淺談動物疫病實(shí)驗(yàn)室診斷與防控實(shí)用技術(shù)

羅占華

（湖南省常德市鼎城區(qū)畜牧水產(chǎn)事務(wù)中心，湖南 常德 415000）

為保證動物疫病防控質(zhì)量與效果，彌補(bǔ)過往防控存在的各類問題，動物實(shí)驗(yàn)室診斷具有的價值隨之上升，依據(jù)實(shí)驗(yàn)室可以正確地診斷各類疫病問題，結(jié)合疫病情況、傳染源、影響范圍等來判斷疫病防控策略，以此來逐步減少動物疫病出現(xiàn)概率，避免養(yǎng)殖業(yè)社會效益、經(jīng)濟(jì)效益或者生態(tài)效益等受到不必要的影響。

1.動物疫病實(shí)驗(yàn)室診斷的重要價值

從衛(wèi)生監(jiān)督層面而言，隨著動物疫病復(fù)雜程度逐漸提高，傳統(tǒng)臨床觀察和識別形式已經(jīng)無法讓現(xiàn)代動物疫情監(jiān)測、診斷需求得到滿足。再者居民生活質(zhì)量逐步增強(qiáng)，人們對于飲食衛(wèi)生的關(guān)注和重視程度逐步提高，特別是動物肉制品等層面內(nèi)容，這也進(jìn)一步促使實(shí)驗(yàn)室疫病監(jiān)測價值提升。并且，目前大部分實(shí)驗(yàn)室都肩負(fù)著動物疫病診斷與監(jiān)測工作，這種診斷監(jiān)測與防疫工作密切相關(guān)，從樣品采集、化學(xué)診斷再到數(shù)據(jù)挖掘等整個流程均由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)，能夠第一時間發(fā)現(xiàn)、了解疫情。

2.常見動物疫病的實(shí)驗(yàn)室診斷

動物疾病實(shí)驗(yàn)室診斷是快速掌握動物是否存在疫病的重要手段，也是防止有問題動物肉流入市場的關(guān)鍵措施。在診斷過程中針對不同動物以及疫病選取的診斷方式、診斷技術(shù)也各不相同，以下針對目前較為常見的疾病診斷進(jìn)行簡要描述。

2.1 黃疸、黃脂肉診斷

黃疸、黃脂肉是實(shí)驗(yàn)室在落實(shí)動物疫病診斷中兩種較為常見疾病，豬黃疸以及黃脂肉對于食用者安全會產(chǎn)生一定影響，兩者診斷可以同時進(jìn)行。常見診斷方式：

在明確監(jiān)測任務(wù)之后采集脂肪樣本并徹底剪碎放置到相應(yīng)試管內(nèi)，加入5%5ML的氫氧化鈉溶液將其適當(dāng)震蕩，之后煮沸，時間為1min，利用流水冷卻試管，放入5ml的乙醚、膽汁色素，進(jìn)一步震蕩試管，后在常溫環(huán)境中放置一定時間，等到溶液狀態(tài)逐步穩(wěn)定之后觀察最上層乙醚當(dāng)中是否融入胡蘿卜素。如果其顏色變?yōu)辄S色，則可判定其為黃脂肉病癥，氫氧化鈉的顏色轉(zhuǎn)變成為黃色則為黃疸，上下層顏色全部變?yōu)辄S色，即為黃脂肉、黃疸病癥合并存在。

2.2 羊瘟診斷

羊瘟作為傳染力度較高、影響范圍較遠(yuǎn)的疫病，羊瘟常見、使用價值較高的診斷方式為熒光抗體方式。常見診斷方式：

選擇已經(jīng)死亡或者瀕臨死亡的新鮮羊，采集扁桃體組織和腎臟，采集之后樣本要適當(dāng)展開滅菌操作，將其冰凍后切片，放置在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)載玻片當(dāng)中，經(jīng)過自然干燥并進(jìn)一步處理，即加入純丙酮內(nèi)，放置15min左右，全面結(jié)束之后取出組織切片清洗，放置在自然環(huán)境中進(jìn)行干燥處理。后在已經(jīng)全面處理完成的組織切片上適當(dāng)?shù)稳?-3滴熒光，放置在自然環(huán)境下，溫度保持在37℃、時間30rain，以此來保證熒光抗體可以得到全面吸收。需要注意，在染色時要盡量避免染色液干涸。染色之后可以利用PBS液浸泡、沖洗組織切片，浸泡時間2rain、次數(shù)為3次。將其取出在室溫環(huán)境下放置，半干之后展開鏡檢，觀察切片的變化，如果切片當(dāng)中有較為明顯上皮細(xì)胞胞漿，并且顏色為翠綠色、有著強(qiáng)烈熒光表現(xiàn)，組織細(xì)胞有著清晰形態(tài)則為陽性，反之則屬于陰性。

2.3 羊丹毒診斷

羊丹毒疫病類型有著一定差異，在診斷監(jiān)測過程中樣品采集也需要差異化展開，如敗血癥羊丹毒實(shí)驗(yàn)室診斷過程中采集的樣品主要為患病動物肝腎組織、心血；患病動物病癥變現(xiàn)與慢性型羊丹毒疫病相關(guān)，樣品采集部位主要為腫脹位置組織。常見診斷方式：

首先展開涂片鏡檢，主要是利用顯微鏡針對樣品病變菌種展開觀察分析，觀察指標(biāo)為小桿菌分布數(shù)量、分布狀態(tài)，需重點(diǎn)關(guān)注白細(xì)胞周圍菌體，以此來增強(qiáng)診斷質(zhì)量與價值。其中脾腎抹片菌體監(jiān)測方法使用精準(zhǔn)度更高。接著進(jìn)行分離培養(yǎng)。如果實(shí)驗(yàn)室診斷過程中選擇的樣品屬于新鮮的材料，則培養(yǎng)基條件溫度盡量保持在37℃，培養(yǎng)時間為1-2d，此時培養(yǎng)基當(dāng)中已經(jīng)生長一定菌落，菌落顏色為透明，形狀類似于露珠。此類菌落長勢不夠良好，并且肉湯顏色會有一定渾濁，有少數(shù)白色沉淀物。最后動物接種，主要是結(jié)合疹塊情況來加入10倍比例生理鹽水，制作組織懸液，為鴿子注射組織懸液0.5-1ml；小白鼠則需要注射0.2ml組織懸液，之后結(jié)合懸液注射量取出0.5ml和0.1ml的菌液，并繼續(xù)向鴿子或者小白鼠注射。如果鴿子或者小白鼠在接種懸液3-4h之后發(fā)生死亡問題則進(jìn)行涂片制作，把鴿子、小白鼠腎臟器官、心血當(dāng)做關(guān)鍵材料制作相應(yīng)涂片，展開鏡檢，觀察當(dāng)中是否有羊丹毒桿菌。

2.4 布魯氏菌病診斷

布魯氏菌病是一種人、禽畜共患的傳染疫病，屬于重大的動物疫病，對于人類安全以及動物養(yǎng)殖安全有著較為顯著影響，常見診斷檢驗(yàn)方式：

一是虎紅平板凝集診斷檢驗(yàn)。主要是取虎紅平板抗原以及血清各0.3ml左右，將其滴入到撥片當(dāng)中均勻混合，4-10min之間出現(xiàn)凝集者則可判定為陽性?；⒓t平板抗原是利用虎紅抗原細(xì)菌染色呈酸性的緩沖平板抗原（ph3.65左右），能夠充分讓非特異性反應(yīng)IgM受到抑制、促使異性抗體IgG活性不斷增強(qiáng)，反應(yīng)靈活、敏感并且穩(wěn)定，特異性明顯優(yōu)于其他類型實(shí)驗(yàn)。并且異性抗體IgG如果消失，實(shí)驗(yàn)結(jié)果則會轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮浴?/p>

2.5 非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測診斷

非洲豬瘟與其他類型豬疾病診斷有著一定相似性，特別是豬丹毒以及藍(lán)耳病等，鑒別與診斷方式主要就是依據(jù)病原學(xué)、血清學(xué)、臨床病癥展開診斷。診斷方式：

一是病原學(xué)診斷，是利用熒光定量檢測方式，采集患豬淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體以及肝臟等部位，制作凍切片，與其相關(guān)內(nèi)源性抗原能夠充分結(jié)合非洲豬瘟熒光抗體，結(jié)合顯微鏡能夠?qū)⑵渲庇^的顯示。

二是實(shí)驗(yàn)室觀察診斷。主要通過觀察來掌握非洲豬瘟病癥，可以全面區(qū)分非洲豬瘟與藍(lán)耳病等病癥區(qū)別，其中非洲豬瘟在出現(xiàn)之后，肉豬會出現(xiàn)行動遲緩、互相對桑，皮膚、漿膜、黏膜以及實(shí)質(zhì)的器官可能會發(fā)生出血改變，典型特征為盲腸與結(jié)腸黏膜位置存在紐扣狀的潰瘍，淋巴切開之后會出現(xiàn)大理石病變情況。而藍(lán)耳病癥發(fā)病之后患豬則會發(fā)生站立不穩(wěn)、體溫上升情況，病豬解刨之后可以發(fā)現(xiàn)心葉變長、肺葉尖、表面有著花紋，這也是藍(lán)耳病較為典型體現(xiàn)。

3.動物疫病防控實(shí)用技術(shù)

動物疫病防控作為避免疫病繼續(xù)在區(qū)域內(nèi)傳播的關(guān)鍵手段，通常疫病防控需要從養(yǎng)殖場管理、動物引進(jìn)管理、疫苗免疫接種、做好驅(qū)蟲工作、疫病監(jiān)測與診斷等幾個方面展開。

3.1 做好養(yǎng)殖場管理

養(yǎng)殖場管理主要分為兩個方面，一方面是動物養(yǎng)殖場選址以及養(yǎng)殖場布局管理，另一方面則是養(yǎng)殖場環(huán)境管理。選址和布局管理：一是定養(yǎng)殖場位置需要遠(yuǎn)離居民居住區(qū)域、生活飲用水源區(qū)域以及醫(yī)院、學(xué)校等各類場所，根據(jù)國務(wù)院獸醫(yī)主管部門所制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，養(yǎng)殖場距離此類區(qū)域的位置需要保持1000m往上；二是養(yǎng)殖場內(nèi)部需要設(shè)立污水、污染物、染病動物、病死動物等相關(guān)無害化處理設(shè)備，并嚴(yán)格區(qū)分養(yǎng)殖場生活區(qū)域以及生產(chǎn)區(qū)域，養(yǎng)殖場生產(chǎn)區(qū)域附近需要設(shè)立消毒通道，盡量保證養(yǎng)殖場內(nèi)部布局有著科學(xué)化特征，符合動物養(yǎng)殖需求。養(yǎng)殖場環(huán)境管理：一是在動物養(yǎng)殖過程中，需要做好場內(nèi)衛(wèi)生管理工作，保證場內(nèi)與場外欄舍的清潔度，每天清掃的垃圾需要通過養(yǎng)殖場內(nèi)處理設(shè)備積極展開無害化處理；二是制定消毒計劃，定期落實(shí)養(yǎng)殖場消毒工作，每3月針對消毒藥物進(jìn)行更換，避免病原微生物出現(xiàn)耐藥問題。并結(jié)合消毒要求針對進(jìn)出人員以及車輛展開消毒；四是做好滅鼠、滅蚊等各項(xiàng)工作。

3.2 動物引進(jìn)管理

區(qū)域農(nóng)戶在利用購買、引進(jìn)等各類手段提升養(yǎng)殖區(qū)域禽畜養(yǎng)殖數(shù)量和經(jīng)濟(jì)效益時，不僅需要考量動物品種、動物對于環(huán)境適應(yīng)性，還需要避免攜帶有疫病的動物進(jìn)入到養(yǎng)殖區(qū)域內(nèi)。一方面，如果必須要從外部引入禽畜，則需要從未出現(xiàn)過疫病的區(qū)域進(jìn)行購買。購買之后積極展開禽畜檢疫以及臨床觀察工作，保證禽畜符合要求之后，為其注射各類疫苗，展開體表消毒、驅(qū)蟲后才可將其引入到區(qū)域養(yǎng)殖場內(nèi)部。全面運(yùn)到養(yǎng)殖場內(nèi)部之后，需要將其與原有禽畜隔離養(yǎng)殖2月左右，積極觀禽畜健康狀態(tài)以及自身情況，確保健康之后，方可將其與原有禽畜混合養(yǎng)殖。另一方面，需要盡量避免從外部引入不明的禽畜，降低禽畜引進(jìn)頻率以及次數(shù)，在區(qū)域養(yǎng)殖場內(nèi)部構(gòu)建一個科學(xué)、穩(wěn)定自繁殖養(yǎng)殖體系。已經(jīng)發(fā)生過疫病養(yǎng)殖場在引進(jìn)動物時，需要針對養(yǎng)殖場展開全面消毒，并重點(diǎn)監(jiān)測養(yǎng)殖場各個區(qū)域安全程度。

3.3 動物疫病免疫接種

每個養(yǎng)殖場需要結(jié)合所養(yǎng)殖的動物、疫病發(fā)生情況、動物數(shù)量等來制定與本場相符合的疫病免疫方案，并將其嚴(yán)格落實(shí)。以牛、羊養(yǎng)殖為例，一般情況下，需要在犢牛百日時展開初次免疫，接種牛口蹄疫苗，一個月之后進(jìn)行再次接種，強(qiáng)化免疫能力，后續(xù)春季、秋季等各免疫接種一次；每年3月份與4月份需要接種氣腫疽疫苗、牛出敗疫苗各接種一次。對于羊口蹄疾病則在羔羊45日齡時接種疫苗，一月后進(jìn)行強(qiáng)化接種，后續(xù)在春季與秋季分別接種一次；每年羊痘疫苗接種一次；2月底－3月初、9月份接種2次四聯(lián)疫苗（防治猝狙、快疫、羔羊痢疾、腸毒血證），接種過程中無論羊只多大，都可在其皮下或者肌肉當(dāng)中注射疫苗，疫苗量為5ml。依據(jù)疫病種類、動物種類為其提供針對性疫苗，能夠極大地降低疫病發(fā)生率，對于疫病防治有著十分重要的幫助。

3.4 做好驅(qū)蟲工作

動物驅(qū)蟲作為較為關(guān)鍵疫病防控手段，驅(qū)蟲工作需要定時展開，結(jié)合不同季節(jié)選擇針對性驅(qū)蟲藥物。每次驅(qū)蟲工作過程中需要全場同時進(jìn)行，避免驅(qū)蟲不夠徹底而發(fā)生互相感染以及重復(fù)感染問題。驅(qū)蟲次數(shù)一般為兩月一次，每次驅(qū)蟲后間隔7d，再投入第二次驅(qū)蟲藥物。需要注意，在驅(qū)蟲過程中要重點(diǎn)關(guān)注驅(qū)蟲藥物、驅(qū)蟲時間、藥物計量等，例如：在利用藥浴技術(shù)驅(qū)蚧螨、虱時，需要盡量選擇在天氣晴朗時間進(jìn)行，保證所有動物都可被均勻地涂抹上相應(yīng)藥物；驅(qū)除線蟲、絳蟲過程中則可使用阿苯達(dá)唑，（生牛藥物計量保持在15±5mg/kg；生豬藥物在7.5±2.5mg/kg；羊計量在10±5mg/kg）；去除肝片吸蟲過程中則可選取硝氯酚，計量一般保持在3～8mg/kg。禽畜驅(qū)蟲之后半個月內(nèi)的糞便需要全面集中在一起，將其密封展開無害化、發(fā)酵處理，以此來防止蟲害問題繼續(xù)擴(kuò)展。

3.5 建立疫病預(yù)報機(jī)制

農(nóng)戶所養(yǎng)殖的禽畜經(jīng)常會在某一季節(jié)暴發(fā)疫病問題，所以需要結(jié)合疫病暴發(fā)情況展開預(yù)報工作。由于禽畜傳染性疾病極易受到外界各類因素限制和影響，需要提高關(guān)注力度，例如：在每年6-8月份時期正是炭疽病、豬姜片蟲吸蟲等病癥高發(fā)時期，如果此時氣候出現(xiàn)多雨、高溫現(xiàn)象則極易造成傳染范圍增加；進(jìn)入到7-10月份之后，受到風(fēng)的影響，口蹄疫傳播強(qiáng)度會不斷提高。因此，需要針對口蹄疫傳播情況展開預(yù)警工作。獸醫(yī)人員需要提前依據(jù)網(wǎng)絡(luò)、實(shí)地走訪等各類手段針對這一季節(jié)常見疫病展開宣傳，并告知區(qū)域養(yǎng)殖戶在這一時期需要接種的疫苗、消毒工作開展形式等，將預(yù)警工作全面落實(shí)，以此來避免病毒在區(qū)域內(nèi)部流行。農(nóng)戶在養(yǎng)殖過程中一旦發(fā)現(xiàn)疫病，如非洲豬瘟、牛瘟、狂犬病、口蹄疫、禽流感、牛瘟等各類疫病時也需要積極向上級部門匯報。由上級部門下派獸醫(yī)團(tuán)隊(duì)和工作小組，在第一時間利用科學(xué)化、高效化的疫病防控技術(shù)和防控方案，針對屠宰場展開監(jiān)測，把疫病影響最大化的降低，讓養(yǎng)殖人員經(jīng)濟(jì)損失可以全面減少。

3.6 增強(qiáng)疫病診斷力度

農(nóng)業(yè)部門所頒發(fā)的《國家動物疫病監(jiān)測計劃》當(dāng)中精準(zhǔn)表明，我國各個區(qū)域需要結(jié)合疫病發(fā)生狀況和情況，積極落實(shí)動物疫病監(jiān)測工作。在實(shí)際開展中，可以結(jié)合動物疫病癥狀診斷、臨床癥狀以及疫病病理學(xué)改變、疫病流行學(xué)調(diào)查等展開疫病診斷。診斷過程中，需要基于病原學(xué)展開監(jiān)測，從病料當(dāng)中將致病病菌分離，依據(jù)致病病菌情況以及致病病菌的種類，判斷病料當(dāng)中是否存在病毒感染、細(xì)菌感染或者寄生蟲感染問題。對于細(xì)菌性感染問題，則需要結(jié)合藥敏實(shí)驗(yàn)來充分選取高敏抗生素展開科學(xué)化、針對性治療。寄生蟲診斷方法則主要為沉淀法，通過檢測動物糞便或者部分組織當(dāng)中成蟲或者寄生蟲，判斷、評估動物是否受到寄生蟲感染，如果感染則可采取針對性手段來驅(qū)除寄生蟲。

4.結(jié)束語

綜上所述，在落實(shí)動物疫病防控過程中，將診斷技術(shù)以及防控技術(shù)當(dāng)作基礎(chǔ)，可以讓疫病得到及時處理，避免疫病在區(qū)域內(nèi)繼續(xù)的進(jìn)行傳播。不過在實(shí)際展開診斷和防控過程中，并沒有適用性較強(qiáng)、與各個區(qū)域診斷和防控要求相符合技術(shù)，極易造成疫病防控質(zhì)量、效果持續(xù)降低。為此，在未來仍舊需要對實(shí)驗(yàn)室診斷以及動物防控實(shí)用性較強(qiáng)技術(shù)展開研究，不斷改善技術(shù)成熟度以及技術(shù)使用效果，盡量結(jié)合不同動物、疫病研發(fā)出針對性的防控技術(shù)，為養(yǎng)殖業(yè)健康、長期發(fā)展奠定良好基礎(chǔ)。