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    超聲彈性成像評價急性兔有機磷中毒性肝損傷的實驗研究

    2022-12-08 06:10:34裴峰馬之萍郭明陽陳婷婷何沈巖涂嬌袁萍錢嶸
    肝臟 2022年11期
    關(guān)鍵詞:染毒時間段有機磷

    裴峰 馬之萍 郭明陽 陳婷婷 何沈巖 涂嬌 袁萍 錢嶸

    超聲實時組織彈性成像(RTE)是檢測組織彈性改變的技術(shù),最早用于局灶性病變的檢測,近年來用于評價慢性彌漫性肝損傷如肝纖維化的研究結(jié)果得到了廣泛的認(rèn)可[1-2]。本研究分析超聲彈性成像對急性中毒性肝損傷的評估價值。

    資料和方法

    一、實驗動物及材料

    健康新西蘭大白兔50只,體質(zhì)量1.82~2.31 kg,平均2.0 kg,由第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供。40%的氧化樂果乳油,鹽酸氯胺酮(100 mg/2 mL),地西泮注射液(10 mg/2 mL)等。

    二、方法

    將兔分對照組10只,染毒組40只。實驗前均空腹8 h以上,經(jīng)耳中央靜脈抽血查肝功能。將兔仰臥固定在兔板上,充分暴露上腹部并備皮,于耳緣靜脈建立靜脈通道。以氯胺酮0.1 g加地西泮5 mg腹腔注射麻醉。染毒組將40%的樂果與0.9% NaCl按1∶10的比例稀釋后,以12 mL/kg腹腔注射,對照組腹腔注射0.9% NaCl 12 mL/kg。隨機將染毒組40只兔分為染毒后4 h組、6 h組、8 h組、10 h組,每組10只兔。按時間段對各染毒組及對照組行肝臟常規(guī)二維超聲及RTE檢查。觀察肝實質(zhì)回聲、測量肝右葉斜徑。而后避開肝內(nèi)管道結(jié)構(gòu)及心搏影響,穩(wěn)定顯示肝左葉圖像,啟用RTE功能鍵,選取距體表深度1.0 cm處設(shè)置直徑20 mm,深度20 mm的感興趣區(qū)(region of interest,ROI),即進(jìn)行彈性評分的目標(biāo)區(qū)域。探頭垂直體表施加壓力,取壓力標(biāo)尺顯示壓力穩(wěn)定一致,且ROI內(nèi)彩色充滿、無雜色的壓力圖進(jìn)行彈性評分,同一位置連續(xù)評分5次,取平均值。彈性系數(shù)小、受壓后位移變化大的組織顯示為紅色,彈性系數(shù)大、受壓后位移變化小的組織為藍(lán)色,彈性系數(shù)中等的組織為綠色。紅綠相間或紅藍(lán)綠相間的組織評分為0分,感興趣區(qū)及周邊完全為綠色的為1分,以綠色為主、周邊呈藍(lán)色的為2分,藍(lán)綠色雜亂相間的組織評分為3分,完全覆蓋藍(lán)色的組織評分為4分。

    三、實驗室與病理檢查

    分別抽取對照組及染毒組各時間段兔的靜脈血檢測生化指標(biāo)。各時間段染毒組兔行超聲檢查后分別處死,并在相應(yīng)時間隨機處死1只對照組兔,取肝左葉與彈性成像ROI同區(qū)域的肝組織,浸泡在4%的甲醛溶液中,送病理檢查。

    四、統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,比較采用t檢驗。以病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),計算RTE診斷肝細(xì)胞受損的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、實驗動物一般情況

    染毒組兔染毒后均出現(xiàn)肌顫、流涎、瞳孔縮小、皮膚發(fā)白等癥狀。部分兔于中毒后6~10 h出現(xiàn)消化道出血癥狀,1只兔染毒8 h后死亡,1只兔染毒9 h后死亡。對照組兔無異常。

    二、實驗室檢查結(jié)果

    對照組各時間段丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TBil)及白蛋白(Alb)無變化。染毒組染毒后4 h各項指標(biāo)較對照組無改變;6 h后ALT較對照組略增加但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),TBil及Alb無變化,染毒8 h及10 h后,ALT、TBil較對照組增加,Alb降低(P<0.05),且隨著染毒時間的延長,各指標(biāo)改變越顯著。見表1。

    表1 不同時間段染毒組兔肝生化指標(biāo)與對照組比較(±s)

    三、二維超聲檢查結(jié)果

    對照組及染毒組兔各時間段肝右葉斜徑無明顯差異,染毒后8~10 h,部分兔肝實質(zhì)回聲增粗、出現(xiàn)腹水及心包腔積液。見圖1。

    圖1 二維超聲檢查結(jié)果 A 對照組兔正常肝左葉;B 染毒10 h后兔肝實質(zhì)回聲增粗、出現(xiàn)腹水(AS)

    四、超聲彈性成像檢查結(jié)果

    對照組兔肝左葉感興趣區(qū)各時間段RTE評分均為0~1分,染毒組染毒后6 h、8 h、10 h感興趣區(qū)彈性評分逐漸增加,染毒后10 h感興趣區(qū)彈性評分≥3分。以評分大于1分為陽性、病理結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),RTE診斷有機磷中毒后肝細(xì)胞損傷的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率分別為95.83%、85.71%、92.11%,病理結(jié)果與彈性評分結(jié)果比較見表2。

    表2 兔染毒后肝彈性成像評分與病理結(jié)果的比較

    五、病理檢查結(jié)果

    對照組兔各時間段肝組織肝板排列整齊,細(xì)胞形態(tài)正常。以染毒組較對照組有明顯改變?yōu)殛栃?,染? h后較對照組未見明顯改變,6~8 h后可見肝竇淤血,肝細(xì)胞腫脹,邊界不清,肝細(xì)胞氣球樣變、脂肪變,部分胞核溶解,染毒10 h后,可見部分肝細(xì)胞退變、壞死。見圖2。染毒組各時間段兔肝組織均未見明顯纖維化。

    圖2 兔肝組織光學(xué)顯微鏡下表現(xiàn) A 正常兔肝左葉組織;B 染毒后8 h肝左葉組織(HE×100)

    討 論

    有機磷經(jīng)人體吸收后,在肝臟濃度最高,通過肝微粒體氧化酶系統(tǒng)進(jìn)行生化轉(zhuǎn)換,可引起不同程度的中毒性肝炎,嚴(yán)重時會出現(xiàn)肝功能異常[3]。急性中毒性肝炎的臨床表現(xiàn)與急性病毒性肝炎類似,有機磷中毒所致肝損傷的臨床表現(xiàn)缺乏特異性,常因毒蕈堿樣、煙堿樣癥狀掩蓋而被忽視。早期有效診斷及實時監(jiān)測肝損傷的發(fā)展有重要的臨床意義。

    不同組織間彈性系數(shù)不同,在受到外力壓迫后組織發(fā)生變形的程度不同,RTE可通過獲取組織在位移、速度、應(yīng)變方面的變化,將受壓前后回聲信號移動幅度的變化轉(zhuǎn)化為有彩色編碼的圖像,反映組織的硬度評分。彈性成像可由組織硬度差異推斷發(fā)生病變的可能性[4-5]。有研究表明,RTE對肝纖維化診斷有較好的敏感度及特異度[6-8]。本研究中,染毒組兔ALT、TBil在染毒后8 h后明顯增高,Alb則減低,說明隨著染毒時間的延長,肝細(xì)胞變性壞死,肝功能受損。有機磷可引起急性血管內(nèi)溶血,滅活大量血紅蛋白會引起肝細(xì)胞損傷,另外,有機磷中毒后ALT的增高早于血中膽堿酯酶活性的改變,證明有機磷對肝細(xì)胞有直接毒害作用[9]。RTE檢測結(jié)果顯示,染毒6 h后彈性評分逐漸增加,染毒后10 h感興趣區(qū)彈性評分≥3分,彈性評分越高,肝臟受損的程度越大[10-12]。值得注意的是,本研究中染毒組在染毒6 h后肝生化指標(biāo)ALT、TBil及Alb均未出現(xiàn)異常,但RTE已檢測出ROI肝組織的硬度增加,表明RTE評分反映有機磷中毒性肝損傷較實驗室指標(biāo)更敏感。RTE診斷中毒性肝細(xì)胞損傷的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率分別為95.83%、85.71%、92.11%,這可對臨床診斷和制定治療措施提供幫助。本研究中2例RTE評為陽性而病理結(jié)果為陰性,1例RTE評為陰性而病理結(jié)果為陽性,其原因可能在于病理取材量僅占整個肝臟組織的五萬分之一,而彈性成像所選取感興趣區(qū)的面積比病理取材的大得多,另外操作者手法也是影響評分的因素,所以會出現(xiàn)假陽性或假陰性的結(jié)果。

    既往有研究發(fā)現(xiàn),急性肝炎患者肝臟彈性值增加,但病理并未發(fā)現(xiàn)纖維化及硬化改變[13]。本研究結(jié)果表明,急性有機磷中毒性肝炎的病理變化為脂肪聚集和肝細(xì)胞壞死,染毒組各時間段病理均未發(fā)現(xiàn)肝纖維化,肝細(xì)胞受損出現(xiàn)在染毒后6 h,此時RTE評分也增加,與既往的研究結(jié)果一致,提示肝纖維化不是增加肝臟硬度的唯一因素。有學(xué)者認(rèn)為炎性細(xì)胞浸潤、血流灌注壓力、肝細(xì)胞水腫、變性等均是影響肝臟硬度的因素[14-16]。而有機磷中毒會引起肝臟微循環(huán)改變,中毒時間越長,微循環(huán)障礙越嚴(yán)重,這也可能成為影響肝臟硬度的因素[17]。

    本研究局限性在于RTE反映的是感興趣區(qū)組織與周圍組織硬度比較的相對值,而不是感興趣區(qū)組織硬度的絕對值,且受施加壓力大小與壓放頻率的影響。今后的研究將在增加組織彈性彌散定量分析,為臨床診斷急性中毒性肝炎提供新的參考指標(biāo)。

    綜上所述,RTE無創(chuàng)評價急性有機磷中毒性肝細(xì)胞損傷有較高的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度,還可通過重復(fù)檢查動態(tài)監(jiān)測中毒后肝臟受損的進(jìn)展情況,有較大的臨床應(yīng)用價值。

    利益沖突聲明:所有作者均聲明不存在利益沖突。

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