三勒漿安全性評(píng)價(jià)及功能作用研究

莫太剛 樊三虎 鄭有德 陳小紅 孟倫秀 駱學(xué)慶 張立實(shí) 黃 輝 張定堃

(1 成都三勒漿藥業(yè)集團(tuán)四川華美制藥有限公司,成都,610045; 2 乳品營(yíng)養(yǎng)與功能四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,成都,610023; 3 成都三勒漿藥業(yè)集團(tuán)-成都中醫(yī)藥大學(xué)產(chǎn)學(xué)研聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室,成都,610045; 4 新控國(guó)際健康管理有限公司,成都,610045；5 四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院,成都,610044; 6 成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,成都,611137)

三勒漿源于李肇《唐國(guó)史補(bǔ)》“三勒漿……法出波斯，三勒者謂庵摩勒、訶梨勒、毗梨勒”，唐代時(shí)從絲綢之路傳入我國(guó),成為當(dāng)時(shí)的宮廷飲品并延續(xù)至今，由使君子科植物訶梨勒(訶子TerminaliachebulaRetz.)和毗梨勒[毛訶子Terminaliabellirica(Gaertn.)Roxb.],與大戟科植物庵摩勒(余甘子PhyllanthusemblicaL.)3種植物果實(shí)制作而成[1-2]。“三勒”也稱“三果”，3種藥材被奉為藏藥之王，藏藥經(jīng)典《晶珠本草》和《中國(guó)藏藥》《中華人民共和國(guó)藥典》中均有收錄[3]。在印度阿育吠陀傳統(tǒng)醫(yī)藥文化中,三果(Triphala)是最著名的常用藥物之一,也是日常食用的果品和咀嚼料[4]。三勒漿牌三勒漿飲品(以下簡(jiǎn)稱“三勒漿”)是在此基礎(chǔ)上輔以L-精氨酸、L-天門冬氨酸、蜂蜜等組成的保健食品,其中所含的多酚類成分可清除人體內(nèi)的自由基,從而減輕自由基對(duì)人體的損傷,使其具有良好的調(diào)節(jié)免疫及抗疲勞等活性[5-8]。

本研究依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》及《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》[9-10],開展口服急性毒性、30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、埃姆斯(Ames)實(shí)驗(yàn)、小鼠微核實(shí)驗(yàn)、小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)研究[11]，以及抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)和耐缺氧的功能作用[12-14],為三勒漿作為保健食品的安全性與功效學(xué)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

1.1.1.1 經(jīng)口急性毒性動(dòng)物 2周齡,昆明種小鼠(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第85號(hào))，體質(zhì)量(20±2)g，40只，雌雄各半;6周齡，SD大鼠(合格證號(hào):川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第92號(hào))，體質(zhì)量(200±20)g，40只，雌雄各半，均由四川省抗菌素工業(yè)研究所提供。

1.1.1.2 30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 6周齡，SD大鼠(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第92號(hào))，體質(zhì)量90～130 g，80只，雌雄各半，由四川省抗菌素工業(yè)研究所提供。

1.1.1.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡，雄性昆明種小鼠(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第85號(hào))，體質(zhì)量25～30 g，50只。

1.1.1.4 小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡，雄性昆明種小鼠(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第85號(hào))，體質(zhì)量25～30 g，雌雄各半，25只。

1.1.1.5 抗疲勞功能評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2周齡，成年雄性昆明小鼠(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第98-6號(hào))，200只，由原衛(wèi)生部生物制品研究所提供。

1.1.1.6 免疫調(diào)節(jié)功能實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2周齡，雌性BALB/C小鼠(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第64號(hào))，體質(zhì)量(20±2)g，250只，雌雄各半，由華西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.1.7 耐缺氧功能評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2周齡，昆明種小鼠(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第67號(hào))，體質(zhì)量(20±2)g，160只，由四川省抗菌素工業(yè)研究所提供。

1.1.1.8 飼養(yǎng)環(huán)境及條件 以上清潔級(jí)動(dòng)物均常規(guī)飼養(yǎng)于潔凈動(dòng)物房(合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管81號(hào))，并提供動(dòng)物全價(jià)基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)飼料，動(dòng)物自由攝食和飲水。

1.1.2 樣品 三勒漿樣品由四川華美制藥有限公司提供(批號(hào):9904009)。

1.1.3 試劑與儀器 絲裂霉素C(MMC，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):19980706)、2-胺基芴(2-AF,上海皓鴻生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào):19980523)，TA97、TA98、TA100、TA102：(美國(guó)分子毒理有限公司，批號(hào)：19981103)、環(huán)磷酰胺(CP,上海卓因生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，批號(hào):19981101)、2,4,7-三硝基-9-芴酮(TNFone,上海皓鴻生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為19971208、19980318)、疊氮化鈉(科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)分別為19980325)、動(dòng)物肝細(xì)胞S-9混合液(無(wú)錫欣潤(rùn)生物科技有限公司，批號(hào):19981106)、乙醚(成都科隆化學(xué)試劑廠，批號(hào):19980612)、鈉石灰,凡士林,亞硝酸鈉(成都科隆化學(xué)試劑廠，批號(hào)分別為19980919、19980821、1998052)、綿羊紅細(xì)胞(Sheep Red Blood Cel,SRBC)采自健康綿羊頸靜脈、雞培養(yǎng)紅細(xì)胞(Cultured Red Blood Cell,cRBC)采自健康公雞心臟血。希森美康血液分析儀(上海愷梵實(shí)業(yè)有限公司,型號(hào):XT-2000i)；電子秤(上海大和衡器常廠,型號(hào):ACS-3)；切片機(jī)(賽默飛公司，美國(guó)，型號(hào):HM325)、自動(dòng)組織包埋機(jī)(江蘇常州中威電子儀器廠，型號(hào)：BMJ-Ⅲ)、病理組織漂烘儀[普瑞斯星(常州)醫(yī)療器械有限公司,型號(hào)：PHY-Ⅲ型]；Nikon顯微鏡(上海衡浩儀器有限公司,型號(hào):eclipse80i)；酶標(biāo)分析儀(上海第三分析儀器廠,型號(hào):511)。

1.2 方法

1.2.1 安全性實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)方法 霍恩法(Horn)小鼠和SD大鼠均按4.64、10.0、21.5 mL/kg系列劑量,給藥1次，灌胃后連續(xù)觀察2周。

1.2.1.2 30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法 斷乳SD大鼠,依據(jù)體質(zhì)量按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組(下同),每組20只,雌雄各半。低劑量組、中劑量組、高劑量組每日分別按2.5、5.0、10 mL/kg灌胃給三勒漿,共30 d。另設(shè)一空白對(duì)照組(劑量為0)。測(cè)定實(shí)驗(yàn)期內(nèi)動(dòng)物的每周飼料給料量和剩余量、體質(zhì)量，計(jì)算攝食量、平均增重和食物利用率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,進(jìn)行血液學(xué)、血清生化及組織病理學(xué)的檢查和臟器系數(shù)(器官對(duì)體質(zhì)量的相對(duì)重量)測(cè)定。

1.2.1.3 Ames實(shí)驗(yàn)方法 按《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》以TA97、TA98、TA100和TA102實(shí)驗(yàn)菌株進(jìn)行加與不加大鼠肝S9的標(biāo)準(zhǔn)平板滲入法。實(shí)驗(yàn)樣品設(shè)5個(gè)劑量:12.5、25.0、50、100、200 μL/皿。每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)陰性(蒸餾水100 μL/皿)和陽(yáng)性對(duì)照。不加S9的陽(yáng)性對(duì)照:TA97和TA98用TNFone,TA100用NaN3,TA102用MMC;加S9實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照均用2-AF。每個(gè)實(shí)驗(yàn)劑量作3個(gè)平行皿,重復(fù)實(shí)驗(yàn)2次。

1.2.1.4 小鼠微核實(shí)驗(yàn)方法 昆明種小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組,每組10只,雌雄各半。三勒漿2.5 mL/kg組、5.0 mL/kg組和10.0 mL/kg組;陰性對(duì)照組蒸餾水灌胃;陽(yáng)性對(duì)照組,給環(huán)磷酰胺40 mg/kg。分別于第0小時(shí)和第24小時(shí)2次經(jīng)口給藥,第30小時(shí)處死小鼠,取胸骨骨髓制片,固定后染色，鏡下觀察1 000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，記錄帶微核的細(xì)胞數(shù)。

1.2.1.5 小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)方法 雄性昆明種小鼠每組5只,共5組。3組三勒漿劑量:2.5、5.0和10.0 mL/kg;陰性對(duì)照組,蒸餾水灌胃;陽(yáng)性對(duì)照組,給環(huán)磷酰胺40 mg/kg。灌胃給三勒漿5 d,于首次灌胃后第35天處死動(dòng)物,取雙側(cè)附睪作精子涂片，固定后染色,鏡下觀察精子形態(tài)。每支動(dòng)物觀察1 000精子,記錄形態(tài)異常的精子數(shù)。

1.2.2 抗疲勞功能實(shí)驗(yàn)方法 成年雄性昆明種小鼠,按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組,即蒸餾水對(duì)照組和三勒漿2.5 mL/kg組、三勒漿5.0 mL/kg組、三勒漿10.0 mL/kg組(分別相當(dāng)于推薦人體飲用量的5、10、20倍)。各組均按2%體積每天灌胃,連續(xù)30 d。于末次灌胃30 min后,分別進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)(小鼠尾部負(fù)重5%鐵絲)、血清尿素氮、肝糖原、血乳酸含量測(cè)定。

1.2.3 免疫調(diào)節(jié)功能實(shí)驗(yàn)方法

1.2.3.1 動(dòng)物分組與給藥 雌性小鼠,基礎(chǔ)飼料喂飼3 d后,按體質(zhì)量隨機(jī)分為三勒漿5.0 mL/kg組、三勒漿10.0 mL/kg組和三勒漿15.0 mL/kg組(分別相當(dāng)于廠方推薦的成人日食用量的10、20和30倍及對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以相應(yīng)劑量的三勒漿灌胃,對(duì)照組以蒸餾水灌胃,1次/d,連續(xù)灌胃25 d。

1.2.3.2 遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(足趾增厚法) 連續(xù)灌胃20 d后,用2%(v/v)SRBC腹腔免疫,每只0.2 mL,免疫4 d后,測(cè)量左后足趾部厚度,測(cè)定3次取平均值;然后在測(cè)量部位皮下注射20%(v/v)SRBC,每只20 μL注射后于24 h測(cè)量左后足趾部厚度,測(cè)定3次取平均值。計(jì)算攻擊前后足趾厚度的差值,以差值表示小鼠的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的程度,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.2.3.3 血清溶血素測(cè)定(血凝法) 連續(xù)灌胃20 d,每只小鼠腹腔注射2% SRBC 0.2 mL免疫,繼續(xù)灌胃4 d后,摘除眼球取血于離心管內(nèi),放置1 h,剝離,2 000 r/min,離心半徑16 cm，離心10 min,收集血清,用生理鹽水將血清進(jìn)行倍比稀釋,每份稀釋14孔,將不同稀釋度的血清置于血凝板中,每孔100 μL,再加入0.5% SRBC懸液100 μL,混勻,置濕盒37 ℃ 3 h,觀察結(jié)果,記錄每孔的凝集程度,按公式計(jì)算抗體積數(shù)(抗體積數(shù)=S1+2S2+3S3+……nSn),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.2.3.4 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法) 連續(xù)灌胃25 d后,于每鼠腹腔注射20%雞紅細(xì)胞懸液1 mL,30 min后,頸椎脫臼處死,將其固定在鼠板上,正中剪開腹壁皮膚,經(jīng)腹腔注入生理鹽水2 mL,轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1 min,吸出腹腔洗液1 mL,平均滴于2張載玻片上,置濕盒37 ℃ 30 min,取出在生理鹽水中漂洗,晾干,固定,4%吉姆薩染色3 min,蒸餾水漂洗晾干,鏡檢。按公式計(jì)算吞噬百分率及吞噬指數(shù),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.2.3.5 自然殺傷細(xì)胞活性測(cè)定 連續(xù)灌胃25 d后,頸椎脫臼處死動(dòng)物,取出脾臟,撕碎,過(guò)200目篩網(wǎng)后,用漢克平衡鹽溶液洗3次,用完全1640培養(yǎng)液配成5×106個(gè)/mL細(xì)胞懸液。將各只鼠的細(xì)胞懸液取300 μL分置于96孔培養(yǎng)板中,每孔加靶細(xì)胞(YAC-1細(xì)胞,1×105個(gè)/mL)100 μL,同時(shí)做靶細(xì)胞自然釋放孔(靶細(xì)胞100 μL+培養(yǎng)液100 μL)及最大釋放孔(靶細(xì)胞100 μL+1% NP-40 100 μL)各3孔,37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)4 h,取出1 500 r/min,離心半徑16 cm,離心5 min。將各孔上清液100 μL置于另一培養(yǎng)板中,每孔再加入100 μL基質(zhì)液,10 min后加入1 mol/L HCl 30 μL終止反應(yīng),在490 nm處測(cè)定吸光度值,按公式計(jì)算自然殺傷細(xì)胞活性,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.2.4 耐缺氧功能實(shí)驗(yàn)方法

1.2.4.1 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 mL/kg組、10 mL/kg組、15 mL/kg組(相當(dāng)于人體推薦食用量的10、20、30倍)及對(duì)照組。各劑量組每日經(jīng)口灌胃相應(yīng)濃度的三勒漿,對(duì)照組灌胃等量蒸餾水,連續(xù)30 d。末次灌胃后1 h,將各組小鼠分別放入盛有15 g鈉石灰的250 mL磨口廣口瓶?jī)?nèi)(每瓶1只),用涂有適量凡士林的瓶塞蓋緊瓶口,立即計(jì)時(shí),以呼吸停止為指標(biāo),觀察記錄小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間。

1.2.4.2 急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn) 小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為上述4組。各劑量小鼠每日經(jīng)口灌胃相應(yīng)濃度的三勒漿,對(duì)照組灌胃等量蒸餾水,連續(xù)30 d。末次灌胃后1 h,各組小鼠在乙醚淺麻醉的情況下自頸部逐只斷頭,立即計(jì)時(shí),觀察記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時(shí)間。

1.2.4.3 亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn) 小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為上述4組。各劑量小鼠每日經(jīng)口灌胃相應(yīng)濃度的三勒漿,對(duì)照組灌胃等量蒸餾水,連續(xù)30 d。末次灌胃后1 h,各組小鼠均腹腔注射亞硝酸鈉220 mg/kg立即計(jì)時(shí),觀察記錄小鼠死亡的時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 安全性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 口服急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在整個(gè)觀察期內(nèi),無(wú)論小鼠或大鼠,各三勒漿組均無(wú)動(dòng)物死亡,三勒漿對(duì)小鼠和大鼠的經(jīng)口半數(shù)致死劑量均大于21.5 mL/kg。

2.1.2 30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)過(guò)30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)后,各組動(dòng)物平均增重和食物利用率測(cè)定測(cè)定結(jié)果:三勒漿給藥各組平均增重和食物利用率與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。血液學(xué)指標(biāo)白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白和血小板含量三勒漿給藥各組與對(duì)照組比較均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表2。血糖、膽固醇、三酰甘油和肝腎功能實(shí)驗(yàn)等所檢測(cè)的10項(xiàng)血清生化指標(biāo)，三勒漿給藥各組測(cè)定值與對(duì)照組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表3。臟器系數(shù)結(jié)果：與對(duì)照組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。大體解剖結(jié)果,三勒漿給藥各組動(dòng)物未見異常。對(duì)心、肝、腎、胃、腸等器官的組織病理學(xué)鏡檢,三勒漿給藥各組也未見任何具有病理學(xué)意義的改變。見表4。

表1 三勒漿灌胃30 d對(duì)大鼠平均增重和食物利用率的影響

表2 三勒漿灌胃30 d對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

表3 三勒漿灌胃30 d對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響

表4 三勒漿灌胃30 d對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響

2.1.3 Ames實(shí)驗(yàn)結(jié)果 無(wú)論加與不加S9混合液的實(shí)驗(yàn),陽(yáng)性對(duì)照組皿的平均回變菌落數(shù)(+S9,TA102除外)均大于陰性對(duì)照組(劑量0)的2倍;而實(shí)驗(yàn)樣品各劑量組的平均回變菌落數(shù)與陰性對(duì)照組相近。見表5。

表5 三勒漿每皿回變菌落數(shù)個(gè)/皿)

2.1.4 小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果 小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果。陽(yáng)性對(duì)照組的平均微核出現(xiàn)率明顯高于陰性對(duì)照組(P<0.01),三勒漿各劑量組的微核率與陰性對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表6。

表6 三勒漿小鼠微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.5 小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果 小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果：陽(yáng)性對(duì)照組的平均精子畸形率明顯高于陰性對(duì)照組(P<0.01),而三勒漿各劑量組與陰性對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表7。

表7 三勒漿精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.2 抗疲勞作用結(jié)果 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、血清尿素氮、肝糖原與血乳酸含量實(shí)驗(yàn)結(jié)果：對(duì)照組小鼠的平均游泳時(shí)間僅為(6.70±2.26)min,灌胃三勒漿30 d后,各劑量組均能顯著延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間(P<0.01),且三勒漿10.0 mL/kg組效果最優(yōu),平均負(fù)重游泳時(shí)間接近0.5 h,約為對(duì)照組的5倍。血清生化指標(biāo)表明,服用三勒漿后,各劑量給藥組小鼠血清尿素氮含量顯著低于對(duì)照組,肝糖原含量明顯高于對(duì)照組,血乳酸含量顯著低于對(duì)照組。見表8。

表8 三勒漿對(duì)抗疲勞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 免疫調(diào)節(jié)作用結(jié)果 三勒漿對(duì)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的影響結(jié)果、對(duì)小鼠血清溶血素的影響結(jié)果、對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響結(jié)果、對(duì)小鼠自然殺傷細(xì)胞活性的影響結(jié)果：在小鼠遲發(fā)變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組比較,三勒漿10.0 mL/kg組和三勒漿15.0 mL/kg組小鼠的足趾腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在血清溶血素實(shí)驗(yàn)中,各劑量組與對(duì)照組比較,其抗體積數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。在小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,三勒漿10.0 mL/kg組和三勒漿15.0 mL/kg組與對(duì)照組比較,其吞噬百分率及吞噬指數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在自然殺傷細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)中,各劑量組與對(duì)照組比較,其自然殺傷細(xì)胞活性差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表9。

表9 三勒漿對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)的影響

2.4 耐缺氧作用結(jié)果 三勒漿對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響:給予小鼠三勒漿30 d后,各三勒漿劑量組小鼠的常壓耐缺氧時(shí)間均有增加趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但三勒漿對(duì)小鼠急性腦缺血性缺氧時(shí)間有明顯影響,3個(gè)劑量小鼠的急性腦缺血性缺氧時(shí)間與對(duì)照組比較均有顯著延長(zhǎng)(P<0.05或P<0.01)。見表10。三勒漿對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響結(jié)果:給予三勒漿30 d后,三勒漿10.0 mL/kg組、三勒漿15.0 mL/kg組小鼠的亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間與對(duì)照組比較顯著延長(zhǎng)(P<0.05或P<0.01)。見表11。

表10 三勒漿對(duì)小鼠耐缺氧時(shí)間的影響

表11 三勒漿對(duì)小鼠亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的影響

3 討論

按照評(píng)價(jià)依據(jù)：三勒漿對(duì)小鼠和大鼠的經(jīng)口半數(shù)致死劑量都大于21.5 mL/kg,急性毒性屬實(shí)際無(wú)毒(級(jí));大鼠30 d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的無(wú)作用劑量大于10.0 mL/kg；3項(xiàng)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)均為陰性結(jié)果；三勒漿具有明顯的抗疲勞作用、具有免疫調(diào)節(jié)和耐缺氧作用[9-10]。

本研究證實(shí)了三勒漿具有很好的安全性和確切的抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)和耐缺氧作用,這也為傳統(tǒng)經(jīng)典名方三果湯散(Triphala)的現(xiàn)代開發(fā)以及中藥保健食品走向世界提供了科學(xué)依據(jù)[15]?；诒緦?shí)驗(yàn)研究當(dāng)時(shí)是依據(jù)首次頒布的保健食品毒理學(xué)及功能學(xué)評(píng)價(jià)程序，經(jīng)過(guò)20余年的科技進(jìn)步，保健食品注冊(cè)法規(guī)體系不斷完善和修訂[16-18]。三勒漿歷經(jīng)30余年的市場(chǎng)檢驗(yàn)，受眾易疲勞者、免疫力低下者及處于缺氧環(huán)境者，獲得良好口碑。但目前我們對(duì)疲勞的分類、疲勞與抗疲勞的機(jī)制處于探索階段，近期研究從細(xì)胞能量代謝的角度來(lái)建立疲勞的細(xì)胞模型，以解決快速篩選疲勞組分的方法，為抗疲勞功能保健食品研發(fā)提供新思路[19-20]。鑒于三勒漿中植物成分的復(fù)雜性，特別富含多酚類成分，具有廣泛活性的特點(diǎn)，尚需深入研究其特征活性成分與疲勞的相關(guān)性，為抗疲勞作用提供理論支撐。