基于代謝組學(xué)研究高產(chǎn)與低產(chǎn)奶牛血漿差異代謝物及代謝通路分析

楊 靖 火 苗 茍 妍 張力莉 徐曉鋒

(寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，銀川 750021)

同等條件飼養(yǎng)的奶牛，個(gè)體間的產(chǎn)奶量差異較大，產(chǎn)奶量受到較多因素的影響，包括奶牛遺傳改良、生理階段、飼養(yǎng)管理和飼糧組成等[1-3]，但與泌乳相關(guān)重要代謝物差異是影響奶牛泌乳性能的重要因素[4-5]。因此，開展對(duì)奶牛產(chǎn)奶過程中變化顯著的血漿代謝物和代謝通路的研究，對(duì)提高奶牛產(chǎn)奶量、獲得最大的經(jīng)濟(jì)效益具有重要的實(shí)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。

代謝組學(xué)是使用高通量技術(shù)對(duì)生物樣品中的小內(nèi)源性代謝物進(jìn)行檢測(cè)[6]。由于代謝組學(xué)技術(shù)具有較高的分辨率和靈敏度等特點(diǎn)，近年來，在篩選瘤胃代謝物生物標(biāo)志物方面被廣泛應(yīng)用，從而揭示飼糧對(duì)動(dòng)物健康和生產(chǎn)性能的影響[7]，研究疾病或生理學(xué)的潛在代謝物生物標(biāo)記物[8-9]，并檢查飲食誘導(dǎo)的瘤胃代謝譜的代謝改變及其對(duì)反芻動(dòng)物產(chǎn)奶相關(guān)性狀的影響[6,10-11]。利用代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)產(chǎn)奶牛能力不同的奶牛進(jìn)行血漿代謝物檢測(cè)，比較分析代謝的差異，便于了解不同產(chǎn)奶量奶牛體內(nèi)物質(zhì)代謝途徑的變化[12]。本試驗(yàn)采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析高產(chǎn)與低產(chǎn)奶牛的血漿差異代謝物，旨在研究高產(chǎn)與低產(chǎn)奶牛血漿代謝組特征，從代謝角度探索高產(chǎn)與低產(chǎn)奶牛血漿代謝物特點(diǎn)，為開展飼糧營(yíng)養(yǎng)調(diào)控奶牛產(chǎn)奶性能提高理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與管理

試驗(yàn)選擇健康、胎次[(2.04±0.81)胎]相近、泌乳天數(shù)[(23.58±8.80) d]相近、體重相近的高產(chǎn)[產(chǎn)奶量(40.56±1.57) kg/d]和低產(chǎn)[產(chǎn)奶量(25.17±1.66) kg/d]荷斯坦奶牛各12頭，分為高產(chǎn)組(Hca組)和低產(chǎn)組(Lca組)。在飼養(yǎng)期間，奶牛自由飲水，飼喂全混合日糧(TMR)，飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.2 血漿樣品采集與處理

在晨飼前，用含肝素鈉的一次性真空采血管尾根靜脈采血，1 500×g離心10 min，將收集到的上層血漿置于液氮速凍后，在-80 ℃冰箱中凍存，用于后續(xù)樣品分析。

1.3 血漿代謝物提取

將在4 ℃下解凍的每個(gè)樣品取100 μL，加入100 μL預(yù)冷水和800 μL預(yù)冷的甲醇/乙腈1∶1，混合均勻，冰水浴中超聲60 min后，于-20 ℃孵育1 h進(jìn)行蛋白質(zhì)沉淀，16 000×g、4 ℃離心20 min，取上清液在高速離心機(jī)中揮干。加入100 μL乙腈-水1∶1混合溶液用于質(zhì)譜檢測(cè)時(shí)的復(fù)溶，離心15 min(4 ℃、14 000×g)，取上清液用于樣品分析。

1.4 LC-MS/MS分析

1.4.1 色譜分離

采用1290 Infinity LC超高效液相色譜系統(tǒng)(UHPLC，安捷倫科技有限公司)對(duì)放于4 ℃進(jìn)樣器的樣品進(jìn)行色譜分離，設(shè)定5 μL的進(jìn)樣量，25 ℃的溫度，0.3 mL/min的流速；水、乙酸銨(25 mmol/L)、氨水(25 mmol/L)為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B。梯度洗脫程序：0～0.5 min，流動(dòng)相B的線性為95%；0.5～7.0 min，流動(dòng)相B的線性從95%降至65%；7.0～9.0 min，流動(dòng)相B的線性從65%降至40%；9.0～10.0 min，流動(dòng)相B的線性保持在40%；10.0～11.1 min，流動(dòng)相B的線性從40%增至95%；11.1～16.0 min，流動(dòng)相B的線性保持在95%。

1.4.2 質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集

采用電噴霧電離(ESI)對(duì)每例樣品進(jìn)行正離子和負(fù)離子模式檢測(cè)。采用Triple-TOF5600質(zhì)譜儀(美國(guó)AB SCIEX公司)對(duì)UHPLC分離后的樣品進(jìn)行分析。ESI源條件：離子源氣體1為60 psi，離子源氣體2為60 psi，簾式氣體(CUR)為30 psi，源溫度為600 ℃，離子空間電壓浮動(dòng)(ISVF)±5 500 V(正、負(fù)2種模式)；飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF-MS)掃描范圍：質(zhì)荷比(m/z)60～1 200，生產(chǎn)掃描范圍：m/z 25～1 200，TOF-MS掃描累積時(shí)間0.15 s/譜，產(chǎn)品離子掃描累積時(shí)間0.03 s/譜。

1.4.3 數(shù)據(jù)處理和分析

峰面積的提取以及峰對(duì)齊、保留時(shí)間的校正均來自于格式轉(zhuǎn)換后的原始數(shù)據(jù)經(jīng)MSDIAL軟件的XCMS程序。通過相關(guān)方式檢索MassBank、HMDB等自建的代謝物標(biāo)準(zhǔn)品庫(kù)和公共數(shù)據(jù)庫(kù)來鑒定代謝物的結(jié)構(gòu)。

采用SIMCA-P 14.1軟件對(duì)刪除數(shù)據(jù)組內(nèi)缺失值>50%離子峰后的正負(fù)離子模式進(jìn)行識(shí)別，通過多維統(tǒng)計(jì)分析經(jīng)Pareto scaling預(yù)處理后的數(shù)據(jù)，包括無監(jiān)督主成分分析(PCA)、有監(jiān)督偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)。

2 結(jié)果與分析

2.1 血漿樣品代謝質(zhì)譜及數(shù)據(jù)分析

由圖1和圖2可知，正、負(fù)離子檢測(cè)模式下質(zhì)量控制(QC)樣品各色譜峰的響應(yīng)強(qiáng)度和保留時(shí)間基本重疊，總粒子流圖(TIC)重疊圖的重疊程度可以說明儀器穩(wěn)定，且所得數(shù)據(jù)有效。

利用PCA對(duì)色譜峰的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，由PCA得分圖(圖3)可知，Hca組和Lca組血漿樣品之間有堆疊，但表現(xiàn)出明顯的分離趨勢(shì)，Hca組和Lca組之間模型解釋率(R2X)為0.325。進(jìn)一步使用有監(jiān)督PLS-DA和OPLS-DA來評(píng)估Hca組和Lca組之間的血漿樣品差異，進(jìn)而判斷LC-Q/TOF-MS的X變量(峰強(qiáng)度)與Y變量(分組信息)之間的相關(guān)性。為了預(yù)測(cè)樣品差異，本試驗(yàn)通過PLS-DA和OPLS-DA建立代謝物表達(dá)量與樣品差異之間的關(guān)系模型，結(jié)果見圖4，2模型的R2Y、Q2均大于0.5且趨近于1，說明該模型預(yù)測(cè)能力較高且穩(wěn)定性良好。

橫坐標(biāo)為正離子檢測(cè)模式下質(zhì)量控制樣品各色譜峰的保留時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)為正離子檢測(cè)模式下質(zhì)量控制樣品各色譜峰的響應(yīng)強(qiáng)度。The abscissa is the retention time (min) of each chromatographic peak of the QC sample in the positive ion detection mode, and the ordinate is the response intensity of each chromatographic peak of the QC sample in the positive ion detection mode.

橫坐標(biāo)為負(fù)離子檢測(cè)模式下質(zhì)量控制樣品各色譜峰的保留時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)為負(fù)離子檢測(cè)模式下質(zhì)量控制樣品各色譜峰的響應(yīng)強(qiáng)度。The abscissa is the retention time (min) of each chromatographic peak of the QC sample in the negative ion detection mode, and the ordinate coordinate is the response intensity of each chromatographic peak of the QC sample in the negative ion detection mode.

OPLS-DA是在PLS-DA的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了正交變換的矯正，可以濾除與分類信息無關(guān)的噪音，提高了模型的解析能力和有效性。并將得到的OPLS-DA模型進(jìn)行置換檢驗(yàn)用來檢測(cè)構(gòu)建的模型是否“過擬合”(圖5)。在OPLS-DA模型下，Hca組和Lca組血漿樣品區(qū)分狀況良好(圖6)。其中，R2X為0.197，R2Y為0.986，表明利用19.7%的LC-Q/TOF-MS數(shù)據(jù)可以反映2組血漿樣品之間的差異，但Q2為0.761，高于0.5，表明模型具有較高的可預(yù)測(cè)性。所以，由圖3和圖6可知，Hca組和Lca組奶牛血漿樣品代謝物有明顯差異。

圖中每個(gè)點(diǎn)代表了1個(gè)樣品。橫坐標(biāo)為第1主成分，縱坐標(biāo)為第2主成分，2點(diǎn)之間在橫、縱坐標(biāo)上的距離代表了樣品受第1主成分或第2主成分影響下的相似性距離。Each point in the figure represents a sample. The abscissa is the first principal component, the ordinate is the second principal component, and the distance between the two points on the abscissa and ordinate represents the similarity distance of the sample under the influence of the first principal component or second principal component.

2.2 血漿差異代謝物的篩選

利用t檢驗(yàn)的P值和差異倍數(shù)(fold change，F(xiàn)C)對(duì)預(yù)處理后的數(shù)據(jù)繪制火山圖。由圖7可知，差異代謝物的分布說明篩選鑒定該數(shù)據(jù)可行。由表3可知，本試驗(yàn)中，2組奶牛血漿中共篩選出27個(gè)差異代謝物，與Lca組比較，Hca組奶牛血漿中?；撬帷⒛懰?、豬膽酸、甘氨熊脫氧膽酸、脫氧膽酸、L-亮氨酸、吲哚-3-甲醇、吲哚-3-乙酰胺等18個(gè)代謝物上調(diào)，而苯乙酰甘氨酸、苯乙酸及、對(duì)羥基苯乙醇等9個(gè)代謝物下調(diào)。

橫坐標(biāo)為第1主成分，縱坐標(biāo)為第2主成分，R2Y為0.997，Q2為0.838。The abscissa is the first principal component, and the ordinate is the second principal component. R2Y is 0.997, and Q2 is 0.838.

橫坐標(biāo)代表隨機(jī)分組的Y與原始分組Y的相關(guān)性，縱坐標(biāo)代表R2和Q2的得分。7次置換檢驗(yàn)。The abscissa represents the correlation of randomly grouped Y to the original grouping Y, and the ordinate represents the scores of R2 and Q2. Seven permutation tests.

2.3 代謝通路分析

對(duì)差異代謝物富集的通路進(jìn)行KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)分析(圖8)，其是利用P值或Q值最小的前10個(gè)KEGG通路來作圖，縱坐標(biāo)為Pathway，橫坐標(biāo)為富集因子，大小表示數(shù)量多少，顏色越紅P/Q值越小。經(jīng)通路富集分析共得到10條代謝通路，篩選出的代謝通路為：色氨酸代謝、苯丙氨酸代謝、初級(jí)膽汁酸生物合成、膽汁分泌、礦物質(zhì)吸收以及葉酸拮抗劑抗性等。由KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)分析可知，Hca組和Lca組奶牛血漿中苯丙氨酸代謝、膽汁分泌代謝以及葉酸拮抗劑抗性差異極顯著(P<0.01)，色氨酸代謝、初級(jí)膽汁酸生物合成等代謝途徑差異顯著(P<0.05)。且Hca組奶牛血漿中膽汁分泌、初級(jí)膽汁酸生物合成、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白信號(hào)通路和礦物質(zhì)吸收相對(duì)于Lca組增強(qiáng)，而苯丙氨酸代謝、葉酸拮抗劑抗性以及溶酶體代謝通路相對(duì)于Lca組減弱。

圖中橫坐標(biāo)表示預(yù)測(cè)主成分，縱坐標(biāo)表示正交主成分，百分比表示該成分對(duì)數(shù)據(jù)集的解釋率。R2Y為0.986，Q2為0.761。The abscissa represents the predicted principal component, the ordinate represents the orthogonal principal component, the percentage represents the interpretation rate of the component to the dataset. R2Y is 0.986, and Q2 is 0.761.

3 討 論

3.1 膽汁分泌與膽酸的初級(jí)生物合成對(duì)產(chǎn)奶量的影響

膽汁分泌產(chǎn)生膽酸，主要是膽汁酸，其是生命活動(dòng)的重要調(diào)節(jié)因子，參與葡萄糖、脂肪和能量代謝的調(diào)節(jié)，與腸道激素、微生物群和能量平衡密切相關(guān)[13]。肝細(xì)胞色素膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)催化膽固醇轉(zhuǎn)化為7α-羥基膽固醇，在線粒體中3β-羥基-Δ5-C27-羥基類固醇脫氫酶的催化下產(chǎn)生7α-羥基-4-膽甾烯-3-酮，經(jīng)過一系列反應(yīng)最終生成膽酸，并迅速結(jié)合?；撬峄蚋拾彼?，形成結(jié)合的膽汁酸，然后從膽管流入十二指腸。初級(jí)膽汁酸轉(zhuǎn)化為次級(jí)游離膽汁酸[14-15]，主要是脫氧膽酸，并在肝臟和腸道代謝后發(fā)生硫酸化、糖基酯化和糖基化等反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)，奶牛血漿中的膽固醇含量顯著降低，膽固醇分解代謝增強(qiáng)，導(dǎo)致初級(jí)膽汁酸的合成增加[16]。本研究中，與低產(chǎn)奶牛相比，高產(chǎn)奶牛血漿中的膽酸、豬膽酸、甘氨熊脫氧膽酸和脫氧膽酸顯著增加。初級(jí)膽汁酸和甘氨酸或?；撬峤Y(jié)合，產(chǎn)生甘膽酸及牛磺膽酸，利用膽酰輔酶A，并協(xié)助脂肪在奶牛小腸中消化和吸收[17]，脂肪的消化產(chǎn)物甘油通過糖異生作用進(jìn)入糖酵解和三羧酸循環(huán)(TCA)[18-19]，為奶牛泌乳供能，增加奶牛產(chǎn)奶量。有研究發(fā)現(xiàn)，腸道菌群對(duì)膽汁酸進(jìn)行去共軛化、脫羥基化和差向異構(gòu)化等生物學(xué)修飾，進(jìn)而影響膽汁酸的合成與代謝[20-22]。同時(shí)，腸道菌群也可通過對(duì)膽汁酸合成途徑中關(guān)鍵酶調(diào)節(jié)影響膽汁酸合成[23]。又有研究表明，膽汁酸在腸道中乳化脂肪的同時(shí)也能對(duì)腸道部分微生物起到抑制作用[24]，進(jìn)而提高奶牛泌乳量，改善能量負(fù)平衡，而汪悅等[25]研究發(fā)現(xiàn)，奶?！澳c道-乳腺通路”存在，關(guān)于血漿膽酸與腸道微生物及奶牛產(chǎn)奶量的關(guān)系需要深入研究。

橫坐標(biāo)為log2(差異倍數(shù))，縱坐標(biāo)為t檢驗(yàn)顯著性檢驗(yàn)P值的負(fù)對(duì)數(shù)-log10(P值)。The abscissa is log2 (FC), and the ordinate is the negative logarithm -log10 (P-value) of the P-value of the t test significance test.

表2 Hca組和Lca組血漿差異代謝物

3.2 氨基酸代謝對(duì)產(chǎn)奶量的影響

本研究分析表明，苯丙氨酸途徑在2組間的差異顯著，與Lca組相比較，Hca組苯丙氨酸代謝中的主要底物中3種下調(diào)代謝產(chǎn)物所致(苯乙酰甘氨酸、苯乙酸及對(duì)羥基苯乙醇)。苯乙酸和苯乙醇用于合成苯乙酰輔酶A，而苯乙酰輔酶A是合成乙酰輔酶A的重要代謝物，且乙酰輔酶A合成量下降會(huì)促進(jìn)糖酵解或者糖異生過程，使機(jī)體ATP含量增加[26]。ATP能在胞內(nèi)傳輸化學(xué)能進(jìn)行新陳代謝，為奶牛產(chǎn)奶過程提供能量，在本試驗(yàn)中，與Lca組奶牛相比，Hca組奶牛由于苯丙氨酸代謝途徑中下游代謝產(chǎn)物苯乙酰甘氨酸、苯乙酸及對(duì)羥基苯乙醇含量下調(diào)導(dǎo)致生成的ATP增加，從而造成奶牛的產(chǎn)奶量增加。除了提供能源外，基本代謝途徑之一的糖酵解的部分中間產(chǎn)物能用于其他物質(zhì)的合成，以關(guān)聯(lián)碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪代謝[27]。例如，丙酮酸可轉(zhuǎn)變?yōu)楸彼岷鸵阴］o酶A，而乙酰輔酶A是合成脂肪酸的原料，這對(duì)奶牛的泌乳維持也非常重要[28]。

色氨酸代謝與碳水化合物代謝、蛋白質(zhì)的合成、脂肪代謝等途徑關(guān)系密切。在吲哚胺-2,3-雙加氧酶或色氨酸-2,3-雙加氧酶的催化下，色氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)槿虬彼?KYN)，通過多級(jí)酶促反應(yīng)后，生成喹啉酸、吡啶羧酸類及煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)等[29]。Viljoen等[30]研究表明，色氨酸經(jīng)氧化生成煙酸，其不僅是合成NAD和NADP的前體，也是參與機(jī)體的氧化還原反應(yīng)無氧脫氫酶的輔酶，進(jìn)而參與機(jī)體能量代謝、糖脂代謝、氧化應(yīng)激和炎癥調(diào)控[31-32]。有研究表明，色氨酸合成煙酸的速度加快，體內(nèi)糖原含量減少，使腺苷酸環(huán)化酶活性增加，導(dǎo)致為機(jī)體提供的ATP增加。與低產(chǎn)奶牛相比，高產(chǎn)奶牛色氨酸代謝途徑中血漿代謝物濃度上調(diào)，致使為奶牛泌乳提供的能量增加，造成蛋白質(zhì)合成速度加快，產(chǎn)奶量增加。L-色氨酸在多種微生物參與下，經(jīng)過脫氨和脫羧作用生成吲哚、吲哚乙酸及吲哚丙酮酸等[33]。與低產(chǎn)組相比，高產(chǎn)奶牛血漿中吲哚-3-甲醇和吲哚-3-乙酰胺含量上調(diào)，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在該代謝通路中，吲哚-3-甲醇和吲哚-3-乙酰胺可以用于合成乙酰輔酶A，而乙酰輔酶A可以參與TCA及脂肪酸的合成，增加了奶牛泌乳所需的能量，導(dǎo)致產(chǎn)奶量上升[34-35]。這說明奶牛色氨酸代謝途徑中血漿代謝物濃度上調(diào)會(huì)使產(chǎn)奶量增加，苯丙氨酸代謝與色氨酸均為含有苯環(huán)的氨基酸，本研究發(fā)現(xiàn)，二者在奶牛體內(nèi)均參與乙酰輔酶A的合成，乙酰輔酶A作為體內(nèi)高能化合物，可以作為脂肪酸合成原料，也可以作為脂肪酸合成過程中ATP的來源，對(duì)于促進(jìn)乳脂合成和泌乳能量提供發(fā)揮重要作用，苯丙氨酸代謝與色氨酸互作及協(xié)同代謝對(duì)于高產(chǎn)奶牛產(chǎn)奶的調(diào)控作用需要深入研究。

Tryptophan metabolism：色氨酸代謝；Primary bile acid biosynthesis：初級(jí)膽汁酸生物合成；Phenylalanine metabolism：苯丙氨酸代謝；mTOR signaling pathway：哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白信號(hào)通路；Mineral absorption：礦物質(zhì)吸收；Lysosome：溶酶體；Choline metabolism in cancer：癌癥中的膽堿代謝；Central carbon metabolism in cancer：癌癥的中樞碳代謝；Bile secretion：膽汁分泌；Antifolate resistance：葉酸拮抗劑抗性。圖中每個(gè)圖形為一個(gè)KEGG通路，縱坐標(biāo)為KEGG通路，橫坐標(biāo)為富集因子，大小表示數(shù)量多少，顏色越紅P/Q值越小。Each graph in the figure is a KEGG pathway, the ordinate is the KEGG pathway, the abscissa is the enrichment factor, the size indicates the number, and the more red the color, the smaller the P/Q value.

3.3 葉酸拮抗劑抗性對(duì)產(chǎn)奶量的影響

在機(jī)體中，一碳單位參與蛋白質(zhì)、核苷酸、泛酸的合成及分子的甲基化，而葉酸是介導(dǎo)一碳單位的輔助因子[36]，在NADPH參與下，葉酸被其還原酶還原成四氫葉酸(THFA或FH4)，參與機(jī)體合成嘌呤及嘧啶，進(jìn)而參與DNA合成[37]。而葉酸拮抗劑是一類抗代謝類抗癌藥物[38]，在惡性、微生物、寄生蟲和慢性炎癥性疾病的藥物治療中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，其與葉酸結(jié)構(gòu)相似，并能抑制葉酸代謝中的關(guān)鍵酶，導(dǎo)致嘌呤和胸腺嘧啶的生物合成中斷，抑制DNA復(fù)制和細(xì)胞死亡。葉酸是DNA合成的重要物質(zhì)，而腫瘤細(xì)胞的快速增殖需要以更多DNA為原料，所以，腫瘤細(xì)胞增殖可以被葉酸拮抗劑有效抑制[39]。本研究中，與Lca組奶牛相比，Hca組奶牛葉酸拮抗劑抗性增強(qiáng)，有效抑制了炎癥等疾病的DNA復(fù)制和腫瘤細(xì)胞的增殖，使更多能量用于奶牛泌乳，這可能是增加奶牛泌乳能力的一個(gè)因素。

4 結(jié) 論

① 通過對(duì)高產(chǎn)與低產(chǎn)奶牛血漿代謝組特征的研究表明，高產(chǎn)與低產(chǎn)奶牛血漿中共篩選出27個(gè)差異代謝物，與Lca組相比，Hca組奶牛血漿中牛磺酸、膽酸、豬膽酸、甘氨熊脫氧膽酸、脫氧膽酸、L-亮氨酸、吲哚-3-甲醇、吲哚-3-乙酰胺等18個(gè)代謝物含量顯著增加，而苯乙酰甘氨酸、苯乙酸及、對(duì)羥基苯乙醇等9個(gè)代謝物含量顯著下降。

② 代謝通路富集分析表明，與Lca組相比，Hca組奶牛膽汁分泌、色氨酸代謝、初級(jí)膽汁酸生物合成顯著增強(qiáng)，而苯丙氨酸代謝、葉酸拮抗劑抗性相對(duì)減弱。

③ 研究結(jié)果為通過飼糧營(yíng)養(yǎng)成分調(diào)控奶牛產(chǎn)奶潛力發(fā)揮提供了理論依據(jù)，苯丙氨酸、色氨酸以及葉酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)具有一定研究潛力，膽汁酸分泌調(diào)控對(duì)于奶牛產(chǎn)奶性能發(fā)揮也具有一定理論研究?jī)r(jià)值。