基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探究半夏治療肺癌的作用機(jī)制

熊常州，韓坤余，陳彥蓓，劉衛(wèi)，張哲，馬帥，牛華濤?

（1. 成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2. 云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明 650021；3. 云南省腫瘤醫(yī)院，云南 昆明 650118）

原發(fā)性支氣管肺癌（簡稱肺癌）是指起源于呼吸上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，目前居全球癌癥發(fā)病率的第二位，是全球致死率最高的癌種。2020年全球肺癌新發(fā)病例共2 206 771 例（占癌癥發(fā)病總數(shù)的11.4%），死亡病例共1 796 144例（占癌癥死亡總數(shù)的18.0%）［1］。肺癌的病理分型主要為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，早期臨床癥狀以咳嗽、咳痰和咯血為主。治療措施主要包括根據(jù)患者腫瘤組織學(xué)特點(diǎn)、腫瘤分期及患者特異性情況采取外科手術(shù)、化學(xué)藥物治療、放射治療和分子靶向治療等。由于其早期臨床癥狀易被患者忽視，多數(shù)患者確診時(shí)已是晚期導(dǎo)致治療并不理想［2-3］。然而以上治療方案在治療過程中均存在一定局限性，如手術(shù)的某些禁忌癥、化療及放療的不良反應(yīng)、分子靶向治療的耐藥性等［4］。

中醫(yī)學(xué)中并無肺癌之名，根據(jù)其臨床癥狀可歸屬于“咳嗽”“咯血”“肺積”“息賁”“癌病”等范疇。如宋代《濟(jì)生方·癥瘕積聚門》中提到：“息賁之狀，在右脅下，大如覆杯，喘息奔溢，是為肺積”，《圣濟(jì)總錄》中也指出：“肺積息賁氣脹滿咳嗽，涕唾膿血”，這些均與肺癌的臨床表現(xiàn)類似。在一些對(duì)肺癌患者體質(zhì)的調(diào)查研究中發(fā)現(xiàn)，痰濕體質(zhì)是肺癌患者主要的體質(zhì)之一［5-6］。多位國醫(yī)大師也認(rèn)為痰濕是肺癌發(fā)病的主要病機(jī)之一，肺癌的辨證應(yīng)該多屬“痰、濕、瘀、虛、毒”［7-9］。由此可見，痰濕幾乎貫穿了肺癌發(fā)生、發(fā)展的全過程，因此在肺癌的臨床治療中要重視化痰散結(jié)藥物的應(yīng)用。半夏作為臨床中常用的理氣化痰藥，其治療肺癌的作用機(jī)制也值得深入探究。

半夏為天南星科植物半夏的干燥塊莖，味辛、性溫，有毒，歸肺、脾、胃經(jīng)，具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié)的功效［10］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，半夏具有鎮(zhèn)咳、祛痰止嘔、抗腫瘤、抗胃潰瘍、凝血、抗菌和抗炎等藥理作用［11］。研究發(fā)現(xiàn)，半夏提取液可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞K562凋亡，延長K562細(xì)胞G0/G1期，干擾DNA的合成［12］，并且可以有效恢復(fù)腫瘤相關(guān)樹突細(xì)胞的未成熟狀態(tài)，增強(qiáng)其作為抗原呈遞細(xì)胞的功能，進(jìn)一步引發(fā)抗腫瘤Th1 和CTL 反應(yīng)［13-14］。此外，有研究發(fā)現(xiàn)半夏提取物可以顯著增加HPV +TC-1 細(xì)胞凋亡和壞死率，阻斷細(xì)胞周期的進(jìn)行，進(jìn)而抑制腫瘤生長和對(duì)缺血性壞死的抵抗力［15］，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，并且可以直接對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷［16］，由此可知半夏提取物可能是一種潛在的癌癥免疫調(diào)節(jié)治療藥物。在中晚期肺癌的中藥治療用藥規(guī)律研究中發(fā)現(xiàn)，使用頻次最高的是化痰散結(jié)藥［17］，半夏的使用頻率均居前十位［18-23］，但其防治肺癌的作用機(jī)制尚不明了。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是一種從網(wǎng)絡(luò)觀點(diǎn)出發(fā)，以系統(tǒng)水平識(shí)別“藥物-疾病-基因-靶點(diǎn)”的多分子藥物協(xié)同作用機(jī)制的新型研究策略，其核心思想與中醫(yī)學(xué)的整體觀念有一定相通之處，符合對(duì)腫瘤等復(fù)雜疾病進(jìn)行系統(tǒng)性治療的需求［24］。基于此，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，挖掘半夏治療肺癌的作用靶點(diǎn)，結(jié)合生物信息學(xué)的優(yōu)勢，探究半夏防治肺癌的有效活性成分、潛在治療靶點(diǎn)和作用機(jī)制，為半夏治療肺癌提供臨床及藥理作用研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 半夏活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選與收集

在TCMSP 數(shù)據(jù)庫（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）中檢索半夏，設(shè)定生物利用度（OB）≥30%，類藥性（DL）≥0.18 得到半夏活性成分，選擇“Re-lated Targets”獲取半夏活性成分所有靶點(diǎn)，并通過Uniprot（http：//www.Uniprot.org）數(shù)據(jù)庫獲取半夏活性成分對(duì)應(yīng)的人類靶標(biāo)基因。

1.2 肺癌相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

以“l(fā)ung cancer”為關(guān)鍵詞在DisGeNET（www.disgenet.org）數(shù)據(jù)庫檢索肺癌相關(guān)基因，檢索物種為“Homo sapiens”。

1.3 半夏抗肺癌的潛在作用靶點(diǎn)的獲取

通過韋恩圖（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）將半夏的活性成分潛在靶點(diǎn)和肺癌的相關(guān)靶點(diǎn)映射交集，得到交集基因并繪制韋恩圖。

1.4 靶標(biāo)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）的構(gòu)建

將上述半夏抗肺癌的潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org）。將下載的文件導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0 軟件進(jìn)行可視化分析，構(gòu)建半夏治療肺癌的靶標(biāo)蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步使用CytoHubba 插件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，參考MCC 值篩選網(wǎng)絡(luò)中關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.5 GO功能和KEGG信號(hào)通路富集分析

分別在Metascape（http：//metascape.org/）平臺(tái)和HIPLOT 數(shù)據(jù)庫（https：//hiplot.com.cn）平臺(tái)對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行分析，將物種設(shè)置為人，進(jìn)行GO 功能和KEGG信號(hào)通路富集分析，設(shè)置P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，輸出結(jié)果并繪制氣泡圖或條形圖。

1.6 半夏抗肺癌主要靶點(diǎn)的分子對(duì)接

通過PubChem 下載“1.4”項(xiàng)下篩選的半夏抗肺癌的主要活性成分的“SDF”格式，并將其導(dǎo)入“Chem3D 19.0”優(yōu)化三維結(jié)構(gòu)；從PDB 數(shù)據(jù)庫下載“1.4”項(xiàng)下篩選出的半夏抗肺癌的主要核心靶點(diǎn)蛋白的蛋白質(zhì)3D結(jié)構(gòu)，并保存pdb 格式。利用AutoDock Tools 對(duì)成分和蛋白進(jìn)行加水、去氫、分離配體和受體等操作，利用AutoDock Vina 計(jì)算靶點(diǎn)與配體之間對(duì)接活性的分值，得分＜-5.0則結(jié)合活性較佳，得分＜-7.0說明兩者之間有強(qiáng)烈的對(duì)接活性，可作為半夏治療肺癌作用靶點(diǎn)的篩選依據(jù)［25］。

2 結(jié)果

2.1 半夏的活性成分及作用靶點(diǎn)

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫，檢索到半夏化學(xué)成分116種，使用OB ≥30%和DL ≥0.18 條件獲得包括24-乙基膽堿-4-烯-3-酮、卡維汀、黃芩素、中黃芩苷、β-谷甾醇、豆甾醇、二十碳-11-烯酸和松柏苷等在內(nèi)的13種活性化合物。見表1。將對(duì)應(yīng)蛋白導(dǎo)入U(xiǎn)niprot數(shù)據(jù)庫，通過篩選共得到97個(gè)靶點(diǎn)基因。

表1 篩選后半夏活性成分情況

2.2 肺癌相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

以“l(fā)ung cancer”為關(guān)鍵詞，檢索物種為“Homo sapiens”，在DisGeNET數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，搜集到肺癌靶點(diǎn)共4 174個(gè)。

2.3 半夏抗肺癌的潛在作用靶點(diǎn)的獲取

通過韋恩圖（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny）制作，將半夏97個(gè)成分潛在靶點(diǎn)和肺癌4 174個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)映射交集，得到39 個(gè)交叉靶點(diǎn)，即半夏治療肺癌潛在作用靶點(diǎn)。見圖1。

圖1 肺癌相關(guān)基因與半夏活性成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)韋恩圖

2.4 靶標(biāo)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）的構(gòu)建

將39個(gè)潛在作用靶點(diǎn)上傳至STRING 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，得到靶標(biāo)蛋白互作數(shù)據(jù)關(guān)系，利用Cytoscape 3.8.0 軟件進(jìn)行可視化分析，構(gòu)建半夏治療肺癌的靶標(biāo)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。見圖2。在拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)中包含39 個(gè)節(jié)點(diǎn)，240 條邊，平均節(jié)點(diǎn)度為12.3，平均局部聚類系數(shù)為0.725。進(jìn)一步利用CytoHubba 插件對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，根?jù)MCC 值篩選網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵靶點(diǎn)，根據(jù)MCC 值取前10 個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，從大到小排列，分別是抑癌基因p53（Tumor Protein P53，TP53）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶RAC-α（Serine/threonine proteinase RAC- α，AKT1）、缺氧誘導(dǎo)因子-1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）、轉(zhuǎn)錄因子AP-1（Transcription Factor AP-1，JUN）、血管內(nèi)皮生長因子A（Vascular endothelial growth factor A，VEGFA）、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3（Cysteine-containing aspartate-specific proteases3，CASP3）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2（Cyclin-dependent kinase 2，CDK2）、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶9（Cysteine-containing aspartate-specific proteases9，CASP9）、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶8（Cysteine-containing aspartatespecific proteases8，CASP8）和細(xì)胞周期蛋白B1（Cyclin B1，CCNB1）。這些靶點(diǎn)可能是半夏治療肺癌的重要靶點(diǎn)。見表2和圖3。

表2 關(guān)鍵靶點(diǎn)TOP 10（根據(jù)MCC分值）

圖2 半夏抗肺癌靶標(biāo)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)

圖3 關(guān)鍵靶點(diǎn)TOP 10

2.5 GO功能和KEGG信號(hào)通路富集分析

將39 個(gè)核心靶點(diǎn)導(dǎo)入HIPLOT 數(shù)據(jù)庫（https：//hiplot.com.cn）進(jìn)行GO 功能富集分析，按照P＜0.05進(jìn)行篩選，分析P值排名前10 名結(jié)果，涉及的生物過程（biological process，BP）主要包括對(duì)金屬離子的反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、活性氧（reactive oxygen species，ROS）反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)、對(duì)有毒物質(zhì)的反應(yīng)、缺氧反應(yīng)、對(duì)氧水平降低的反應(yīng)、對(duì)氧水平的反應(yīng)、肽基絲氨酸磷酸化和細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)。見圖4。分子功能（molecular function，MF）主要涉及泛素樣蛋白連接酶結(jié)合、蛋白激酶調(diào)節(jié)活性、激酶調(diào)節(jié)活性、半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性參與凋亡信號(hào)通路、半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性參與細(xì)胞凋亡過程、組蛋白激酶活性、蛋白磷酸酶2A（PP2A）結(jié)合、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶激活劑活性、細(xì)胞周期素依賴性蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶調(diào)節(jié)活性和過氧化物酶活性。見圖5。細(xì)胞組分（cellular component，CC）主要涉及膜筏、膜微區(qū)、膜區(qū)、轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物，轉(zhuǎn)移含磷基團(tuán)、分泌顆粒腔、細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶全酶復(fù)合物、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶復(fù)合物、蛋白激酶復(fù)合物、髓鞘和血小板α 顆粒腔。見圖6。

圖4 半夏抗肺癌潛在靶點(diǎn)的GO-BP富集分析

圖5 半夏抗肺癌潛在靶點(diǎn)的GO-MF富集分析

圖6 半夏抗肺癌潛在靶點(diǎn)的GO-CC富集分析

將39 個(gè)核心靶點(diǎn)導(dǎo)入至Metascape 平臺(tái)進(jìn)行KEGG 通路富集分析，按照P＜0.05 進(jìn)行篩選，取Metascape 平臺(tái)分析P值排名前12名的結(jié)果，分別為癌癥通路、乙型肝炎、愛潑斯坦-巴爾病毒感染（EB 病毒感染）、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤蛋白多糖、內(nèi)分泌抵抗、PI3K/Akt 信號(hào)通路（PI3K/Akt signaling pathway）、癌癥的MicroRNAs（miRNAs）、脂肪細(xì)胞脂解作用的調(diào)控、NOD 樣信號(hào)通路、腫瘤轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控和化學(xué)致癌作用。見圖7。

圖7 半夏抗肺癌潛在靶點(diǎn)的KEGG通路富集

2.6 半夏抗肺癌主要靶點(diǎn)的分子對(duì)接

選取核心成分中排名靠前的黃芩素與核心蛋白TP53、AKT1、HIF-1α、VEGFA 進(jìn)行分子對(duì)接，得分均＜-5.0，說明兩者之間有良好的對(duì)接活性，可作為半夏治療肺癌作用靶點(diǎn)的篩選依據(jù)。見圖8、表3。

表3 黃芩素與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接得分

圖8 半夏抗肺癌核心成分與靶點(diǎn)分子對(duì)接圖

3 結(jié)論

通過TCMSP 數(shù)據(jù)庫檢索可知，半夏的主要活性成分主要有黃芩素、β-谷甾醇和豆甾醇等。黃芩素可以通過逆轉(zhuǎn)Src 的高磷酸化，抑制Id1 蛋白表達(dá)，消除上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和血管生成，從而抑制非小細(xì)胞肺癌生長及增殖［26-27］。研究發(fā)現(xiàn)，黃芩素可以抑制人非小細(xì)胞肺癌H460 細(xì)胞系中12-LOX 基因和蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌H460 細(xì)胞凋亡［28］。黃芩素還可以通過下調(diào)miR-424-3p 和靶向PTEN/PI3K/Akt 通路來誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、凋亡并增加對(duì)A549 和H460細(xì)胞的順鉑敏感性，且有良好的安全性［29-30］。β-谷甾醇可以通過阻滯肺癌A549細(xì)胞周期于G2/M 期來抑制細(xì)胞增殖，同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抗腫瘤作用［31］。有體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，豆甾醇可以抑制卵巢癌、黑色素瘤、肝癌、膽囊癌、胃癌和皮膚癌等多種腫瘤細(xì)胞，其機(jī)制涉及降低PI3K/Akt 信號(hào)通路的蛋白質(zhì)和mRNA 表達(dá)、上調(diào)凋亡基因的表達(dá)、誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯以及破壞腫瘤血管的生成等［32-33］，但是尚無涉及肺癌的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。由此可知，半夏的這些活性成分與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)，在肺癌的治療中發(fā)揮著復(fù)雜的作用，為半夏抗癌的研究提供了可靠依據(jù)。

通過分析靶標(biāo)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，TP53、AKTI、HIF-1α 和VEGFA 處于網(wǎng)絡(luò)的核心地位，可視為半夏治療肺癌的關(guān)鍵靶點(diǎn)。TP53是編碼腫瘤蛋白p53的抑癌基因，位于17號(hào)染色體短臂（17p13），外顯子5-8是人類腫瘤突變的熱點(diǎn)區(qū)［34］。TP53 基因突變可以引起抑癌功能喪失、干擾p53相關(guān)蛋白、耐藥基因上調(diào)、Axl酪氨酸激酶受體過度表達(dá)等，導(dǎo)致間質(zhì)和上皮性腫瘤出現(xiàn)早期發(fā)病的傾向［35］。有研究發(fā)現(xiàn)TP53 基因突變幾乎發(fā)生在所有的小細(xì)胞肺癌中，該基因在非小細(xì)胞肺癌中也是常見的突變基因，可以作為非小細(xì)胞肺癌療效和預(yù)后的生物標(biāo)志物［36-38］。蛋白激酶B（AKT）在人類癌癥中最常因上游調(diào)節(jié)因子的突變而激活［39］，其中AKT1 突變是硬化性肺細(xì)胞瘤的遺傳標(biāo)志［40］。AKT1蛋白的表達(dá)參與了肺癌的發(fā)展及轉(zhuǎn)移［41］。HIF-1 可調(diào)控約200 種靶基因的表達(dá)水平，其機(jī)制有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的缺氧適應(yīng)、血管形成、細(xì)胞活性、細(xì)胞代謝和增殖轉(zhuǎn)移等［42］。HIF-1α 受硫化氫調(diào)控，能夠調(diào)節(jié)非小細(xì)胞肺癌上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和血管生成［43］，在肺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、評(píng)估和預(yù)后中起重要作用［44］。VEGFA 是肺癌血管生成的關(guān)鍵因素，可通過介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，增加血管通透性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移［45-46］，與肺癌組織的臨床分期、組織分化和淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［47-48］。

通過GO 功能富集分析，發(fā)現(xiàn)半夏治療肺癌的潛在靶點(diǎn)參與了多項(xiàng)生物過程，其中ROS 反應(yīng)、PP2A 結(jié)合、氧化應(yīng)激反應(yīng)涉及靶點(diǎn)較多，度值較高。ROS是一類在細(xì)胞正常代謝過程中產(chǎn)生的具有強(qiáng)氧化性的小分子化學(xué)物質(zhì)［49］，適量的ROS 能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和分化，過多則又會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激增強(qiáng)，而造成脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA 的氧化損傷，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡或壞死［50-51］。ROS 代謝功能的增高程度不同，對(duì)于腫瘤發(fā)生、發(fā)展的結(jié)局也截然不同，所以合理調(diào)控ROS，使其在腫瘤治療中發(fā)揮積極作用就變得十分重要。PP2A 主要是指絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶，它是一種重要的腫瘤抑制蛋白，可以通過A、B、C 三種亞基的突變、缺失、失活和異常表達(dá)調(diào)節(jié)許多致癌信號(hào)通路［52-53］。氧化應(yīng)激是ROS的產(chǎn)生與抗氧化劑的效率之間平衡紊亂的狀態(tài)［54］，可導(dǎo)致基因表達(dá)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的變化，并在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用［55-57］。這些均表明半夏可能是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)能量代謝、信號(hào)通路、蛋白活性和基因表達(dá)等多個(gè)生物過程與分子功能，從而發(fā)揮治療肺癌的作用。

在KEGG 信號(hào)通路富集分析中發(fā)現(xiàn)，半夏在治療肺癌的過程中主要涉及癌癥通路、腫瘤蛋白多糖、PI3K/Akt 信號(hào)通路、癌癥的miRNAs、癌癥中的轉(zhuǎn)錄失調(diào)及化學(xué)致癌等多個(gè)信號(hào)通路，這些通路都與肺癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)通過下調(diào)PI3K/Akt信號(hào)通路的蛋白表達(dá)可以抑制非小細(xì)胞肺癌A549 細(xì)胞生長，并促進(jìn)其凋亡，進(jìn)而降低腫瘤標(biāo)志物水平［58-60］。PI3K/Akt 信號(hào)通路還發(fā)揮著免疫調(diào)節(jié)劑的關(guān)鍵作用，通過聯(lián)合使用免疫調(diào)節(jié)劑抑制PI3K/Akt 信號(hào)通路可以為腫瘤的治療提供新的途徑［61］。miRNAs 參與了腫瘤細(xì)胞生長、分化、增殖、凋亡及侵襲等重要生物學(xué)行為。有研究發(fā)現(xiàn)，以血源性miRNA 為特征進(jìn)行液體活檢檢測肺癌具有較高的準(zhǔn)確性、敏感性和特異性，提示血源性miRNA 作為潛在循環(huán)標(biāo)志物或許可以作為影像學(xué)、痰細(xì)胞學(xué)和活檢的補(bǔ)充，用于肺癌的檢測［62］。另有研究發(fā)現(xiàn)，不同亞型miRNAs 在肺癌化療抵抗中發(fā)揮不同的作用，如miR-21 可以下調(diào)PTEN表達(dá)促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥，miR-539 過度表達(dá)可通過阻滯細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等作用增強(qiáng)耐藥非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性［63］。腫瘤患者化療耐藥時(shí)間的長短與患者的生存時(shí)間密切相關(guān)，而不同miRNAs會(huì)對(duì)肺癌的治療有不同的作用，如何通過調(diào)控miRNAs 發(fā)揮其在肺癌化療中減毒增效的作用及具體的作用機(jī)制值得進(jìn)一步探究。以上富集分析顯示，半夏活性成分的潛在靶點(diǎn)分布于多個(gè)生物過程及信號(hào)通路，這些有效成分協(xié)同發(fā)揮著防治肺癌的作用。

本研究通過挖掘開放數(shù)據(jù)庫中豐富的實(shí)驗(yàn)和臨床資料，利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)探究半夏治療肺癌的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)其可以通過多活性成分、多靶點(diǎn)和多信號(hào)通路對(duì)肺癌的進(jìn)行干預(yù)，這為今后半夏治療肺癌的藥理研究及臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)及新思路。但網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測分析仍存在一定不足，如數(shù)據(jù)庫的準(zhǔn)確性和全面性不完善、數(shù)據(jù)更新相對(duì)滯后、未涉及到半夏的種類、臨床用藥劑量、藥物之間相互作用等對(duì)肺癌治療的影響，未來可以利用細(xì)胞分子生物學(xué)和免疫學(xué)等實(shí)驗(yàn)手段進(jìn)一步驗(yàn)證，以便深入研究半夏防治肺癌的作用機(jī)制。