也是對(duì)抗ROS的重要抗氧化系統(tǒng)防御線。

GSH在細(xì)胞內(nèi)的合成有2個(gè)依賴ATP的步驟：首先，γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)連接L-半胱氨酸(L-Cys)和谷氨酸(Glu)形成γ-谷氨酰半胱氨酸(γ-glutamylcysteine)；然后，谷胱甘肽合成酶(GS)將甘氨酸(Gly)加到這個(gè)中間體上，完成最終產(chǎn)物的合成。GSH生理功能的基礎(chǔ)主要是由于半胱氨酸的側(cè)鏈基團(tuán)上有1個(gè)活性巰基，它具有很強(qiáng)的供電子性。當(dāng)電子丟失時(shí)，被氧化形成GSSG[9]。雖然細(xì)胞內(nèi)GSH主要以還原性的形式存在，但嚴(yán)重的氧化應(yīng)激可以降低細(xì)胞將GSSG還原為GSH的能力，從而導(dǎo)致GSSG的積累[10]。細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)通常指氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)/還原型輔酶Ⅰ(NADH)、氧化型輔酶Ⅱ(NADP+)/還原型輔酶Ⅱ(NADPH)和GSH/GSSG的平衡。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)將過氧化氫(H2O2)和脂質(zhì)過氧化物(lipid peroxides，Lipid-OOH)分別轉(zhuǎn)化為水和脂醇(lipid alcohols，Lipid-OH)，GSH被氧化為GSSG，谷胱甘肽還原酶(GR)依賴于NADPH將GSSG還原為GSH，從而形成氧化還原循環(huán)，避免氧化損傷[9]。GSH在細(xì)胞內(nèi)的氧化還原過程如圖1所示。

Mitochondrion：線粒體；Peroxisome：過氧化物酶體；MnSOD：錳超氧化物歧化酶 manganese superoxide dismutase；Catalase：過氧化氫酶；H2O2：過氧化氫 hydrogen peroxide；H2O：水 water；O2：氧氣 oxygen；Cys：半胱氨酸 cysteine；Gln：谷氨酰胺 glutamine；GLS1/2：谷氨酰胺酶1/2 glutaminase 1/2；Glu：谷氨酸 glutamate；γ-GCS：γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 γ-glutamyl cys-teine synthetase；γ-glutamylcysteine：γ-谷氨酰半胱氨酸；ATP：三磷酸腺苷 adenosine triphosphate；GS：谷胱甘肽合成酶 glutathione synthase；Gly：甘氨酸 glycine；GSH-Px：谷胱甘肽過氧化物酶 glutathione peroxidase；GR：谷胱甘肽還原酶 glutathione reductase；NADP+：氧化型輔酶Ⅱ oxidized coenzyme Ⅱ；NADPH：還原型輔酶Ⅱ reduced coenzyme Ⅱ；GSH：谷胱甘肽 glutathione；GSSG：谷胱甘肽二硫化物 glutathione disulfide。

1.2 免疫作用

當(dāng)免疫細(xì)胞向病原體發(fā)起進(jìn)攻時(shí)，會(huì)釋放出一些強(qiáng)氧化性的化學(xué)成分，這些化學(xué)成分對(duì)機(jī)體細(xì)胞是有害的，而GSH可以中和這些強(qiáng)氧化性的化學(xué)成分，從而保護(hù)免疫細(xì)胞[11]。GSH的免疫作用可以通過以下3種途徑進(jìn)行：1)直接參與免疫系統(tǒng)的抗感染和炎癥反應(yīng)；2)促進(jìn)免疫細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞、單核細(xì)胞等的增殖；3)通過調(diào)節(jié)免疫因子如白細(xì)胞介素、抗腫瘤壞死因子、溶菌酶來(lái)發(fā)揮作用。在機(jī)體的免疫系統(tǒng)中，GSH的消耗主要有2個(gè)途徑：一是中和自由基，二是促進(jìn)免疫細(xì)胞的增長(zhǎng)。類似的研究還表明，免疫系統(tǒng)可以通過不同的細(xì)胞來(lái)抵抗感染和其他威脅，而這些細(xì)胞的健康生長(zhǎng)和活力與GSH的含量有關(guān)[12]。

1.3 解毒作用

組織中GSH含量最高的是肝臟，在肝臟有2個(gè)階段的解毒過程。第1階段主要是將脂溶性的有害化合物化學(xué)轉(zhuǎn)化為中間體；第2階段將中間體轉(zhuǎn)化為水溶性物質(zhì)，這些物質(zhì)可以通過腸道或腎臟排泄。如果沒有足夠的GSH來(lái)產(chǎn)生第2階段的酶，毒素將在肝臟中積累并產(chǎn)生危險(xiǎn)[13]。一些外源物質(zhì)如重金屬、異生物質(zhì)等，由于其具有吸引電子的能力，會(huì)引起氧化應(yīng)激，甚至導(dǎo)致細(xì)胞、組織和器官的損傷。GSH在金屬的運(yùn)輸、儲(chǔ)存和代謝過程中發(fā)揮著重要作用，它主要通過以下途徑發(fā)揮作用：1)在配體之間動(dòng)員和運(yùn)送金屬；2)跨細(xì)胞膜運(yùn)輸金屬；3)作為金屬結(jié)合的半胱氨酸的來(lái)源；4)在涉及金屬的氧化還原反應(yīng)中作為還原劑或輔因子[14-15]。除此之外，GSH的半胱氨酸部分的巰基對(duì)金屬有很高的親和力，可以與幾種金屬如汞、銀、鎘、砷、鉛、金、鋅和銅等形成熱力學(xué)穩(wěn)定的硫醇[16-19]。在哺乳動(dòng)物中，GSH結(jié)合物通常在腸道或腎臟通過水解和N-乙?；M(jìn)一步代謝，產(chǎn)生巰基尿酸，從尿液中排出。在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的無(wú)論是酶促還是非酶促反應(yīng)，與GSH結(jié)合都是一種非常重要的解毒手段[20]。在臨床上，GSH也可作為解毒劑，用于丙烯腈、氟化物、一氧化碳、重金屬、黃曲霉毒素及有機(jī)溶劑等中毒的解毒[21]。

2 GSH生產(chǎn)現(xiàn)狀

目前，生產(chǎn)GSH的方法主要存在4種途徑：直接萃取法、化學(xué)合成法、酶轉(zhuǎn)化法和微生物發(fā)酵法。直接萃取法的原理是利用有機(jī)溶劑從一些谷物的胚芽中萃取出GSH，但存在著純度低、得率低等缺點(diǎn)[22]?；瘜W(xué)合成法是以3種氨基酸為前體物質(zhì)并在人工干預(yù)的條件下合成GSH[23]，但是此法操作復(fù)雜，成本高昂。酶轉(zhuǎn)化法制取GSH是一種效率比較高的方法，它的關(guān)鍵技術(shù)在于控制底物、ATP、GSH合成酶系的酶活性[24]，但由于存在酶活性限制、ATP價(jià)格昂貴等不利因素，因此仍處于研究階段，還沒有實(shí)現(xiàn)工業(yè)生產(chǎn)。目前，生產(chǎn)GSH最主要的方法是微生物發(fā)酵法。微生物發(fā)酵法是以廉價(jià)的微生物原料為底物，利用微生物本身的反應(yīng)體系來(lái)生產(chǎn)GSH。微生物發(fā)酵法不僅成本較低，而且避免了環(huán)境的污染，是如今生產(chǎn)GSH的較熱門方法[25]。目前，也有嘗試?yán)煤铣缮飳W(xué)技術(shù)在體外建立ATP循環(huán)技術(shù)耦合酶促生產(chǎn)GSH[26]，該技術(shù)的應(yīng)用有可能取代傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵法生產(chǎn)工藝，有望推動(dòng)GSH的廣泛應(yīng)用。

3 微生物發(fā)酵法生產(chǎn)GSH

微生物發(fā)酵法最常用的微生物菌種有2類：酵母和大腸桿菌。通常情況下，為了提高微生物發(fā)酵法的GSH產(chǎn)量，可以采用基因修飾改造菌株及對(duì)菌種的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。

3.1 基因修飾

隨機(jī)突變是最早應(yīng)用的基因修飾技術(shù)之一。這項(xiàng)技術(shù)是基于應(yīng)用誘變劑以提高微生物中發(fā)生的自然突變率，在突變體中篩選出優(yōu)質(zhì)菌株。在紫外誘變釀酒酵母后，突變體積累的GSH含量比野生型親本菌株高出數(shù)倍[27]。Shao等[28]采用紫外和γ射線復(fù)合誘變技術(shù)，將產(chǎn)朊假絲酵母CCTCCM209298通過紫外線和γ射線進(jìn)行復(fù)合誘變，并進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)基組分，最終積累的GSH含量比初始時(shí)提高了2.4倍。

隨著基因工程、代謝工程、合成生物學(xué)等學(xué)科領(lǐng)域的發(fā)展，通過分子生物學(xué)手段將代謝流引向目的產(chǎn)物的合成逐漸取代了傳統(tǒng)的誘變育種。在原核生物中，由谷胱甘肽合成酶基因(gsh1和gsh2)編碼的基因可以合成GSH的2種酶：γ-GCS和GS，這2種基因在大腸桿菌中的表達(dá)水平影響GSH的產(chǎn)生[29]。由于GSH對(duì)γ-GCS的反饋抑制，從而限制了細(xì)胞內(nèi)GSH的過度積累。Chen等[30]將對(duì)GSH的反饋抑制不敏感的嗜熱鏈球菌編碼的雙功能酶和ATP調(diào)控系統(tǒng)成功地導(dǎo)入大腸桿菌BL21中，發(fā)酵后GSH含量是對(duì)照菌株的3倍。由于GSH的合成是高耗能反應(yīng)，為提高合成酶活性，Xu等[31]通過基因組整合構(gòu)建產(chǎn)朊假絲酵母的ATP6突變體；提高了ATP合成酶的活性，突變株的GSH含量提高了28.7%。蔣秋琪[32]在畢赤酵母突變菌株GS115-M7的基礎(chǔ)上，將攜帶gsh1和gsh2基因的重組質(zhì)粒整合在目標(biāo)菌株基因組，最終獲得1株穩(wěn)定遺傳的高產(chǎn)菌株GS115-M710，產(chǎn)量較重組前菌株提高了45.5%。

3.2 發(fā)酵條件優(yōu)化

通過基因修飾對(duì)菌種進(jìn)行選育可以提高單個(gè)菌體合成GSH的能力，但還需要進(jìn)一步提高單位體積細(xì)胞的數(shù)量。GSH發(fā)酵優(yōu)化主要集中在培養(yǎng)條件、3種前體氨基酸添加量、輔因子ATP方面。高宇豪[33]在添加氨基酸前體的條件下，優(yōu)化了檸檬酸鈉的添加量，最終搖瓶中GSH含量最高可達(dá)(371.12±8.47) mg/L。Schmacht等[34]研究了釀酒酵母Sa-07346生產(chǎn)GSH的最佳生長(zhǎng)條件，通過在發(fā)酵后期連續(xù)添加半胱氨酸，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GSH含量與沒有添加半胱氨酸的對(duì)照組相比增加了253%。

4 GSH在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用

GSH是一種能提高動(dòng)物機(jī)體免疫功能、節(jié)約飼料、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和改善肉品質(zhì)的新型飼料添加劑。飼糧中添加GSH可以促進(jìn)畜禽的健康養(yǎng)殖，降低抗生素的用量，改善肉制品的質(zhì)量和安全，具有很好的應(yīng)用前景。飼糧中添加GSH對(duì)不同物種的功能及機(jī)制見表1。

表1 飼糧中添加GSH對(duì)不同物種的功能及機(jī)制

4.1 提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能

在養(yǎng)殖業(yè)中，飼糧添加適量的GSH對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育有積極的影響，能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，節(jié)約飼料，降低生產(chǎn)成本。在正常范圍內(nèi)，它會(huì)增加動(dòng)物生長(zhǎng)激素含量，以及軟骨和骨骼的生長(zhǎng)。周艷玲[42]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加GSH可以提高黃顙魚幼魚的生長(zhǎng)性能及全魚粗脂肪和粗蛋白質(zhì)含量；但隨著GSH添加量的增加，黃顙魚的生長(zhǎng)性能會(huì)呈現(xiàn)出先升高后下降的變化趨勢(shì)。在給中華絨螯蟹[43]喂食不同含量的GSH 10周后，隨著飼料中GSH含量從0增加到900 mg/kg，中華絨螯蟹的體重增加率和存活率顯著增加。從已有的對(duì)魚類的一些研究發(fā)現(xiàn)，GSH在魚類飼料中的適宜添加量為350～380 mg/kg[44]。過高的GSH添加量會(huì)損傷魚體，從而降低魚體的健康狀況和生長(zhǎng)性能。這說(shuō)明GSH的添加量有一個(gè)適宜的范圍，不然就可能對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物產(chǎn)生不利的影響。

在對(duì)一些哺乳動(dòng)物的研究中也發(fā)現(xiàn)了GSH的促進(jìn)生長(zhǎng)作用，鄭夢(mèng)奇等[45]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加GSH可以提高育肥豬的日增重、胴體瘦肉率和飼料利用率。劉平祥[46]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適宜劑量的GSH可以促進(jìn)斷奶仔豬的生長(zhǎng)。同樣，宋增廷等[47]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加GSH提高了育肥羊的飼料利用率和增重率。

4.2 增強(qiáng)動(dòng)物抵抗氧化應(yīng)激能力

為了應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激產(chǎn)生的不良影響，許多養(yǎng)殖動(dòng)物自身?yè)碛幸惶装负头敲笝C(jī)制的抗氧化防御系統(tǒng)[48]。GSH作為細(xì)胞中重要的抗氧化劑，可以抵抗動(dòng)物養(yǎng)殖過程中所產(chǎn)生的不良應(yīng)激。馮具攀等[49]在飼料中添加GSH飼喂克氏原螯蝦后，結(jié)果顯示，高溫應(yīng)激下，與對(duì)照組相比，添加0.24和0.30 g/kg GSH顯著提高了血淋巴中總抗氧化能力(T-AOC)及總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)、GSH-Px活性，顯著降低了丙二醛(MDA)含量；生長(zhǎng)性能方面，添加0.18、0.24、0.30 g/kg GSH顯著提高了增重率，其中添加0.30 g/kg GSH時(shí)增重率最高；這表明飼喂GSH能有效增強(qiáng)克氏原螯蝦的抗氧化能力。張延濤[50]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適量GSH可顯著提高仔豬血清GSH-Px活性，對(duì)仔豬斷奶產(chǎn)生的應(yīng)激造成的氧化損傷有一定的保護(hù)和緩解作用。在草魚的飼料中添加適量GSH能顯著提高肝臟和血清抗氧化酶活性，并能降低肝臟和血清MDA含量。在飼料中添加407.45 mg/kg GSH能提高草魚對(duì)微囊藻毒素(MC-LR)暴露下的天然免疫能力、抗氧化應(yīng)激能力和解毒功能；相反，飼料中添加過量的GSH可能會(huì)促進(jìn)氧化，從而產(chǎn)生負(fù)面影響；以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，適宜的GSH添加量可以有效防止草魚的氧化損傷，飼料中添加過量的GSH可能會(huì)產(chǎn)生超氧陰離子，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷[36]。

4.3 提高動(dòng)物的免疫能力

動(dòng)物需要提高免疫力以應(yīng)對(duì)流行性疾病的到來(lái)。以往的研究表明，飼糧中添加GSH可以改善動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，提高免疫能力和抗氧化能力，達(dá)到增強(qiáng)免疫力的作用。Ming等[51]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加適量的GSH能促進(jìn)幼草魚的生長(zhǎng)，提高成活率，降低飼料轉(zhuǎn)化率，提高非特異性免疫能力、抗氧化能力以及肝臟胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和熱休克蛋白70(HSP70) mRNA的表達(dá)水平，增強(qiáng)對(duì)病原菌侵染的抵抗力。然而，飼料中添加過量的GSH對(duì)魚類有負(fù)面影響。羅斌等[52]在用陳化玉米喂養(yǎng)仔豬后，仔豬的免疫能力和抗氧化能力下降，而添加GSH酵母粉可以改善陳化玉米所帶來(lái)的負(fù)面效應(yīng)。劉玫珊等[53]通過雞球蟲卵囊感染健康雛雞，并用馬來(lái)酸二乙酯降低雛雞血漿GSH含量，來(lái)觀察GSH所發(fā)揮的免疫能力，結(jié)果表明，谷脫甘膚能提高機(jī)體的抗病力，其機(jī)理主要是通過細(xì)胞免疫途徑起作用。這些研究結(jié)果為GSH提高動(dòng)物的免疫能力提供了科學(xué)依據(jù)。

4.4 緩解毒性影響

GSH具有重要的解毒作用，當(dāng)機(jī)體攝入有毒有害物質(zhì)時(shí)，GSH能與有毒化物質(zhì)結(jié)合，形成巰基尿酸并使其排泄出體外，從而起到解毒的作用[54]。董桂芳等[55]對(duì)飼喂了藍(lán)藻粉飼料的黃顙魚研究中發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加500～800 mg/kg GSH時(shí)，黃顙魚組織中微囊藻毒素含量顯著降低，說(shuō)明GSH對(duì)毒性效應(yīng)起到了一定的緩解作用。但此處GSH的適宜添加量與草魚[36]的研究結(jié)果有些沖突，這個(gè)添加量對(duì)草魚是有害的。分析有2個(gè)可能性：一是由于魚的種類不同；二是黃顙魚長(zhǎng)期飼喂藍(lán)藻粉飼料并補(bǔ)充GSH，在此期間GSH與微囊藻毒素可能形成了復(fù)合物來(lái)降低毒性，從而需要更高劑量的GSH達(dá)到更好的解毒效果；而Ming等[36]是先補(bǔ)充GSH，然后短期注射微囊藻毒素刺激，周期短，GSH的消耗量相對(duì)較少。任勝杰等[56]研究還原性GSH對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)及辛硫磷中毒后的解毒效果，急性攻毒后試驗(yàn)組的死亡率均顯著低于對(duì)照組，且添加量越高死亡率越低，各試驗(yàn)組魚肝臟中辛硫磷殘留量均顯著低于對(duì)照組，得出適宜的GSH添加量為400 mg/kg，從而為GSH對(duì)魚類生長(zhǎng)及辛硫磷中毒的解毒效果提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。Conners等[57]通過使用GSH合成的抑制劑丁硫氨酸亞砜胺(BSO)，研究了GSH耗竭對(duì)銅暴露下牡蠣的金屬硫蛋白表達(dá)、溶酶體膜失穩(wěn)和脂質(zhì)過氧化的影響；在暴露于銅的牡蠣中，金屬硫蛋白的誘導(dǎo)受到抑制，細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)高于單獨(dú)暴露于銅的牡蠣。這些結(jié)果表明，導(dǎo)致GSH耗竭的條件會(huì)增大污染物的不利影響。

5 小結(jié)與展望

目前的研究結(jié)果顯示，GSH對(duì)動(dòng)物的健康養(yǎng)殖有良好的前景。然而，市場(chǎng)上GSH的售價(jià)偏高，限制了其在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用。因此，應(yīng)采取科學(xué)而高效的研究來(lái)降低GSH的生產(chǎn)成本，并將GSH作為飼料添加劑開展更深入的研究。相信GSH在畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域?qū)⒌玫礁鼜V泛的應(yīng)用，對(duì)動(dòng)物的健康養(yǎng)殖產(chǎn)生更積極的影響。