HIV陽(yáng)性合并肛門-生殖器CA患者HPV亞型分析和復(fù)發(fā)情況研究

談 園，羅 雯，高 飛，黃 敖，羅 宏

（長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005）

人乳頭瘤病毒（Hvman Papillomavirus，HPV）是一種DNA病毒，可以感染人類皮膚和黏膜組織，特別對(duì)鱗狀上皮細(xì)胞易感，能引起尖銳濕疣（Condyloma Acumina，CA）等良性病變或亞臨床的惡性病變［1］。感染HPV的危險(xiǎn)因素包括不安全性行為、使用公共浴室和免疫抑制等［2］。HPV已經(jīng)發(fā)現(xiàn)200多個(gè)亞型，CA主要是由HPV-6/11型感染所致的肛門和外生殖器良性增生性病變，是很常見(jiàn)的性傳播疾病，免疫力低的人群易感，如人免疫缺陷病毒（HIV）陽(yáng)性患者［3，4］。CA治療后復(fù)發(fā)率高，嚴(yán)重影響患者身心健康。有研究表明［5，6］，CA 患者治療后的復(fù)發(fā)與其 HPV 亞型或者感染狀態(tài)息息相關(guān)。本研究采用熒光定量PCR技 術(shù)（fluorescence quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR） 對(duì)合并HIV感染的84例CA患者進(jìn)行HPV-DNA型別分析，并經(jīng)CO2激光或者微波手術(shù)等方式祛除疣體，隨訪6個(gè)月，對(duì)其進(jìn)行初步的復(fù)發(fā)相關(guān)性研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2019 年 4 月至 2021 年 12 月長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院皮膚科門診就診的CA患者，且HIV抗體陽(yáng)性，CD4+ ＞ 200 cells/ul，HIV 病毒載量控制良好，具有典型肛門-生殖器疣的臨床體征，醋酸白試驗(yàn)陽(yáng)性，一般身體狀況良好，能耐受CO2激光或微波手術(shù)，并知情同意該項(xiàng)研究。治療后半年內(nèi)在原發(fā)皮損部位出現(xiàn)新發(fā)疣體患者為CA復(fù)發(fā)。

1.2 標(biāo)本采集 疣體部位用碘伏消毒后，用生理鹽水浸潤(rùn)過(guò)的無(wú)菌拭子反復(fù)摩擦疣體表層數(shù)次，以獲得皮膚表皮脫落細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至裝有1ml生理鹽水的滅菌試管，標(biāo)記后-20℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 治療方法 所有患者根據(jù)疣體位置分別采用CO2激光或者微波治療，治療后隨訪六個(gè)月，前三個(gè)月每2周隨訪1次，后三個(gè)月每月隨訪1次，在隨訪中若發(fā)現(xiàn)有復(fù)發(fā)患者及時(shí)給予治療。

1.4 儀器與試劑 美國(guó)BIO-RAD公司制造的 CFX96熒光定量 PCR 儀。碩世生物科技股份有限公司生產(chǎn)的HPV核酸分型檢測(cè)試劑盒，共檢測(cè) 21種HPVDNA 。

1.5 檢測(cè)方法及型別 通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HPV亞型，本檢測(cè)試劑盒共檢測(cè)21種HPV亞型，包括高危型（含中危型）18種（16，18，26，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82，53，66），低危型三種（6，11，81 ）。

1.6 檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量保障 在檢測(cè)試劑盒中加入了內(nèi)參基因，用于監(jiān)測(cè)提取實(shí)物核酸擴(kuò)增標(biāo)本的質(zhì)量。同時(shí)要滿足內(nèi)參基因檢測(cè)的循環(huán)閾值（CT＜36.7），陽(yáng)性對(duì)照HPV21個(gè)亞型及參考基因檢測(cè)呈典型S型曲線且CT≤30，且空白對(duì)照?qǐng)D形中無(wú)典型S型曲線，方可認(rèn)為待檢測(cè)標(biāo)本合格，否則本次實(shí)驗(yàn)定性定量結(jié)果無(wú)效。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析 通過(guò)Excel表格進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和資料整理，采用SPSS19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染情況 共84例患者，HIV抗體均為陽(yáng)性，其中男性80例（占95.24%），女性4例（占4.76%），詳細(xì)情況見(jiàn)表1。

表1 84例HIV合并CA患者一般情況

2.2 HPV分型結(jié)果 由表2可見(jiàn)84例HIV陽(yáng)性CA患者標(biāo)本中，均檢出HPV，以低危11型陽(yáng)性率最高（75.00%），其次為低危6型（60.71%）、高危82型（33.33%）、高危16型（30.95%）、高危18型（27.38%）、高危58型（22.62%），高危51型（20.23%）；檢出低危型（6/11/81型）HPV陽(yáng)性82例次（97.62%），高危型HPV 陽(yáng)性78例次（92.86%）；其中低高?；旌细腥居?6例，達(dá)90.48%。HPV單一型感染5例，感染率為5.95%，雙重HPV型號(hào)感染的為4例，感染率4.76%，三重以上感染患者為75例，感染率為89.29%，見(jiàn)表3。

表2 84 例病例中各HPV亞型陽(yáng)性率

表3 84例病例HPV亞型多重感染率

2.3 復(fù)發(fā)相關(guān)因素 就診患者均為HIV感染者，總體復(fù)發(fā)率高達(dá)96.42%，其中男性復(fù)發(fā)率為98.75%，女性復(fù)發(fā)率為50.00%；肛周復(fù)發(fā)率為100%，男性尿道口復(fù)發(fā)率66.67%；就診年齡以（21～30）歲為主，有53例（63.10%），其次（31～40）歲有16例，20歲及以下有8例，40歲以上有7例，HPV陽(yáng)性率分別為19.05%、9.52%、8.33%。此外，未復(fù)發(fā)的3例病例均為單一型感染，多重感染的復(fù)發(fā)率達(dá)100%。

3 討論

性傳播疾病是一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題，可以同時(shí)促進(jìn)HPV和HIV的傳播。HPV為小分子雙鏈DNA病毒，對(duì)人類的皮膚以及黏膜具有很高的親嗜性，目前已知的HPV亞型有200多種，其中有30多種亞型可以通過(guò)性接觸傳播［7，8］。其致癌的風(fēng)險(xiǎn)程度被分為高危型和低危型，而其中有15個(gè)亞型的HPV持續(xù)感染被認(rèn)為具有致癌風(fēng)險(xiǎn)，包括 16，18型等，并與皮膚鱗狀上皮細(xì)胞癌有關(guān)，如宮頸癌；低危型HPV 包括 6，11等型號(hào)，可以導(dǎo)致肛周-生殖器疣等鱗狀上皮性增生［9，10］。HIV感染者免疫力低下，且感染者多有男男同性性行為，較HIV陰性患者更易感染HPV，而目前針對(duì)HIV陽(yáng)性合并肛周-生殖器疣患者HPV 基因型的研究甚少。

本研究的84例HIV陽(yáng)性合并CA 患者疣體部的HPV實(shí)時(shí)熒光定量PCR均檢出HPV，感染部位以男性肛門、肛管感染為主。 HPV分型方面 HPV11型是感染率最高的亞型，其次分別為 HPV6型、82型、16型及 18型。有研究表明［11，14］，HIV 感染者經(jīng)過(guò)抗病毒治療后，其他病原體包括真菌或者細(xì)菌的條件性感染概率有所下降，而HPV感染率呈上升趨勢(shì)，同時(shí)肛周及宮頸上皮癌變率升高，本研究中雖然患者治療CA時(shí)，HIV病毒載量控制良好，但其各型號(hào)感染率均明顯高于單純CA患者，究其原因，可能依然與患者合并有HIV感染，免疫力相對(duì)較差有關(guān)［15］。既往研究顯示［16］，在高危型中CA 患者HPV16/18型以及52型的感染率最高，僅次于6 /11型 ，而本研究顯示HPV82型的感染率排在HPV6/11型之后，表明其感染型號(hào)的差異可能具有一定的地域性，也可能與HIV陽(yáng)性患者對(duì)HPV82型易感有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中多重感染同樣多見(jiàn)，且三重感染以上占到89.29%，且多為高低危混合型，而在其他研究中雖然CA 患者 HPV 感染常見(jiàn)同樣為多重感染［11，12，16］，但多重感染的感染率遠(yuǎn)低于本研究人群。

本研究中，CA的總體復(fù)發(fā)率極高，提示HIV陽(yáng)性為CA復(fù)發(fā)的高風(fēng)險(xiǎn)因素，而既往研究中單純CA復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素可能也對(duì)HIV陽(yáng)性患者的復(fù)發(fā)有一定影響，比如情緒，抽煙和熬夜等因素［5，6］。多重感染的復(fù)發(fā)率達(dá)100%，而多重感染患者均合并有高危型HPV（high-risk HPV，HR-HPV）的感染，高復(fù)發(fā)率導(dǎo)致HR-HPV的持續(xù)感染，會(huì)增加感染部位上皮內(nèi)瘤變及肛門癌的風(fēng)險(xiǎn)［17，18］，提示HIV陽(yáng)性患者感染HPV后可能更易癌變，應(yīng)引起重視。此外，本研究結(jié)果顯示HIV陽(yáng)性的CA患者中肛周及肛內(nèi)的HPV感染率及復(fù)發(fā)率均極高，而其高復(fù)發(fā)率可能仍然與HIV陽(yáng)性患者的抵抗力有關(guān)，是否存在肛門黏膜易感，消化系統(tǒng)菌群刺激等其他因素，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，HIV陽(yáng)性的CA患者，感染型號(hào)多為三重以上的多重感染，且復(fù)發(fā)率更高，臨床發(fā)現(xiàn)易復(fù)發(fā)的HPV型號(hào)呈多重感染的CA患者時(shí)應(yīng)引起重視，排除HIV感染，同時(shí)為減少HPV的傳播，降低癌變風(fēng)險(xiǎn)，建議對(duì)未感染HPV的HIV感染者接種4價(jià)或者9價(jià)HPV疫苗。