桑黃活性成分的提取方法及應(yīng)用研究進展

李小群，梁貴秋，劉開莉，肖瀟，徐雯雯，韋偉，唐永飛，林強軒，陸春霞*

（1.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站，南寧市 530007；2.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)科學(xué)研究院，南寧市 530007）

桑黃（Phellinus igniarius）是一類珍稀藥用大型真菌，在2012年以前桑黃的分類比較模糊，經(jīng)過對其形態(tài)學(xué)和分子系統(tǒng)學(xué)進行多年研究，最終確定了桑黃類群的具體劃分。戴玉成等［1］認為桑黃纖孔菌（俗名桑樹桑黃）是傳統(tǒng)中醫(yī)藥文獻所記載的桑黃，桑黃在中國主要有7 個種類，以高山桑黃（俗名藏桑黃）、桑黃纖孔菌等為主。桑黃的子實體菌蓋呈半球形狀，顏色為灰色、褐色或者黑色，表面木質(zhì)化［2］，且因其所寄生樹種不同，子實體的顏色、形狀以及藥用成分都存在一定的差異［3］。桑黃在中國古稱桑耳、桑臣、樹雞、胡孫眼等，作為傳統(tǒng)中藥已有兩千多年的藥用歷史。漢代《神農(nóng)本草經(jīng)》、唐代《藥性論》及明代《本草綱目》均有桑耳和桑黃的藥用記載，主要有治療痢疾、盜汗、血崩、血淋、臍腹?jié)?、脫肛瀉血、帶下、閉經(jīng)、止瀉且延年等功效［4-6］。近代藥理學(xué)研究表明，桑黃在抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降血脂、保護肝臟、提高免疫力、解毒等多方面具有顯著的功效，且無毒副作用。桑黃含有多糖類、黃酮類、香豆素、三萜類、氨基酸以及酶類等化學(xué)活性成分［7-8］。據(jù)不完全統(tǒng)計，桑黃的20多種藥用功效逐漸為人們所探知，包括抗氧化、抗腫瘤、抑菌消炎、提高免疫力、保護肝臟、降血糖、降血脂、抗肺炎等［9］。

桑黃是近幾年國內(nèi)外醫(yī)藥保健領(lǐng)域研究開發(fā)的熱點，其藥理活性廣泛、藥用及保健功效顯著，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、日用化工、保健品等行業(yè)，擁有廣闊的藥用市場前景。桑黃在日、韓、美等國已形成了完整的產(chǎn)業(yè)鏈，已有眾多與桑黃相關(guān)的產(chǎn)品投放到市場中。桑黃在中國的應(yīng)用由來已久，其藥用價值在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代科學(xué)中發(fā)揮著重要的作用。受生理狀態(tài)的特殊性、復(fù)雜性以及外部環(huán)境的制約，桑黃在自然環(huán)境下形成子實體的周期長達3～4 年，且可用子實體數(shù)量稀少。由于長期遭到掠奪性采摘，現(xiàn)野生桑黃數(shù)量非常稀少，又因其外觀顏色金黃，野外資源稀缺且價值不菲，因此有“森林黃金”的美譽［10］。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)發(fā)展，桑黃相關(guān)的藥用活性成分也逐漸被提取出來，分離純化工藝不斷得到改進。桑黃培養(yǎng)條件苛刻，對桑黃藥用有效成分的提取、分離和純化技術(shù)的應(yīng)用，能最大限度地發(fā)揮其藥用價值和保健功能，促進桑黃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。本文結(jié)合近幾年相關(guān)研究，對桑黃主要活性物質(zhì)的藥理作用、分離提取方法以及相關(guān)產(chǎn)品研發(fā)進行綜述，以期為其活性成分提取和功能性產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 桑黃主要活性物質(zhì)的藥理作用

桑黃在中、韓、日、美4 國均有廣泛的應(yīng)用［11］，其主要活性成分有多糖、黃酮、三萜和酚類物質(zhì)等［12-13］，據(jù)文獻資料記載桑黃主要用于預(yù)防或治療癌癥、糖尿病、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、胃腸道功能紊亂、腹瀉和過敏等多種疾病，其中尤以桑黃多糖的抗腫瘤功效最為顯著［14］。經(jīng)色譜學(xué)研究發(fā)現(xiàn)桑黃多糖主要是由葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖等單糖單元構(gòu)成［15］。YANG 等［16］研究表明桑黃的雜多糖PIP60-1 主要由L-海藻糖、D-葡萄糖、D-甘露糖和半乳糖按一定比例縮合而成；BAKER 等［17］通過硫酸銨沉淀、透析、濃縮以及陰離子交換色譜分離得到的多糖，結(jié)構(gòu)上是由葡萄糖和甘露糖2種單體構(gòu)成，并以建模的方式論證出這種聚糖高度分支化、無顯著數(shù)量的短側(cè)鏈的結(jié)論。

桑黃在自然界中分布廣泛、種類繁多，因生長的樹種、產(chǎn)地和分類等不同，有效成分含量、功效上存在一定的差異。齊欣等［7］通過對桑黃所生長的6 種不同樹種進行藥效成分的比較，發(fā)現(xiàn)桑樹桑黃多糖類、黃酮類、三萜類成分含量均高于其他樹種；王欽博［18］認為桑黃一年生要比兩年生子實體的多糖、黃酮類和三萜含量略高，抗氧化活性也較強；此外，菌絲體和子實體中多糖含量也存在一定的差異，有研究表明菌絲體中多糖的含量要比子實體中的含量高，是子實體的1倍以上［8］。

1.1 多糖類物質(zhì)的藥理活性

桑黃多糖在抗腫瘤、抗氧化、抑菌消炎、防誘變、緩解敗血性休克、治療糖尿病、促進消化、解毒以及增強機體免疫力等方面具有顯著功效［19］，治療癌癥方面已被證實比其他藥用真菌療效更好，因此成為國內(nèi)外專家學(xué)者研究的焦點。

1.1.1 抗腫瘤作用 在藥用真菌中，桑黃的抗腫瘤效果在國際上公認排在首位，桑黃的抗腫瘤作用與其多糖類物質(zhì)有關(guān)。溫克等［20］將5 種藥用真菌的抗腫瘤作用進行比較實驗，結(jié)果表明桑黃的抗腫瘤效果均優(yōu)于靈芝、PL-2、阿加里斯茸、PL-5等其他藥用真菌。桑黃多糖PIE 抑制腫瘤細胞生長的機制是依靠IL-2 細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、激活腫瘤壞死因子相關(guān)的抗腫瘤活性達到抗癌效果［21］。研究人員發(fā)現(xiàn)，桑黃活性多糖PIE能使癌細胞的生長得到明顯抑制，機體生命周期得以延長，體內(nèi)血清IL-18、IL-2 水平顯著提高［22］。LIU等［23］研究表明，桑黃多糖能通過阻礙細胞分裂來實現(xiàn)抑制HELA 和SGC-7901 細胞的增殖。在抗腫瘤的化學(xué)療法中，大多數(shù)從真菌中提取的多糖類化合物毒副作用都較小，而桑黃多糖幾乎沒有毒性，其他抗癌劑對癌癥患者的正常細胞有殺傷作用，且桑黃多糖對腫瘤的抑制率高達96.7%，這是桑黃用于抗腫瘤藥物的一大優(yōu)點。

1.1.2 抗氧化作用 研究表明，抗氧化是預(yù)防機體衰老的關(guān)鍵，機體中的自由基如消除得不及時，會造成機體器官功能損傷，積累到一定程度可能發(fā)生癌變，對機體造成嚴重的影響。閆景坤等［24］通過抗氧化實驗結(jié)果得出，桑黃胞內(nèi)多糖對自由基的消除有顯著的效果。此外，WANG等［25］通過研究得出，在桑黃活性多糖的作用下線粒體DNA 可避免遭到活性氧基團損傷，使得線粒體功能正常運行，且具有較強的清除-OH、O2、DPPH 效果以及表現(xiàn)出較強的還原能力。同時，桑黃的活性多糖還能增強谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶的活性，且使血液中丙二醛的含量降低［26］。研究表明，桑黃多糖與抗氧化作用存在劑量依賴性，并且在清除-OH、DPPH 的能力上桑黃胞內(nèi)多糖與胞外多糖有一定區(qū)別［27］。

1.1.3 免疫調(diào)節(jié)作用 桑黃多糖通過阻斷腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子-6、髓樣分化因子88、核因子-κB、氨基末端激酶和P38的表達，抑制活性氧自由基的形成以及細胞因子（TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-4）的分泌，來發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的作用［26］。KIM等［28-30］研究表明，桑黃胞外多糖能增殖T細胞，且能增強毒性T淋巴細胞的毒性；桑黃酸性多糖通過調(diào)節(jié)增加氧化亞氮和腫瘤壞死因子α來增強腹膜巨噬細胞的活性；桑黃蛋白多糖能增強蛋白激酶C 和蛋白酪氨酸激酶的活性，使機體B 淋巴細胞激活。有研究表明，桑黃多糖通過增殖RAW264.7 細胞，提高吞噬能力、分泌相關(guān)免疫因子，從而表現(xiàn)出顯著的免疫調(diào)節(jié)活性［31］。李志濤等［32］通過動物免疫實驗結(jié)果證明，桑黃菌絲體多糖能有效地加強小白鼠的免疫力，并且在一定范圍內(nèi)，免疫力與桑黃濃度呈正相關(guān)。通過設(shè)置低、中、高等3種桑黃多糖給藥動物實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清細胞因子TNF-α、IL-2、IL-6 在各給藥組中都有明顯提高，除了TNF-α在低劑量組中未表現(xiàn)出顯著差異外，且各劑量組T、B淋巴細胞的增殖能力都得到顯著提高，說明其作用機制可能與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)［33］。

1.2 黃酮類物質(zhì)的藥理活性

黃酮類化合物屬于多酚類化合物，主要存在于天然植被中，具有重要的藥理學(xué)活性，在防止細胞衰老、擴張血管、降低血脂血糖以及增加免疫力等方面有著重要作用。

1.2.1 抗氧化作用 桑黃子實體和菌絲體中的黃酮類化合物能直接捕獲或清除氧化反應(yīng)過程中產(chǎn)生的自由基，從而阻斷自由基鏈反應(yīng)及消除自由基，起到抗氧化、延緩衰老的作用［34-35］。桑黃的醇提取物富含黃酮類物質(zhì)，具有很好的抗氧化功效，可有效清除DPPH 自由基，抑制脂質(zhì)過氧化作用與濃度呈正相關(guān)［36］。研究發(fā)現(xiàn)，桑黃黃酮類化合物對-OH、O2自由基具有較強的清除能力，能抑制Fe2+引起的過氧化反應(yīng)［37］。郎明紫等［38］通過對桑樹桑黃黃酮進行體外抗氧化活性測定，發(fā)現(xiàn)其具有強還原力以及對DPPH自由基和羥基自由基的強清除能力，且其還原力和自由基清除能力與濃度呈劑量依賴性，表現(xiàn)出明顯的體外抗氧化作用。實驗發(fā)現(xiàn)，含黃酮成分的醇提物達到一定濃度時，對超氧陰離子的清除能力顯著，對淋巴白血病細胞的抑制率為82%［39］。另外，在鱘魚魚子醬中添加桑黃菌絲體醇提物黃酮類，表現(xiàn)出較強的抗氧化活性［40］。

1.2.2 抗腫瘤作用 桑黃總黃酮具有較好的抑制腫瘤增生功效，其作用機制可能與阻滯腫瘤細胞的細胞周期S+G 期有關(guān)。黃羅丹等［41］研究表明，桑黃黃酮可以直接作用于癌細胞、抑制腫瘤細胞生長，同時提高機體免疫力，表現(xiàn)為體外抗癌作用，且對正常細胞無明顯毒性作用。研究證實，桑黃通過深層發(fā)酵產(chǎn)生的活性物質(zhì)黃酮類，對人宮頸癌細胞具有顯著抑制作用，且具有較強的清除羥基自由基和DPPH能力［42］。

1.2.3 抗菌抑菌作用 劉凡等［43］、孟慶龍等［44］對桑黃菌絲體不同溶劑提取物進行抑菌實驗結(jié)果顯示，不同溶劑提取物對5種常見菌群金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、普通變形桿菌和沙門氏菌均有較好的抑制作用，其中以甲醇提取物的抑菌作用最顯著，而活性成分的初步檢測結(jié)果表明甲醇提取物中主要含有黃酮類成分，推測桑黃菌絲體表現(xiàn)出的較高抗菌作用與桑黃黃酮類物質(zhì)有關(guān)。

1.3 三萜類物質(zhì)的藥理活性

研究表明，三萜類化合物具有的活性主要表現(xiàn)為抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化、保肝護肝、降血糖、提高免疫力和防治心腦血管系統(tǒng)疾病等，可用于多種疾病的研究和臨床治療。羊毛甾烷型三萜類化合物可以劃分為A、B、C、D、E等5種主要骨架構(gòu)型，具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等藥理活性。研究人員提取分離得到的羊毛脂烷型三萜類化合物對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的細胞一氧化氮（NO）產(chǎn)生能起到有效的抑制作用，具有很好的抗炎活性［45］；此外，羊毛甾烷型三萜類化合物經(jīng)實驗證明對腫瘤細胞具有顯著的抑制效果［46］。蔡程山［47］對桑黃總?cè)七M行抗氧化能力及抑菌作用測定，總?cè)频臐舛仍谝欢ǚ秶鷥?nèi)具有良好的清除DPPH、ABTS 能力，且對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌等4 種供試細菌都表現(xiàn)出很好的抑制作用。馮娜等［48］從桑黃（P.baumii）子實體中分離得到的三萜化合物Ganoderol B、化合物InoscavinA 對腫瘤細胞HepG2的增殖均有抑制作用。

1.4 其他活性物質(zhì)的藥理活性

桑黃中含有其他成分主要有香豆素、生物堿、毗喃酮、麥角甾醇、落葉松覃酸、脂肪酸、芳香酸、氨基酸、酶類等［49-50］。WU等［51］從桑黃中分離得到的3β-hydroxy-11、12-O-isopropyldrimen 等活性成分對舒張血管具有顯著的功效。LEE等［52］從桑黃中提取到一種新的苯乙烯基吡喃酮，具有很好的自由基清除能力，能抑制由Fenton 反應(yīng)引起的DNA 超螺旋斷裂。WANG等［53］對桑黃中的吡喃酮類成分進行研究，發(fā)現(xiàn)其有抑制小鼠肺微粒體脂質(zhì)過氧化的作用，在對抗人癌細胞的過程中能適度調(diào)節(jié)細胞毒素活性。有學(xué)者從桑黃中分離得到的新化合物對神經(jīng)細胞、肝細胞有較好的保護活性，如豆甾-7，22-二烯-3β、環(huán)（苯丙氨酸-絲氨酸）［54］。

2 桑黃主要活性成分的組成及提取方法

2.1 多糖類物質(zhì)成分及其提取分離

2.1.1 多糖類物質(zhì)成分 桑黃多糖可劃分為子實體多糖、菌絲體多糖，菌絲體多糖又包含胞內(nèi)多糖和胞外多糖［18，55］。子實體多糖以雜多糖為主，單糖主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖等［57-58］。由β-D-半乳吡喃糖組成小分子多糖，經(jīng)（1→3）鍵連接β-D-葡萄吡喃糖和β-D-葡萄糖組成大分子多糖［56-57，59］。Baker等［17］從桑黃中獲得一種水溶性多糖，結(jié)構(gòu)是由β-（1→3）甘露糖支鏈經(jīng)過β-（1→6）糖苷鍵與β-（1→3）葡聚糖主鏈連接組成。YANG等［60］于2007年從桑黃子實體中分離得到PIP60-1新型雜多糖，其大小為17.1 kDa，是5種單糖以1∶1∶1∶2∶1 的比例組成；在2009 年獲得PISP1 雜多糖，是由甘露糖、半乳糖、巖藻糖和3-O-Me-半乳糖等4種單體以1∶2∶1∶2的比例組成［61］。從桑黃（P.linteus）的菌絲體中分離得到的PL-N1新型高分子多糖，是由木糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖以6.7∶1.0∶4.0∶1.3 的比例組成，大小約為343 000 kD［62］。LEE 等［63］研究結(jié)果表明，桑黃（P.linteus）胞外多糖的單糖是由80%～95%的葡萄糖、3%～12%的甘露糖以及2%～10%的半乳糖構(gòu)成。另外，桑黃胞外多糖中還含有少量蛋白質(zhì)［65］，主要由甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸構(gòu)成［64］。葛青等［57］從桑黃子實體中提取到單一多糖PBF6，相對分子質(zhì)量為3.23×105u，僅含有葡萄糖單體、不含蛋白質(zhì)和核酸。

2.1.2 多糖類物質(zhì)提取分離方法 桑黃多糖在實驗室中常用的提取分離方法，主要包括熱水浸提法、超聲波提取法、微波提取法、酶提法、吸附法、深層發(fā)酵法等［59］。游慶紅等［65］的水提法工藝條件為：提取時間為7.05 h，提取溫度為99 ℃，固液比為20.8∶1.0，多糖的獲得率僅為1.133%。孫軍德等［66］經(jīng)過優(yōu)化桑黃菌絲體多糖的熱水浸提法，得到工藝條件優(yōu)化為80%的乙醇，提取時間為2 h，提取溫度為70 ℃，固液比為1∶50，多糖提取率達3.48%。時東方等［67］通過正交試驗設(shè)計，研究發(fā)現(xiàn)微波提取法提取桑黃菌絲體粗多糖的最優(yōu)工藝條件為：液料比為50∶1，微波處理15 min，提取次數(shù)為3次，獲得4.18%的粗多糖，此法要比熱水提取法、超聲波提取法的提取率高。為進一步優(yōu)化提取條件，提高多糖得率，可采用超聲波輔助復(fù)合酶提取法［68-69］。程偉等［70］以桑黃（P.igniarius）子實體為材料，對超聲波協(xié)同纖維素酶法進行了工藝優(yōu)化研究，發(fā)現(xiàn)較好提取工藝條件為：pH為5.1，纖維素酶為1%，超聲時間為39 min，超聲功率為240 W，超聲溫度為54 ℃，提取率達5.30%，桑黃多糖的提取率顯著高于超聲波提取法或水提法。通過復(fù)合酶法優(yōu)化干巴菌多糖的提取工藝，得到的最佳條件為復(fù)合酶濃度0.47%、料液比為1∶40（mg/L）、酶解時間64 min，獲得17.87%的干巴菌多糖，在此條件下干巴菌多糖的提取率最高［71］。

2.2 黃酮類物質(zhì)成分及其提取分離

2.2.1 黃酮類物質(zhì)成分 桑黃中黃酮類活性物質(zhì)是含量較高的一類次級代謝產(chǎn)物，在子實體和菌絲體中均有分布［72］，種類主要有二氫黃酮類、黃烷類黃酮等。吳長生等［56］從桑黃子實體中分離鑒定出的黃酮類物質(zhì)多達15 種。目前從桑黃中分離得到的黃酮類化合物有桑黃黃酮A（phelligrin A）、7-甲基圣草素、桑黃黃酮B（phelligrin B）、甲基桑黃黃酮A（methylphelligrin A）、甲基桑黃黃酮B（methylphelligrin B）、柚皮素、異甲基桑黃黃酮A（epi-methylphelli-grin A）、櫻花亭、異甲基桑黃黃酮B（epi-methylphelligrin B）、芫花素、山奈素等［73-74］。不同培養(yǎng)基質(zhì)的桑黃，黃酮類物質(zhì)含量有明顯差別，桑樹桑黃黃酮類物質(zhì)含量可高達5.12%，明顯高于楊樹桑黃、松樹桑黃等。

2.2.2 黃酮類物質(zhì)成分提取分離方法 黃酮類化合物的生物合成途徑易受到溫度、光、微量元素、外源激素等多種因素的影響。大部分天然黃酮以與糖結(jié)合成碳糖配基的形式存在，易溶于乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯等有機溶劑。黃酮類化合物提取方法主要有溶劑提取法、大孔吸附樹脂法、微波萃取提取法、超臨界萃取提取法、酶解法等［75-76］。程俊文等［77］利用響應(yīng)面法對桑黃子實體總黃酮超聲波輔助提取工藝進行優(yōu)化，選擇乙醇體積分數(shù)、超聲時間及超聲溫度作為3個主要的試驗參數(shù)，確定總黃酮的最佳提取條件為：乙醇體積分數(shù)70.9%，超聲時間為47.8 min，超聲溫度為55.2 ℃，總黃酮得率平均為2.51%?；鼐У龋?7］采用L9（34）正交試驗對楊樹桑黃黃酮的超聲輔助乙醇提取工藝參數(shù)進行優(yōu)化，獲得桑黃總黃酮的最佳提取工藝為：乙醇體積分數(shù)55%、料液比為1∶20（g/mL）、提取溫度為70 ℃、超聲提取時間為1.5 h，總黃酮提取率為1.614%。陳曉平等［78］采用微波輔助乙醇法提取桑黃總黃酮，得出最優(yōu)提取工藝為：乙醇濃度為68%、提取時間為2.17 h、微波時間為62 s、微波功率為550 W，獲得29.96 mg/g 的總黃酮。張倩等［79］研究發(fā)現(xiàn)，采用超臨界二氧化碳萃取法提取桑黃菌絲體中的黃酮，CO2超臨界萃取物中黃酮類化合物的含量為4.67%，且萃取物具有較強的清除DPPH的活性，清除羥自由基的活性較弱。超臨界二氧化碳萃取法是提取黃酮等抗氧化成分的最佳方法之一，該方法可在接近室溫的條件下使用，具有無毒無害可避免熱敏性物質(zhì)氧化、無化學(xué)試劑殘留等特點［80］。

2.3 三萜類物質(zhì)成分及其提取分離

2.3.1 三萜類物質(zhì)成分 桑黃中主要含有倍半萜、二萜 三萜等萜類化合物，其中三萜的種類多樣，含量豐富，是藥理活性的主要成分［57］。從桑黃中提取分離獲得的三萜包括幼葉酸、羊毛甾-30-羥基-8，24-二烯-21-酸、羊毛甾-8，25-二烯-3-醇、羊毛甾-8，23，25-三烯-3，22-二酮-23、孕甾-8-烯-20-羧酸-4，4，14-三甲基-3-氧代、苯四酸、羊毛甾醇、阿爾貝酸、natalic、松針?biāo)帷?6-環(huán)氧、gilvsinsA、gilvsinsB、gilvsinsC、gilvsinsD，原人參二醇、igniarensA、B、igniarensC、igniarensD、烏蘇酸、白樺脂醇、β-乳香酸、24-亞甲基La-nost-8-ene-3β-22-二醇等［55］。

2.3.2 三萜類物質(zhì)成分提取分離方法 梁佳等［81］利用微波提取法優(yōu)化三萜提取工藝，優(yōu)化工藝條件為：微波功率為600 W，微波時間為10 min，乙醇為80%，獲得1.48 mg/g 的三萜類化合物。于小鳳等［82］利用響應(yīng)面法優(yōu)化了桑黃三萜的超聲提取工藝，條件是：乙醇濃度70%、料液比為1∶20（g/mL）、提取溫度為60 ℃、提取時間為21 min，總?cè)铺崛÷蔬_到9.80 mg/g。謝江寧等［83］利用超聲輔助提取桑黃中的總?cè)疲顑?yōu)條件是提取溫度為60 ℃，料液比為1∶25，乙醇70%，超聲提取時間為20 min，桑黃總?cè)铺崛÷蕿?.40 mg/g。何策等［84］在單因素實驗的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法優(yōu)化了超聲波法提取桑樹桑黃子實體中三萜類化合物的工藝，結(jié)果顯示，超聲波法提取桑樹桑黃總?cè)频淖罴褩l件為：提取時間為49 min、乙醇濃度為80%、提取溫度為61 ℃，料液比1∶22（g/mL），總?cè)频寐士蛇_12.32%±0.17%，總?cè)频牡寐矢哂谥暗难芯拷Y(jié)果［81-82］。蔡程山［47］運用響應(yīng)面法對菌絲體總?cè)频奶崛l件進行優(yōu)化，最優(yōu)提取工藝是：乙醇為80%、超聲時間為20 min、超聲溫度為60 ℃，總?cè)铺崛÷蔬_13.30 mg/g。

3 桑黃活性成分物質(zhì)的應(yīng)用及前景

隨著生活水平的提高，人們的養(yǎng)生保健意識不斷增強，廣大消費者逐漸把目光聚焦在具有保健功能的食藥用菌上。桑黃是近年來研究開發(fā)利用較多的一種多年生藥用真菌，含有多糖類、黃酮類、萜類等豐富的生物活性物質(zhì)，在提高人體免疫力、抗氧化、抑菌消炎、抗腫瘤等方面有著特殊功效，可制備成天然的藥食同源產(chǎn)品，具有營養(yǎng)豐富、藥理活性突出等特點，廣泛應(yīng)用在食品、醫(yī)藥、飼料以及護膚品等行業(yè)中。在國外，對桑黃開發(fā)利用最早的是日本和韓國，主要應(yīng)用在研制抗癌藥品、養(yǎng)顏保健品以及提高機體免疫力等方面，且已開發(fā)成抑制艾滋病的新藥。中國對這方面的研究也取得了一定的進展，如吉林省開發(fā)出的復(fù)合桑黃口服液已銷往國內(nèi)外。目前，國內(nèi)外已研發(fā)出了多種桑黃產(chǎn)品，包括桑黃茶、桑黃口服液、復(fù)方膠囊、菌絲體微粉末、子實體、提取物浸膏等，市場的需求量很大。

3.1 食品研發(fā)

食品相關(guān)的品種主要有“代用茶”“固體飲料”“配制酒”“壓片糖果”等。藥理學(xué)研究表明，楊樹桑黃在抗氧化、抗腫瘤、抗衰老、提高免疫力、抑菌消炎、保護心血管、改善偏頭痛等方面有著顯著的功效。從發(fā)揮桑黃產(chǎn)品抗腫瘤、利尿消腫、軟堅散結(jié)等作用出發(fā)，為滿足易過敏、免疫力下降、造血功能損傷、營養(yǎng)不良、脫發(fā)、厭食者等人群的需求，通過對楊樹桑黃代用茶和固體飲料的配方工藝進行研究，開發(fā)出了兩種桑黃產(chǎn)品——楊樹桑黃代用茶和楊樹桑黃固體飲料［85］。為獲得色澤棕紅、風(fēng)味獨特、口感甜爽的桑黃液體發(fā)酵茶飲料，可用茶汁作為培養(yǎng)基，通過響應(yīng)面試驗法對桑黃液體發(fā)酵茶飲料工藝條件進行了優(yōu)化，工藝條件為：菌絲量為8%、茶水料液比為4.15∶1.00（g/L）、溫度為24 ℃、轉(zhuǎn)速為173 r/min、初始pH 值為5.8［86］。在優(yōu)化桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)基工藝條件下，調(diào)配制成的桑黃發(fā)酵菌絲飲品色澤黃亮、香氣濃郁純正、口感極佳，也保留了桑黃菌絲原有的活性功能，有很好的市場前景［87］。同時，還能以桑黃菌絲液、酒花、大麥芽等為原料研制出桑黃精釀啤酒，方法為桑黃菌絲液添加量11%、原麥汁濃度為13°P、0.20%酒花添加量經(jīng)過發(fā)酵后可獲得產(chǎn)品。此配方既保留了桑黃的功效成分、又有優(yōu)良的口感，酒體飽滿、感官綜合得分高，市場前景廣闊［88］。研究表明，可將鐵皮石斛桑黃菌絲體制備成特色食品或醫(yī)藥保健品添加劑的原料，制成的產(chǎn)品不僅含有鐵皮石斛和桑黃雙重的營養(yǎng)成分和作用功效，且功效和營養(yǎng)會更加突出，保健、防病治病效果更加顯著。另外，還能將其分裝于膠囊中，制成特色保健品，既有顯著的經(jīng)濟效益又有著很好的開發(fā)前景。同時，為了獲得更豐富、全面的營養(yǎng)，可以將桑黃與靈芝、樟芝搭配，或與其他保健食品進行互補性搭配，可增加產(chǎn)品的保健功效。據(jù)相關(guān)研究報道，不同年生桑黃子實體都能研制成功能性產(chǎn)品的原料，但由于不同生長年限的椴木栽培桑黃子實體在活性成分含量、營養(yǎng)價值和抗氧化活性上有一定的差異，因此在開發(fā)桑黃產(chǎn)品時，應(yīng)根據(jù)不同產(chǎn)品所需的營養(yǎng)、活性成分的不同，在其含量達到最高值時進行采收。

3.2 醫(yī)藥應(yīng)用

目前在醫(yī)藥研究和發(fā)明專利中，桑黃已獲得了廣泛應(yīng)用，可制成中藥飲片、膠囊、口服液等，具有良好的臨床作用效果。楊樹桑黃的商業(yè)栽培子實體在中、日、韓等3 國均有著20 多年歷史，因其良好的醫(yī)藥保健功效，在中藥飲片上有著良好的發(fā)展前景。在中國的幾個省區(qū)，已有用楊樹桑黃作為材料申報桑黃中藥飲片，采用炒制、蜜炙等方式能降低桑黃本身的苦寒藥性，同時又有補益脾胃的功效。用桑黃總多糖含量作為測定指標(biāo)，制備得到的桑黃多糖片劑，具有良好的溶出度，符合藥典要求［89］。通過生物技術(shù)獲得桑黃發(fā)酵多糖，并將其制成桑黃發(fā)酵多糖膠囊，可以有效防止小鼠免疫器官萎縮，具有抗衰老、抑制免疫性肝損傷的作用，且無毒副作用［90］。有學(xué)者研究了桑黃靈芝菌絲體膠囊的毒性，結(jié)果表明，桑黃靈芝菌絲體膠囊未表現(xiàn)出遺傳毒性和亞急性毒性［91］。研究人員研制出的桑黃保健口服液、復(fù)方桑黃口服液，經(jīng)試驗證明均具有增強免疫功能的作用，有提高機體特異性和非特異性免疫功能的顯著功效［92］。由于桑樹桑黃發(fā)酵菌粉與野生桑樹桑黃子實中含有的營養(yǎng)物質(zhì)種類一樣豐富，高營養(yǎng)價值和開發(fā)價值同等，如果將桑黃菌發(fā)酵產(chǎn)品作為生物制劑加以研發(fā)，在擴大桑黃產(chǎn)業(yè)產(chǎn)能、保護野生桑黃資源方面具有重要作用。

3.3 化妝品應(yīng)用

隨著年齡不斷的增長，人體皮膚會出現(xiàn)黯淡、細紋、松弛等老化現(xiàn)象，影響皮膚老化的最主要因素是陽光中的紫外線。紫外線會造成皮膚黑色素沉著、水分流失、紅斑等多種問題。因此，護膚品中含有防曬、美白、抗氧化及抗糖化功效是化妝品行業(yè)和市場追求的方向。在護膚品中添加活性成分也成為配方師首要考慮的因素。已有文獻資料顯示，桑黃提取物有多種美容功效，桑黃醇提物抑制酪氨酸酶的效果優(yōu)于公認的美白活性成分Vc，而且不僅有很強抗紫外吸收能力，還具有抗過敏、美白、抗氧化及顯著的抗糖化功效，可將其制成一種全新的中草藥活性添加劑應(yīng)用到化妝品中［93］。研究發(fā)現(xiàn)，桑黃乙醇提取物有顯著的美白功效，能夠抑制黑色素合成的限速酶——酪氨酸酶的活性，使細胞內(nèi)黑色素的合成量減少，達到改善膚色的效果［94］。由此也說明，其在細胞水平具有較強地抑制黑色素生成的作用，運用到美白化妝品上具有一定的開發(fā)應(yīng)用價值。桑黃由于具有抗氧化、抗發(fā)炎等藥理功效，將其活性成分添加到保養(yǎng)品當(dāng)中，如研發(fā)出具有特色的面霜、洗面奶、面膜、緊致霜等，也會受到消費者的歡迎。

4 展望

桑黃作為傳統(tǒng)寶貴的中藥材，具有安全、有效、無毒副作用的特點。因其獨特的藥用功效，已成為國內(nèi)外廣大科研及臨床工作者研究的熱點，對其進行產(chǎn)業(yè)化開發(fā)利用已成為趨勢。目前，對桑黃的藥理學(xué)功效、作用機制以及活性成分的研究報道較多，因此桑黃的利用率和產(chǎn)率也得到了進一步提升。同時，在桑黃應(yīng)用方面也存在一些制約的因素，主要有：①野生桑黃遭到掠奪性開采，資源日益匱乏，難以恢復(fù)，無法生成大量桑黃子實體。②桑黃對生長條件要求苛刻，生長周期長，人工栽培難度大。③桑黃活性物質(zhì)種類繁多、結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，對其進行分離純化和結(jié)構(gòu)測定存在很大的難度，且活性成分的提取工藝還不完善。④桑黃活性成分和藥理作用與許多因素有關(guān)，針對一種疾病不同的有效成分之間是否有協(xié)同效果或者其他相互作用尚不明確。⑤桑黃相關(guān)藥效成分的試驗，還處于針對細胞系、小鼠動物實驗等進行體外環(huán)境的基礎(chǔ)試驗階段，尚未進入到臨床試驗階段。因此，為解決桑黃在開發(fā)上存在的這些問題，需要從以下方面入手。一是加大對桑黃人工栽培技術(shù)的研發(fā)力度；二是全面、系統(tǒng)地研究桑黃的活性成分，明確其在抗腫瘤、抗氧化、抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)、預(yù)防和治療疾病等方面的作用機理，探索菌齡、菌種、培養(yǎng)條件對其藥效的影響；三是優(yōu)化桑黃液體及固體培養(yǎng)基配方、提高桑黃菌絲體和子實體活性成分的提取純度。相信當(dāng)前的這些問題解決好后，大規(guī)模生產(chǎn)、利用和普及桑黃類藥物會得到大幅度的提升。

桑黃是一種藥食兩用型真菌，具有醫(yī)藥和食用價值，將桑黃加工成為食品、藥品、護膚品及保健產(chǎn)品等，可滿足日益增長的市場需求。桑黃在韓國已發(fā)展成為成熟、規(guī)?；漠a(chǎn)業(yè)，但中國桑黃的產(chǎn)業(yè)發(fā)展起步較晚，雖然市場上有桑黃多糖、桑黃茶、復(fù)方膠囊、桑黃口服液、桑黃破壁超微粉、子實體、子實體超細粉末、菌絲體微粉末、提取物浸膏等由醫(yī)藥企業(yè)和生物公司生產(chǎn)、銷售的多種桑黃產(chǎn)品，但桑黃的研發(fā)及應(yīng)用尚未能形成完整的產(chǎn)業(yè)鏈。桑黃中多糖類物質(zhì)是目前普遍認可的抗腫瘤活性最高的真菌多糖，且無毒副作用，可通過現(xiàn)代液體發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)桑黃多糖專門用于開發(fā)成功能性保健品、抗癌輔助劑，如桑黃口服液、桑黃菌粉膠囊、桑黃酒等多種不同形式的產(chǎn)品，將具有廣闊的市場前景。為了充分發(fā)揮桑黃潛在的藥用價值和經(jīng)濟價值，更好的進行綜合開發(fā)利用，需要不斷對桑黃的培養(yǎng)條件、藥理活性成分和生理功能進行深入研究。