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    溶瘤病毒治療肝癌的研究進(jìn)展

    2022-11-21 02:04:51龔濤琚姝劉建飛
    癌癥進(jìn)展 2022年13期
    關(guān)鍵詞:溶瘤腺病毒臨床試驗(yàn)

    龔濤,琚姝,劉建飛

    上海三維生物技術(shù)有限公司,上海 201206

    肝癌是中國(guó)最常見的惡性腫瘤之一,其預(yù)后差、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率高,患者5 年生存率僅為18%[1-2]。目前針對(duì)肝癌的最有效治療手段為手術(shù)治療,早期肝癌可通過(guò)手術(shù)切除和消融技術(shù)來(lái)進(jìn)行治療。然而由于肝癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,臨床早期癥狀不明顯,患者就診時(shí)通常已屬于中晚期,錯(cuò)過(guò)了手術(shù)治療的最佳時(shí)機(jī),因此肝癌的臨床主要治療手段通常采用系統(tǒng)聯(lián)合局部(如介入治療、放療等)的綜合治療方案,但由于肝癌對(duì)傳統(tǒng)的化療有很高的耐藥性,且放療對(duì)肝臟不良反應(yīng)大,因此尋求有效的肝癌治療手段顯得至關(guān)重要[3-4]。近年來(lái),免疫治療成為繼手術(shù)、放療、化療和靶向治療之后的一種新型腫瘤治療方法,其通過(guò)引導(dǎo)患者自身免疫系統(tǒng),激活抗腫瘤免疫反應(yīng),阻止腫瘤免疫逃逸,達(dá)到控制和殺傷腫瘤細(xì)胞的目的[5]。針對(duì)腫瘤治療的免疫治療包括免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療、腫瘤疫苗、溶瘤病毒等[6]。隨著免疫治療的迅速發(fā)展,溶瘤病毒作為一種新的免疫治療手段,已顯現(xiàn)出較好的治療效果,成為了肝癌治療的研究熱點(diǎn)之一[7]。本文就溶瘤病毒的作用機(jī)制及其在肝癌治療中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    1 溶瘤病毒的定義及其抗腫瘤作用機(jī)制

    溶瘤病毒是具有自我增殖能力的一類特異性腫瘤殺傷型病毒,其能夠在腫瘤細(xì)胞內(nèi)自我復(fù)制并造成腫瘤細(xì)胞裂解,同時(shí)不影響正常細(xì)胞與組織。

    溶瘤病毒的作用機(jī)制主要有兩類:第一類為病毒直接介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用,溶瘤病毒可特異性感染腫瘤部位并自我增殖,在抑制腫瘤生長(zhǎng)的同時(shí)擴(kuò)增大量子代病毒裂解腫瘤細(xì)胞,從而直接殺傷腫瘤細(xì)胞。第二類為激活免疫系統(tǒng),通過(guò)改變腫瘤微環(huán)境,增強(qiáng)腫瘤微環(huán)境的免疫原性,或釋放腫瘤相關(guān)抗原或炎癥因子等多種途徑,誘導(dǎo)自身免疫系統(tǒng)針對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷,解除腫瘤部位的免疫抑制狀態(tài)[8-9]。此外,溶瘤病毒也可以感染腫瘤部位血管,破壞腫瘤血管,抑制腫瘤獲取營(yíng)養(yǎng),從而殺死腫瘤細(xì)胞[10]。

    2 溶瘤病毒治療肝癌的研究進(jìn)展

    溶瘤病毒具有直接裂解腫瘤細(xì)胞、誘發(fā)并增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤的特異性免疫應(yīng)答、增強(qiáng)其他抗腫瘤藥物效果等多種作用,但不影響正常細(xì)胞生長(zhǎng),其特異性強(qiáng)、不良反應(yīng)小,因此通過(guò)基因修飾或改造的溶瘤病毒在肝癌治療領(lǐng)域備受關(guān)注。目前用于肝癌治療的溶瘤病毒主要有腺病毒、單純皰疹病毒(herpes simplex virus,HSV)等[11]。

    2.1 溶瘤腺病毒

    目前全球已上市兩款腺病毒抗腫瘤藥物,且有20 多種腺病毒相關(guān)藥物處于臨床試驗(yàn)階段。腺病毒的主鏈可進(jìn)行靈活的基因修飾,由于其高度可定制性,腺病毒成為了最重要的溶瘤病毒之一,在腫瘤治療中常用的腺病毒為致病力弱的人血清2型或5 型腺病毒[12]。

    ONYX-015 是一種5 型腺病毒,刪除了E1B-55KD 基因,使其能在抑癌基因p53 缺失細(xì)胞中優(yōu)先復(fù)制[13]。在其Ⅱ期臨床試驗(yàn)中,19 例肝膽惡性腫瘤患者接受了病灶內(nèi)ONYX-015 治療,ONYX-015病灶內(nèi)注射治療肝膽腫瘤患者安全且耐受性良好,部分患者有抗腫瘤作用證據(jù)。重組人5 型腺病毒H101 與ONYX-015 非常相似[14],但在其E3 基因中有一個(gè)額外的缺失,刪除了E1B-55KD 和E3 部分基因片段,使其在精準(zhǔn)溶瘤的同時(shí)實(shí)現(xiàn)全身免疫,是全球首個(gè)上市的溶瘤腺病毒抗腫瘤藥物。重組人5 型腺病毒H101 可選擇性感染p53 功能缺失的腫瘤細(xì)胞,而正常細(xì)胞不受影響,在一定劑量范圍內(nèi)對(duì)p53 功能缺失的肝癌細(xì)胞具有抗腫瘤活性。體外研究表明,重組人5 型腺病毒H101 對(duì)HepG2細(xì)胞有顯著抑制增殖作用。在不能切除的肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者中,經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈栓塞化療(transcatheter arterial chemoembolization,TACE)聯(lián)合重組人5 型腺病毒H101 治療與單獨(dú)采用TACE 治療相比,改善了總生存率、無(wú)進(jìn)展生存期和完全緩解率。臨床治療中顯示,重組人5 型腺病毒H101 聯(lián)合TACE 治療可使腫瘤降期,從而達(dá)到手術(shù)切除的目的[15]。針對(duì)TACE 治療后部分耐缺氧及化療耐藥的腫瘤細(xì)胞,為預(yù)防HCC復(fù)發(fā),Zhang 等[16]構(gòu)建了一種缺氧復(fù)制型溶瘤腺病毒,克服栓塞后缺氧的腫瘤微環(huán)境,可特異性地靶向存活的肝癌細(xì)胞。

    2.2 HSV

    HSV 是嗜神經(jīng)性的雙鏈DNA 包膜病毒,可分為Ⅰ型HSV(HSV-1)和Ⅱ型HSV(HSV-2)兩種血清型。HSV-1 具有宿主范圍廣泛、能夠攜帶多種外源DNA 等優(yōu)勢(shì),因此目前處于臨床試驗(yàn)的溶瘤HSV 大部分由HSV-1 改造而來(lái)。

    在美國(guó)獲批的第二代溶瘤HSV-1 T-VEC[17]便是由HSV-1 改造而來(lái)的,敲除了c34.5 和a47 基因后將人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因插入缺失的c34.5 位點(diǎn)。一項(xiàng)T-VEC 與帕博利珠單抗(pembrolizumab)的Ⅰb/Ⅱ期臨床試驗(yàn)?zāi)壳罢谶M(jìn)行中,Ⅰb 期主要研究T-VEC 單藥肝內(nèi)注射治療HCC 以及T-VEC 與帕博利珠單抗全身靜脈給藥聯(lián)合治療肝轉(zhuǎn)移的安全性,Ⅱ期主要研究T-VEC 與帕博利珠單抗聯(lián)合給藥治療晚期實(shí)體瘤的安全性及有效性(NCT02509507)。第三代溶瘤HSV-1 T-01[18]在第二代溶瘤HSV 的基礎(chǔ)上繼續(xù)改進(jìn),刪除了病毒蛋白感染細(xì)胞多肽6(infected cell polypeptides 6,ICP6),由β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)基因取代ICP6 基因,因此也比兩個(gè)突變的病毒(如T-VEC)更安全。T-01 可抑制人肝癌細(xì)胞系和肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞系腫瘤的生長(zhǎng),結(jié)果表明第三代溶瘤HSV-1 可作為HCC 患者的新型治療方法?;谶@些進(jìn)展,設(shè)計(jì)了一種基于HSV-1 的溶瘤載體Ld0-GFP[19],該載體來(lái)源于溶瘤ICP0 缺失病毒(d0-GFP),具有融合表型,是一種針對(duì)HCC 以及其他類型腫瘤細(xì)胞的新型殺手。與d0-GFP 相比,Ld0-GFP 在體內(nèi)外均表現(xiàn)出優(yōu)越的腫瘤細(xì)胞殺傷能力,靶向廣譜HCC 細(xì)胞,具有更好的安全性。

    2.3 溶瘤牛痘病毒

    Pexa-Vec(JX-594)是一種具備復(fù)制能力、轉(zhuǎn)基因表達(dá)的免疫治療性溶瘤牛痘病毒,可破壞病毒胸苷激酶基因,并表達(dá)人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子和β-半乳糖苷酶基因[20]。Ⅰ期臨床試驗(yàn)表明,JX-594 治療原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌具有良好的耐受性。在JX-594 復(fù)制、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)表達(dá)和全身播散的背景下,其安全性可接受,并對(duì)幾種難治性腫瘤具有抗腫瘤作用[21]。在隨機(jī)的Ⅱb 期臨床試驗(yàn)中,研究索拉非尼治療失敗后接受JX-594 治療的療效和安全性。研究存在顯著的局限性,接受JX-594 治療的患者總生存率沒有改善。然而,研究也取得了一些成果,通過(guò)β-半乳糖苷酶的測(cè)量確認(rèn)了病毒復(fù)制,并通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)了T 細(xì)胞對(duì)腫瘤特異性抗原[如甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、黑色素瘤相關(guān)抗原(melanoma antigen gene,MAGE)-A1/A3/A4]生存素的應(yīng)答[22]。PHOCUS 是一項(xiàng)Ⅲ期臨床試驗(yàn)(NCT02562755),對(duì)比研究了在既往未接受過(guò)全身治療的晚期HCC 患者中,采用Pexa-Vec 加索拉非尼聯(lián)合用藥和索拉非尼單藥治療的療效,但在進(jìn)行中期分析后,結(jié)果顯示臨床試驗(yàn)不太可能達(dá)到主要終點(diǎn),因此終止了該臨床試驗(yàn)[23]。

    3 溶瘤病毒聯(lián)合其他治療手段治療肝癌的研究進(jìn)展

    盡管一些溶瘤病毒治療腫瘤的臨床前研究得到極大的關(guān)注,但在臨床試驗(yàn)中,溶瘤病毒的治療效果往往達(dá)不到基于臨床前模型的預(yù)期療效,但與其他治療手段聯(lián)用時(shí)表現(xiàn)出了很強(qiáng)的應(yīng)用潛力,因此通過(guò)其他治療手段與溶瘤病毒聯(lián)合使用或許可能是優(yōu)化其殺傷腫瘤細(xì)胞作用的有效策略。

    3.1 溶瘤病毒聯(lián)合化療藥物治療肝癌

    Xiao 等[24]在之前構(gòu)建的重組腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD(CD55-TMn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CD55-TMn 與多柔比星聯(lián)合使用可以通過(guò)協(xié)同作用增強(qiáng)CD55-TMn 在體外和體內(nèi)的抗腫瘤作用。一項(xiàng)臨床研究也顯示,對(duì)于晚期肝癌患者,在化療基礎(chǔ)上聯(lián)合H101 瘤內(nèi)注射可提高客觀有效率和生存率,且耐受性良好[25]。

    3.2 溶瘤病毒聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療肝癌

    治療腫瘤的方法之一是使用針對(duì)免疫檢查點(diǎn)蛋白的抑制劑,如程序性死亡受體1(programmed cell death 1,PDCD1,也稱PD-1)和細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte associated protein 4,CTLA4)。

    王立朋等[26]將PD-1 抗體的重鏈和輕鏈插入流感病毒PR8 的聚合酶堿性蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)基因片段和聚合酶酸性蛋白(polymerase acid protein,PA)基因片段中得到重組流感病毒株rFlu-aPD1,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)顯示具有良好的靶向殺傷肝癌細(xì)胞的效果。在另一項(xiàng)研究中,將CTLA4 插入流感病毒PR8 中得到rFlu-CTLA4,在皮下小鼠肝癌模型中,與注射PR8 病毒相比,瘤內(nèi)注射rFlu-CTLA4 可抑制腫瘤的生長(zhǎng),延長(zhǎng)了小鼠的總生存期[27]。這些結(jié)果激發(fā)了進(jìn)一步探索這種溶瘤病毒聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑的潛在用途。一項(xiàng)關(guān)于重組人5 型腺病毒和PD-1 抗體聯(lián)合治療的研究結(jié)果顯示,2 例患者在經(jīng)射頻消融預(yù)處理后聯(lián)合重組人5型腺病毒和PD-1治療獲得了完全緩解,是治療晚期HCC 的有效方法[28]。一項(xiàng)T-VEC 與帕博利珠單抗的Ⅰb 期臨床試驗(yàn)結(jié)果也顯示,肝內(nèi)注射T-VEC 聯(lián)合靜脈注射帕博利珠單抗治療肝癌或肝轉(zhuǎn)移患者是安全可行的[29],值得進(jìn)一步研究。

    3.3 溶瘤病毒聯(lián)合靶向藥物治療肝癌

    索拉非尼是一種口服多靶點(diǎn)多激酶抑制劑,具有雙重抗腫瘤作用,主要用于治療晚期肝癌以及晚期腎癌,但其單用療效有限且不良反應(yīng)發(fā)生率高。李璐璐等[30]體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),索拉非尼聯(lián)合重組人5 型腺病毒注射液H101 對(duì)HepG2 細(xì)胞的增殖抑制作用明顯優(yōu)于單用索拉非尼,且在一定濃度范圍內(nèi)兩藥聯(lián)用表現(xiàn)出協(xié)同作用。莊建發(fā)等[31]也對(duì)索拉非尼聯(lián)合重組人5 型腺病毒H101 用藥進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩藥聯(lián)用抑制HepG2 細(xì)胞增殖的主要機(jī)制為對(duì)RAF/絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MEK)/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路起到阻斷作用,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,并有效抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞增殖。VSVΔ51 是水皰性口炎病毒的新型突變體,一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),具有DNA-PK 抑制能力的小分子藥物M3814 可以顯著提高VSVΔ51 的溶瘤活性,在外周實(shí)體瘤模型中取得了強(qiáng)大的抗腫瘤效果[32]。這種增效作用是通過(guò)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激實(shí)現(xiàn)的,該研究或許可以為肝癌的治療提供一種新的思路。

    3.4 溶瘤病毒協(xié)同過(guò)繼性細(xì)胞療法(adoptive cell therapy,ACT)治療肝癌

    ACT是一種將自體或異體具有免疫活性的細(xì)胞在體外進(jìn)行擴(kuò)增后再輸至患者體內(nèi)的治療方法[33],從而達(dá)到抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine induced killer cell,CIK)體外增殖能力強(qiáng),安全性高,自身具有腫瘤殺傷能力,又不具備抗原呈遞能力。溶瘤病毒在治療實(shí)體瘤時(shí)采用靜脈注射的給藥方式往往會(huì)導(dǎo)致病毒被免疫系統(tǒng)清除,因此,應(yīng)用CIK 細(xì)胞作為運(yùn)載溶瘤病毒的載體,可以攜帶溶瘤病毒,高效感染腫瘤細(xì)胞,從而發(fā)揮CIK 細(xì)胞和病毒的聯(lián)合殺瘤作用。有研究表明,構(gòu)建攜帶抗p21 Ras scFv 的重組溶瘤腺病毒KGHV500,并利用CIK 細(xì)胞遞送KGHV500,其抗腫瘤療效遠(yuǎn)優(yōu)于單獨(dú)使用CIK 細(xì)胞或KGHV500,開發(fā)了一種治療RAS 驅(qū)動(dòng)的肝癌的新策略[34]。

    4 小結(jié)及展望

    溶瘤病毒具有在腫瘤細(xì)胞中選擇性復(fù)制并裂解腫瘤細(xì)胞的獨(dú)特能力,還能激活自身免疫系統(tǒng),間接誘導(dǎo)旁觀者效應(yīng)(包括破壞腫瘤血管)并增強(qiáng)腫瘤免疫治療。近年來(lái),作為一種有潛力的抗腫瘤藥物,溶瘤病毒的研究取得了重要進(jìn)展,但溶瘤病毒的應(yīng)用仍存在一定的局限性。溶瘤病毒進(jìn)入機(jī)體后易被清除,從而導(dǎo)致靶向腫瘤部位的抑癌病毒量不足,難以發(fā)揮出理想的抑癌作用;利用載體裝載病毒雖能提高溶瘤病毒的靶向性,但所用載體的安全性及有效性也需進(jìn)一步研究;同時(shí)溶瘤病毒進(jìn)入機(jī)體后,會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答,出現(xiàn)諸如發(fā)熱、流感樣癥狀等常見不良反應(yīng)。因此,阻礙溶瘤病毒療法發(fā)展的主要因素是腫瘤微環(huán)境中的系統(tǒng)和物理屏障。針對(duì)溶瘤病毒療法的上述局限性及不良反應(yīng),如下問(wèn)題亟須進(jìn)一步研究解決:①降低病毒毒性,提高安全性,確保病毒能夠在不感染健康細(xì)胞的情況下最大限度地在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制并裂解腫瘤細(xì)胞,盡量減少不良反應(yīng)。②提高溶瘤病毒靶向腫瘤細(xì)胞的能力,構(gòu)建安全有效的載體平臺(tái),防止病毒被人體強(qiáng)大的免疫系統(tǒng)消滅,以提高治療效果。③溶瘤病毒注射的劑量較大,溶瘤病毒產(chǎn)品目前最大的技術(shù)難點(diǎn)在于如何大規(guī)模制備以實(shí)現(xiàn)批量生產(chǎn)應(yīng)用。

    綜上所述,由于溶瘤病毒的獨(dú)特作用機(jī)制,溶瘤病毒在大量的臨床前研究中展現(xiàn)出了抗腫瘤的顯著療效及安全性,具有良好的臨床應(yīng)用前景。但是由于肝癌等實(shí)體瘤生物學(xué)特性更為復(fù)雜,臨床試驗(yàn)中溶瘤病毒單藥治療肝癌的研究仍未取得突破性進(jìn)展。溶瘤病毒聯(lián)合其他治療手段治療肝癌具有良好的發(fā)展前景,已有臨床試驗(yàn)開始對(duì)聯(lián)合治療手段展開探索,且取得了不錯(cuò)的結(jié)果,但目前仍未大范圍應(yīng)用于臨床,因此需要更多、更大樣本量數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證。

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