羊傳染性膿皰病研究進展

楊 磊，孟子琪，李長青，趙啟南

（1. 內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院， 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學動物科學學院， 內(nèi)蒙古 呼和浩特010018）

傳染性膿皰?。╟ontagious ecthyma，CE）是一種急性、傳染性、致衰性的人畜共患毒性皮膚病，綿羊、山羊等家養(yǎng)及部分野生反芻動物易感［1］，是一種世界性分布的非系統(tǒng)性發(fā)疹性皮膚病。 羊傳染性膿皰病又稱羊口瘡（orf），是由羊傳染性膿皰病毒（orf virus，ORFV）引起的傳染性疾病，該病在世界多數(shù)養(yǎng)羊國家廣泛傳播，1～6 月齡的羔羊最易感染， 且山羊感染ORFV 后的癥狀較綿羊更加嚴重［2］。 養(yǎng)殖區(qū)域一旦出現(xiàn)ORFV 感染病例，就會迅速蔓延到整個場區(qū)，使羊只采食量下降，生長發(fā)育減緩，給養(yǎng)殖場帶來嚴重的經(jīng)濟損失［3］。 筆者對近年來國內(nèi)外關(guān)于羊傳染性膿皰病的研究進展進行綜述，以期為獸醫(yī)臨床中該病的預防、診斷和治療提供參考。

1 病原學

ORFV 是痘病毒科副痘病毒屬的一種嗜上皮性雙鏈線性DNA 病毒， 該屬還包括假牛痘病毒（pseudocowpox virus，PCPV）、 牛丘疹性口炎病毒（bovine papular stomatitis virus，BPSV）、 綿羊痘病毒（sheeppox virus，SPPV）和新西蘭紅鹿副痘病毒（parapoxvirus of red deer in New Zealand，PVNZ）［3］。ORFV 在形態(tài)上與副痘病毒屬的其他成員有所不同，ORFV 呈卵圓形， 病毒顆粒周圍有一個交錯的、相對較小的表面小管，病毒表面呈現(xiàn)“8”字形的 環(huán) 繞 結(jié) 構(gòu)， 這 是ORFV 特 有 的 病 毒 結(jié) 構(gòu)［4］。ORFV 基因組長度為134～139 kb， 與其他痘病毒相比G+C 含量較高，為63%～64%，包含132 個基因和16 個開放閱讀框， 含有89 個高度保守的基因和一些可變基因［5］。 目前，對于ORFV 在感染宿主細胞過程中的全部作用機理還未研究清楚，但某些基因的功能得到了一定驗證。

Schmidt 等［6］研 究 發(fā) 現(xiàn)，ORFV 的B2L 基 因 全長1 137 bp， 編碼一個約42 kDa 的免疫原性包膜蛋白與牛痘病毒主要包膜抗原p37K 的編碼基因是同源基因，均可以引起宿主的免疫反應(yīng)。 B2L 基因在ORFV 分離株中高度保守， 已被用于ORFV的檢測、分子特征描述和系統(tǒng)發(fā)育分析。Yu 等［7］研究發(fā)現(xiàn)，ORFV 的F1L 基因編碼一種包膜蛋白，可以通過與宿主細胞外的硫酸乙酰肝素傳感器結(jié)合啟動病毒入侵。 同時，F(xiàn)1L 基因編碼的蛋白能與哺乳動物細胞上的糖胺聚糖結(jié)合， 吸附在宿主細胞表面。 此外，ORFV 還可編碼一系列在免疫逃避中起重要作用的分子， 如病毒干擾素抵抗蛋白（OVIFNR）、IL-2 抑制因子、病毒白細胞介素10（VIL-10）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等［8］。

2 流行病學

羊傳染性膿皰病在世界各地養(yǎng)羊國家發(fā)生，尤其是在夏末和秋季的牧場以及養(yǎng)殖場最為常見，我國吉林省、陜西省、云南省、西藏自治區(qū)、河北省等多個省（區(qū)）都有該病的發(fā)生和流行。 較成年羊而言，羔羊更容易感染ORFV。 ORFV 在干燥的環(huán)境中活性較強， 可以存活幾個月甚至幾年，但在寒冷和潮濕的條件下存活時間較短［9］。ORFV可通過羔羊受損的皮膚進入上皮細胞，并在上皮細胞進行基因的復制和增殖，進而引起上唇出現(xiàn)丘疹、 膿皰和結(jié)痂。 當患病羔羊的痂垢破裂后，ORFV 會釋放到周圍的環(huán)境中， 健康羊只通過接觸受污染的畜舍設(shè)施、飲水、飼草料而感染，繼而出現(xiàn)局部病變［10］。 在斷尾、打耳標等過程中，因使用受污染的工具，也可使健康羔羊在傷口處感染ORFV。

ORFV 除了會感染綿羊、山羊等反芻動物，還可造成部分野生動物的感染。 Concha-Bermejillo等［11］研 究 表 明，ORFV 在 綿 羊 和 山 羊 之 間 可 能 會發(fā)生自然交叉感染， 但不會從一個物種向另一個物種傳播。在自然界中，存在免疫缺陷的動物比健康動物更易感染ORFV。 羊傳染性膿皰病也是一種人畜共患病，養(yǎng)殖者、屠宰場工作人員以及其他與患病動物有直接或間接接觸的人， 都可能通過皮膚傷口而感染ORFV［12］。

3 臨床癥狀

羊傳染性膿皰病根據(jù)不同的臨床表現(xiàn)可分為唇型、蹄型和性病型3 種類型［13］。

3.1 唇型羊傳染性膿皰病

該類型潛伏期為4～8 d， 最初呈現(xiàn)體溫升高，隨后在口腔黏膜、 嘴唇和鼻等皮膚處形成丘疹和膿皰，隨著病情的加重，會在患病處形成堅韌的結(jié)痂，覆蓋潰瘍、肉芽和炎癥的隆起區(qū)域，嚴重影響患病羊的日常采食，進而影響生長發(fā)育［14］。對于感染ORFV 的羔羊來說，鄰近門牙、舌和腭部的牙齦也會發(fā)生病變， 患病處周圍的單個或多個丘疹合并，隨后潰瘍會覆蓋在丘疹處，并伴有黃色液體的滲出［15］。嚴重時會導致病毒蔓延到消化道和氣管，進而引起化膿性病原菌、 壞死桿菌等其他微生物的繼發(fā)性感染，誘發(fā)嚴重的胃腸炎、支氣管肺炎、慢性肺炎、關(guān)節(jié)炎，以及中、重度淋巴結(jié)?。?6］。

3.2 蹄型羊傳染性膿皰病

該類型主要發(fā)生于綿羊，山羊基本不發(fā)生。患病羊通常呈單肢患病， 有時會出現(xiàn)多肢甚至所有蹄端都患病的情況。 水皰或膿皰往往出現(xiàn)在患病羊的蹄冠和蹄叉上，膿皰破裂后轉(zhuǎn)變成潰瘍［17］。嚴重時患病羊出現(xiàn)跛行、長時間臥地、蹄端發(fā)生化膿性壞死等癥狀，病灶會擴散至蹄骨和皮基部，更嚴重者會由于敗血癥或機體明顯衰弱而死亡［18］。

3.3 性病型羊傳染性膿皰病

性病型特征為母羊外陰和公羊陰囊的皮膚出現(xiàn)丘疹、水皰、增生性病變和潰瘍等［19］。 對于母羊而言，最開始會在外陰或陰道黏膜處長出小膿皰，隨后轉(zhuǎn)變?yōu)闈儯橛悬S色滲出物的產(chǎn)生。由于壞死桿菌的侵襲，潰瘍處可能會發(fā)生壞死性病變。公羊感染ORFV 后會出現(xiàn)陰囊內(nèi)積液， 并呈現(xiàn)無法爬跨母羊、性欲喪失、交配后陰莖麻痹和包皮口蠅蛆病等病癥， 這些都可能導致公羊陰莖勃起不完全［20］。

4 實驗室診斷

4.1 電子顯微鏡（electron microscope，EM）

EM 是診斷和鑒別ORFV 感染的最直接有效方法，還可以區(qū)分山羊痘病毒和副痘病毒。通過負染色標本可以直觀地觀察病毒粒子的形態(tài)和大小。 在EM 下觀察，可見ORFV 病毒顆粒的大小約為260 nm×130 nm，呈橢圓形或錐形、磚形的線團樣粒子，病毒顆粒的外層蛋白呈細絲狀排列［21］。

4.2 組織病理學

將發(fā)病羊只的唇部皮膚取下制成切片進行蘇木素伊紅（HE）染色，在顯微鏡下可觀察到被ORFV 感染的皮膚組織表現(xiàn)為表皮增生、 角化過度、角質(zhì)形成細胞腫脹和變性。此外，還呈現(xiàn)表皮角化不全，棘層增厚、退化，以及單核細胞（包括巨噬細胞、淋巴細胞和中性粒細胞）浸潤，同時可見嗜酸性包涵體存在于被感染細胞的胞質(zhì)中［22］。

4.3 細胞培養(yǎng)分離

采集患病羊只結(jié)痂處的皮膚， 經(jīng)無菌處理后接入羔羊睪丸原代細胞、羔羊腎臟細胞、胎羊真皮細胞、胎羊肌肉細胞、胎羊鼻甲細胞或傳代細胞系MDBK、MDOK、VERO 等，一般在盲傳2～3 代后出現(xiàn)細胞病變， 在電子顯微鏡下觀察病毒顆粒的形態(tài)和大?。?3］。

4.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）

用純化抗原和過氧化物酶結(jié)合蛋白A 或G、嵌合蛋白A/G 篩選不同種類動物的血清樣本。 該方法已用于駱駝、 羔羊和人的血清樣本中ORFV抗體的檢測［24］。

4.5 蛋白質(zhì)印跡技術(shù)（Western blotting）

Czerny 等［25］使用Western blotting 對ORFV 進行檢測鑒定， 發(fā)現(xiàn)ORFV 包膜蛋白66、39、22 kDa均表現(xiàn)出強烈的條帶，而56、24、25 kDa 則表現(xiàn)出較輕的條帶。

4.6 聚合酶鏈反應(yīng) （polymerase chain reaction，PCR）

現(xiàn)在多數(shù)利用PCR 診斷副痘病毒感染的研究是基于B2L 或VIR 基因進行的。 Zheng 等［26］建立了一種采用A29 基因（413 bp）和H3L 基因（708 bp） 的雙重PCR 方法對ORFV 進行檢測和鑒別，該方法可快速鑒別不同種類的副痘病毒，在ORFV 的檢測上具有較大應(yīng)用潛力。

4.7 實時熒光定量PCR （real-time quantitative PCR，qPCR）

Gallina 等［27］建立了一種基于B2L 基因的qPCR 方法， 用于臨床樣本中ORFV 的擴增和定量，并可與PCPV、BPSV 和SPPV 病毒進行鑒別區(qū)分，不僅可以鑒定病毒類型，還可確定感染病毒的增殖數(shù)量。

4.8 重組酶輔助擴增（recombinase aided amplification，RAA）

Wang 等［28］建立了一種用于檢測ORFV 的RAA 方法，與qPCR 相比，RAA 法在3 min 內(nèi)就可產(chǎn)生陽性信號分子，整個檢測過程在30 min 內(nèi)就可完成， 而qPCR 檢測需要大約1.5 h；RAA 法可在便攜設(shè)備上進行，不需任何復雜過程，而且成本幾乎是qPCR 的一半。 因此，RAA 法與qPCR 相比具有顯著的優(yōu)勢。

5 預防措施

對于羊傳染性膿皰病來說， 沒有合適的抗病毒治療方案， 接種疫苗是一種較為有效的控制手段。減毒活疫苗被認為優(yōu)于其他類型的疫苗，并在世界上一些ORFV 流行的地區(qū)廣泛使用。 李娜［29］將分離得到的ORFV 接種在羔羊睪丸細胞上進行增殖培養(yǎng)，通過連續(xù)接種傳代減弱病毒的活力，發(fā)現(xiàn)當病毒傳至90 代時，毒力明顯減弱，且在回歸試驗中不會引起2 月齡羔羊發(fā)病， 攻毒試驗發(fā)現(xiàn)由弱毒力病毒制得的201 佐劑疫苗和11R 佐劑疫苗對試驗羔羊具有一定的保護作用。 Musser 等［30］從羊傳染性膿皰病患病山羊的結(jié)痂處分離并獲得ORFV 毒株，稀釋1 000 倍后接種在綿羊腎細胞中進行增殖培養(yǎng)，當90%以上細胞分離后，離心取上清液，凍干后加入30%甘油制得弱毒性疫苗；攻毒試驗發(fā)現(xiàn)，除對照組外，接種疫苗的山羊羔羊接種部位會產(chǎn)生結(jié)痂，但無其他不良影響，使用野生型ORFV 毒株攻毒后， 只有對照組山羊羔羊出現(xiàn)感染癥狀， 表明接種該疫苗能夠使山羊羔羊免受感染。 雖然通過細胞培養(yǎng)得到的減毒活疫苗能夠降低疾病的嚴重程度， 但是疫苗的有效免疫期限和接種后給羊只帶來的負面影響仍然存在爭議，需進一步研究。

除接種疫苗外，還應(yīng)注意養(yǎng)殖場的衛(wèi)生消毒措施和飼養(yǎng)管理措施。 對感染ORFV 的羊只應(yīng)立即進行隔離，對養(yǎng)殖區(qū)域的畜舍和工具進行全面消毒，可有效防止病毒的傳播。 新購買引進的羊只應(yīng)與養(yǎng)殖場的其他動物隔離一段時間再進行混群， 以防止ORFV 感染養(yǎng)殖場中的健康羊只。在羔羊長牙過程中，應(yīng)避免采食粗糙的稻草或植物，以免造成口腔黏膜損傷，進而增加感染ORFV的風險。

6 治療方法

對于癥狀較輕的患病羊， 可在患病處使用乙酸、10%～20%鹽水、5%碘酒或0.1%～1.0%高錳酸鉀溶液等進行沖洗，并確保完全浸潤。接著用消毒后的手術(shù)器械將患處痂垢、膿皰皮去除，然后用高錳酸鉀溶液對痂皮下的壞死部分進行反復擦拭，對患處再次沖洗，涂抹抗生素軟膏，每天2 次，通常用藥5～7 d 即可痊愈［31］。

如果病羊癥狀較為嚴重，體溫明顯升高，要盡快注射抗菌和抗病毒藥物， 避免出現(xiàn)由細菌引起的繼發(fā)性感染。 可按羊只體重肌肉注射相應(yīng)比例的抗生素類藥物，也可同時注射0.1 g/（kg·BW）的病毒靈，每天1～2 次，1 個療程連續(xù)使用2～3 d，一般連續(xù)治療2 個療程即可恢復健康［32］。

除了抗生素或人工合成的抗菌藥物， 還有一些傳統(tǒng)的中草藥也被用于治療ORFV 感染。 從印度和非洲地區(qū)的蓖麻、紅花中提取的植物油，被證明可以有效地治療ORFV 感染；而在法國和荷蘭，有研究者使用冬青藤提取物治療和預防ORFV 感染［33］。 Brahma 等［34］在養(yǎng)殖場挑選了3 只6 月齡感染ORFV 的奶山羊羔羊， 將蘆薈凝膠和姜黃粉按1∶1 混合， 每日2 次涂抹在患病處，1 周后患病羔羊被治愈。

7 小結(jié)

羊傳染性膿皰病感染性強，病原傳播速度快、存活時間較長，養(yǎng)殖場一旦暴發(fā)疫情，會造成嚴重的經(jīng)濟損失，因此，要在養(yǎng)殖區(qū)域做到早預防、早發(fā)現(xiàn)、早治療。 首先，應(yīng)限制帶病動物及其產(chǎn)品的流動，這是防止ORFV 傳入養(yǎng)殖區(qū)域的關(guān)鍵措施。對無病動物產(chǎn)品， 在進入非疫區(qū)之前必須經(jīng)過嚴格的消毒和檢疫程序才可流入市場。 養(yǎng)殖區(qū)的用具、器械和養(yǎng)殖環(huán)境都要進行嚴格消毒，以免造成病毒的傳播。 其次，針對患病羊只，要做到第一時間隔離治療， 防止因病情加重和ORFV 的蔓延對養(yǎng)殖場造成損失。 另外，如果患病羊只癥狀嚴重，已無法治療，應(yīng)對其進行屠宰焚燒處理，以防止疫情的蔓延。 由于羊傳染性膿皰病是一種人畜共患病，為了防止人群發(fā)生感染，對于發(fā)現(xiàn)的病例一定要執(zhí)行嚴格的治療和處理流程， 以免出現(xiàn)大面積感染。