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    HT患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL水平與自身抗體水平的關(guān)系

    2022-11-12 09:02:34吳?;?/span>熊萍王瑤張倩瑩趙偉文金輝茍曉琴
    分子診斷與治療雜志 2022年10期
    關(guān)鍵詞:外周血淋巴細(xì)胞抗體

    吳海花 熊萍 王瑤 張倩瑩 趙偉 文金輝 茍曉琴

    橋本甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis,HT)是一種慢性自身免疫性甲狀腺炎癥,多發(fā)于30~50 歲的女性人群[1]。該病與機(jī)體的免疫系統(tǒng)異常有關(guān),主要是由于人體血液中存在攻擊甲狀腺的自身抗體,同時(shí)還存在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的多種細(xì)胞因子和補(bǔ)體,這些成分攻擊甲狀腺細(xì)胞,導(dǎo)致機(jī)體的甲狀腺濾泡受到不同程度的炎癥破壞,影響甲狀腺激素的分泌和釋放,從而導(dǎo)致患者身體出現(xiàn)不適癥狀[2-3]。早期HT 患者通常沒有臨床不適癥狀,隨著炎癥的緩慢進(jìn)展,患者可出現(xiàn)不同程度的甲狀腺腫大、結(jié)節(jié)、甲狀腺功能減退等表現(xiàn)[4]。HT 很難治愈,目前臨床上無法針對(duì)該病進(jìn)行徹底的根除治療[5]。早期診斷、及時(shí)防控HT 十分重要。自身抗體如血清甲狀腺球蛋白抗體(Anti-thyroglobulin antibodies,ATG)、甲狀腺過氧化物酶抗體(Thyroid peroxidase antibody,ATPO)被證實(shí)是HT 發(fā)生的危險(xiǎn)因素,臨床常采取這些指標(biāo)評(píng)估HT。近年來有研究認(rèn)為,HT 患者的外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平與HT 患者的病情進(jìn)展密切相關(guān)[6]。本研究將通過直接熒光免疫標(biāo)記法檢測(cè)HT 患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平,并分析Fas/FasL 水平與自身抗體水平的關(guān)系,揭示HT 發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制,以期為臨床免疫干預(yù)治療方案的制定提供一定的參考,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2018年2月至2020年9月于成都大學(xué)附屬醫(yī)院進(jìn)行甲狀腺檢查的患者84 例,根據(jù)臨床檢查結(jié)果分為HT 組(n=44)和單純甲狀腺腫(NTG)組(n=40)。HT 組女性29 例,男性15 例;平均年齡(39.48±5.27)歲。NTG 組女性27 例,男性13 例;平均年齡(40.17±5.33)歲。另外選取同期健康體檢者45 例作為對(duì)照組,女性27 例,男性18例;平均年齡(38.76±5.13)歲。三組受試者基礎(chǔ)資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HT 組患者納入標(biāo)準(zhǔn):患者符合HT 診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],經(jīng)B 超、化驗(yàn)等檢查確診,且均為初診患者;無其他免疫系統(tǒng)疾??;資料完整。NTG 組患者納入標(biāo)準(zhǔn):患者符合NTG 診斷標(biāo)準(zhǔn)[7];患者無其他內(nèi)分泌疾病。HT組、NTG 兩組均排除以下患者:合并惡性腫瘤者;嚴(yán)重性全身感染者;嚴(yán)重性器質(zhì)性疾病或嚴(yán)重糖尿病患者。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過,受試者已簽署知情同意書。

    1.2 檢查方法

    血清ATG、ATPO、游離三碘甲狀腺原氨酸(Free Trnodothyronine,F(xiàn)T3)、游離四碘甲狀腺原氨酸(FreeTIhyroxine,F(xiàn)T4)、促甲狀腺激素(Thyroid stimulating hormone,TSH)的檢測(cè):清晨空腹靜脈抽取受試者的外周血5 mL,離心8 min(轉(zhuǎn)速3 000 r/m,離心半徑10.00 cm)后吸取上層的血清于無菌EP 管,-70℃冰箱保存待測(cè),采用SMART 6500 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及相關(guān)配套試劑(美國貝克曼,規(guī)格型號(hào)DXI800)進(jìn)行檢測(cè),5 個(gè)自身免疫指標(biāo)均采用免疫化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)。

    Fas/FasL 水平檢測(cè)方法:取100 μL 抗凝血,加入紅細(xì)胞裂解液,所得淋巴細(xì)胞分別加入5 μL抗-CD3、抗-CD95、抗-CD178 單抗,室溫孵育30 min,進(jìn)行離心、洗滌,棄上清液,用PBS 重懸細(xì)胞制成單細(xì)胞懸浮液,4℃保存待測(cè)。采用直接熒光免疫標(biāo)記法,以鼠抗人CD3-FITC/CD95-PE-Cy7/CD17-PE 三色熒光標(biāo)記單克隆抗體,根據(jù)T 淋巴細(xì)胞表面特異性標(biāo)記CD3+T 淋巴細(xì)胞的比例,以Fas%,F(xiàn)asL%表示,并用二維散點(diǎn)圖和數(shù)據(jù)形式表示,對(duì)凋亡淋巴細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料采用()表示,行t檢驗(yàn),外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平與患者自身抗體水平的關(guān)系采用Pearson相關(guān)性進(jìn)行分析,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 三組血清自身抗體水平比較

    三組血清自身抗體ATG、ATPO 水平比較:HT組>NTG 組、對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),NTG 組、對(duì)照組間ATG、ATPO 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。三組FT3、FT4、TSH 水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    表1 三組血清自身抗體水平比較(±s)Table 1 Comparison of serum autoantibody levels among the three groups(±s)

    表1 三組血清自身抗體水平比較(±s)Table 1 Comparison of serum autoantibody levels among the three groups(±s)

    組別HT 組NTG 組對(duì)照組F 值P 值n 44 40 45 ATG(mIU/L)222.15±76.95 3.24±0.34 2.38±0.13 345.198<0.001 ATPO(mIU/L)295.72±89.54 8.05±1.13 7.21±2.34 439.428<0.001 FT3(pg/mL)3.04±0.54 2.98±0.47 3.00±0.31 0.197 0.822 FT4(ng/dL)0.95±0.17 1.00±0.14 0.99±0.32 0.581 0.561 TSH(mIU/L)3.05±0.59 2.97±0.97 3.10±1.00 0.240 0.787

    2.2 三組外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平比較

    三組外周血淋巴細(xì)胞中Fas、FasL 表達(dá)陽性率比較:HT 組>NTG 組>對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    表2 三組外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平比較(±s)Table 2 Comparison of Fas/FasL in peripheral blood lymphocytes among the three groups(±s)

    表2 三組外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平比較(±s)Table 2 Comparison of Fas/FasL in peripheral blood lymphocytes among the three groups(±s)

    注:與對(duì)照比較,aP<0.05;與NTG 組比較,bP<0.05。

    組別HT 組NTG 組對(duì)照組F 值P 值n 44 40 45 Fas(%)79.32±9.13ab 57.14±8.25a 43.25±5.74 240.689<0.001 FasL(%)3.66±0.85ab 2.74±0.63a 1.51±0.47 116.008<0.001

    2.3 HT 患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平與ATPO、ATG 水平的相關(guān)分析

    Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示,HT 患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平與ATG、ATPO 表達(dá)成正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

    表3 HT 患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平與ATPO、ATG 的Pearson 相關(guān)性Table 3 Pearson correlation analysis of Fas/FasL in peripheral blood lymphocytes,ATPO and ATG in patients with HT

    3 討論

    HT 是常見的甲狀腺炎癥,不恰當(dāng)?shù)牡鈹z入以及遺傳因素是誘發(fā)HT 的重要原因。存在碘脫逸狀態(tài)的HT 患者還伴有甲亢或甲減,病理檢查可顯示甲狀腺腫大、正常甲狀腺萎縮以及間質(zhì)淋巴組織增生。近年來,因HT 合并甲狀腺癌的發(fā)病率逐漸升高,HT 也逐漸得到關(guān)注。HT 起病隱匿、發(fā)展緩慢[8],目前臨床中并無較好的預(yù)防和治療方法。進(jìn)一步了解HT 患者自身免疫狀態(tài)的變化情況,或可為臨床診治、預(yù)防提供參考。

    HT 的病因尚不明確,研究顯示其可能與機(jī)體的免疫被破壞有關(guān),對(duì)HT 患者甲狀腺的免疫應(yīng)答生理過程進(jìn)行探討或有利于其臨床診斷和治療[9]。ATG、ATPO 為常見的自身抗體,被認(rèn)為是自身免疫性甲狀腺疾病臨床診斷的重要指標(biāo)[10],可反映機(jī)體甲狀腺免疫情況[11],推測(cè)ATPO、ATG 水平與HT 病情程度相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,HT 組患者的血清ATG、ATPO 濃度高于NTG 組、對(duì)照組,與相關(guān)臨床報(bào)道一致[12]。這是因?yàn)镠T 屬于免疫性疾病之一,患者通常伴有甲狀腺抗體升高癥狀,HT 患者免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤將甲狀腺球蛋白視作敵人而產(chǎn)生自衛(wèi)行為,因此血清ATG 濃度會(huì)升高;HT 患者免疫功能紊亂,可破壞甲狀腺過氧化物酶,ATPO 作為甲狀腺自身免疫性抗體,與甲狀腺過氧化物酶結(jié)合可破壞甲狀腺,最終導(dǎo)致甲狀腺炎,因此HT 組患者的ATPO 血清濃度偏高。本研究各組FT3、FT4、TSH 水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,由此可見單純甲狀腺腫、橋本甲狀腺炎者與健康機(jī)體的基線甲狀腺功能并無顯著差異。

    Fas/FasL 是近年來研究得最為深入的有關(guān)細(xì)胞凋亡的膜表面分子。人Fas、FasL基因分別分布在10 號(hào)染色體q23、1 號(hào)染色體q23 上,長度分別為25 Kb、8 Kb 左右。當(dāng)Fas/FasL 系統(tǒng)功能發(fā)生障礙時(shí),活化的T 細(xì)胞就會(huì)堆積在體內(nèi),引起自身免疫性疾病,因此推測(cè)Fas/FasL 所介導(dǎo)的生理反應(yīng)或與免疫相關(guān)疾病發(fā)生過程有關(guān)[13-14]。Fas、FasL 分別為Ⅰ型跨膜受體蛋白、Ⅱ型跨膜蛋白,前者為TNFR/NGFR 超家族成員,廣泛表達(dá)于上皮細(xì)胞、T/B 淋巴細(xì)胞表面,是FasL 的受體;后者為TNF 超家族成員,被稱為死亡因子,可表達(dá)于T 淋巴細(xì)胞、B 細(xì)胞表面[15]。Fas 在血清中的可溶性形式即sFas,其通過和Fas 競爭性結(jié)合細(xì)胞表面FasL 定點(diǎn)以達(dá)到間接阻斷細(xì)胞凋亡的目的,血清FasL 存在免疫活性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示HT 大鼠中血清Fas、FasL 水平相比正常組顯著升高,F(xiàn)as、FasL 可通過調(diào)控自身免疫水平參與HT 發(fā)?。?6]。本研究中,HT 組患者外周血淋巴細(xì)胞Fas、FasL 表達(dá)水平均高于健康人群、NTG 患者,提示Fas/FasL 可能通過調(diào)控機(jī)體免疫參與HT 發(fā)病過程,與余欣然等[18]的研究結(jié)果相似。進(jìn)一步Pearson 相關(guān)性分析顯示,HT 患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 水平與ATG、ATPO 表達(dá)成正相關(guān),提示Fas/FasL 水平可能與自身抗體相關(guān)指標(biāo)協(xié)同參與HT 發(fā)病。

    綜上所述,HT 患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL表達(dá)水平異常升高,且與ATG、ATPO 水平相關(guān),檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞Fas/FasL 表達(dá)水平或許可為HT 診斷、治療提供重要依據(jù)。

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