復(fù)發(fā)性口腔潰瘍治療前后患兒血清上皮細(xì)胞膜結(jié)合黏液素1、CC修飾趨化因子11水平變化及對(duì)復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值

韓永付，馬鵬濤，李華龍，裴 蓉，秦愛麗

(鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院 鄭州兒童醫(yī)院，河南 鄭州 450018)

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是發(fā)病率高達(dá)25%的口腔黏膜疾病[1]。復(fù)發(fā)性口腔潰瘍主要表現(xiàn)為局部潰瘍、灼熱疼痛等，具有周期性、復(fù)發(fā)性等特點(diǎn)[2]。兒童由于免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，導(dǎo)致口腔潰瘍發(fā)生頻率較高，對(duì)患兒生活質(zhì)量具有一定的影響[3]。目前認(rèn)為復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是一種非特異性炎癥，在臨床上只能對(duì)癥治療，療效不佳[4]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，免疫功能異常是復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)病的關(guān)鍵原因[5]。在病理上，口腔是胃腸道與皮膚之間的過渡區(qū)，許多胃腸道免疫狀況可以影響口腔疾病的發(fā)生[6]。黏蛋白具有保護(hù)黏膜上皮的作用，上皮細(xì)胞膜結(jié)合黏液素1(Membrane-bound mucin-1 of epithelial cells，MUC1)具有維持腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用，有研究報(bào)道，潰瘍性結(jié)腸炎患者血漿MUC1水平顯著升高，且活動(dòng)期患者血漿MUC1水平明顯高于緩解期患者[7]。CC修飾趨化因子配體11(CC-modified chemokine ligand 11，CCL11)具有促炎作用。胡雪廬等[8]研究顯示，潰瘍性結(jié)腸炎患者血清CCL11水平明顯升高，活動(dòng)期患者血清CCL11水平明顯高于緩解期患者。基于此，本研究探究復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患兒治療前后血清MUC1、CCL11水平變化及對(duì)復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年3月至2021年3月鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院收治的復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患兒136例為觀察組,男72例,女64例，年齡2～12歲，平均(7.50±2.14)歲。病例納入標(biāo)準(zhǔn)[9]：①至少有2次復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)病史，病史至少半年；②反復(fù)發(fā)作，每月發(fā)作1次以上；③入院就診前3個(gè)月內(nèi)未服用免疫類制劑；④發(fā)作時(shí)表現(xiàn)為，潰瘍發(fā)生在唇、舌、頰黏膜等處﹐數(shù)目1～5個(gè)，直徑不超過5 mm，潰瘍充血，局部疼痛，邊界清楚，基部不硬，中央稍凹，表面覆以灰黃色或淺黃色假膜。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他口腔黏膜疾病、自身免疫性疾病、甲狀腺功能減退癥；②克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎；③慢性肝臟、腎臟疾病、感染性疾?。虎芗毙誀I養(yǎng)不良、卟啉病、代謝性疾??；⑤惡性腫瘤患兒。另選擇同期健康體檢且口腔無潰瘍者142例為對(duì)照組，男72例，女70例；年齡2～12歲，平均(7.90±2.03)歲。兩組患兒性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。研究經(jīng)患兒父母或法定監(jiān)護(hù)人知情同意，并經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核。

1.2 研究方法

1.2.1 對(duì)照組禁食8 h后清晨入院體檢時(shí)，研究組在治療前、治療后禁食8 h后清晨分別抽取靜脈血 4 ml，以4000 r/min離心10 min，留上清，置于-20 ℃下待測。

1.2.2 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清MUC1、CCL11、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素2(IL-2)水平：先用試劑盒攜帶的標(biāo)準(zhǔn)品，按說明書配成一系列濃度樣品，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后每孔分別加入100 μl待測樣品，混勻，在37 ℃下孵育90 min。用磷酸緩沖液(PBS)洗滌反應(yīng)板3次，烘干。將一抗溶液加入酶標(biāo)板各孔中，混勻，在37 ℃下孵育60 min。用PBS洗滌反應(yīng)板3次，烘干。各孔加入100 μl酶標(biāo)工作液，在37 ℃下孵育30 min，重復(fù)洗板。在各孔加入100 μl終止液，混勻。應(yīng)用酶標(biāo)儀測450 nm處吸光值，計(jì)算MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平。

1.3 預(yù)后評(píng)價(jià) 對(duì)治愈后患兒進(jìn)行為期1年隨訪，隨訪截止時(shí)間2022年3月。根據(jù)《復(fù)發(fā)性阿弗他漬瘍療效評(píng)價(jià)試行標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行評(píng)價(jià)[10]。顯效：至少6個(gè)月未復(fù)發(fā)，潰瘍面積明顯減小，基本無疼痛；有效：1年內(nèi)復(fù)發(fā)1～2次，潰瘍數(shù)減少，患兒主訴疼痛感在用藥后7 d內(nèi)消失；無效：潰瘍間歇期及潰瘍個(gè)數(shù)無明顯改善，患兒臨床癥狀未減輕。將無效歸為再次復(fù)發(fā)組，32例；將顯效、有效歸為未再次復(fù)發(fā)組，104例。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患兒血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較 與對(duì)照組相比，觀察組血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平顯著升高(均P<0.05)，見表1。

表1 兩組患兒血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較

2.2 觀察組患兒治療前后血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較 與治療前相比，治療后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平顯著降低(均P<0.05)，見表2。

表2 觀察組患兒治療前后血清CCL11、MUC1、TNF-α、IL-2水平比較

2.3 觀察組患兒血清MUC1、CCL11與TNF-α、IL-2相關(guān)性分析 Pearson法分析顯示，血清MUC1、CCL11均與TNF-α、IL-2呈正相關(guān)(均P<0.05)，見表3。

表3 血清MUC1、CCL11與TNF-α、IL-2相關(guān)性分析

2.4 再次復(fù)發(fā)組和未再次復(fù)發(fā)組治療前后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比較 治療前再次復(fù)發(fā)組和未再次復(fù)發(fā)組血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；治療后，與未再次復(fù)發(fā)組相比，再次復(fù)發(fā)組血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平顯著升高(均P<0.05)。見表4。

表4 再次復(fù)發(fā)組和未再次復(fù)發(fā)組治療前后血清MUC1、CCL11、TNF-α、IL-2水平比較

2.5 血清MUC1、CCL11對(duì)復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值 ROC曲線分析表明，MUC1預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的曲線下面積(AUC)為0.886(95%CI:0.819～0.953)，敏感度為71.90%，特異性為92.30%，截?cái)嘀禐?0.21 U/ml，約登指數(shù)為0.642；CCL11預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的AUC為0.813(95%CI:0.720～0.906)，敏感度為75.00%，特異性為86.50%，截?cái)嘀禐?.81 pg/ml，約登指數(shù)為0.615；MUC1聯(lián)合CCL11預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的AUC為0.908(95%CI:0.847～0.969)，敏感度為84.40%，特異性為86.50%，約登指數(shù)為0.709，其中兩者聯(lián)合預(yù)測的AUC值與CCL11單獨(dú)預(yù)測的AUC值相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=1.877，P=0.030)，兩者聯(lián)合預(yù)測的AUC值與MUC1單獨(dú)預(yù)測的AUC值相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.450，P=0.326)。見圖1。

圖1 血清MUC1、CCL11預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的ROC曲線

3 討 論

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍是口腔黏膜局限性潰瘍性疾病，好發(fā)于口腔唇、頰、軟腭等處黏膜，發(fā)作時(shí)黏膜充血、灼熱疼痛，病情嚴(yán)重時(shí)可伴有頭痛發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大，并且影響患兒說話及進(jìn)食[11-12]。目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)生與免疫功能異常、腸道菌群異常有密切關(guān)系[13]。機(jī)體免疫功能對(duì)外界炎癥侵?jǐn)_有抵御作用，當(dāng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能發(fā)生改變后，細(xì)胞炎性反應(yīng)加強(qiáng)，引起口腔局部潰瘍[14]。國外研究發(fā)現(xiàn)，口腔潰瘍的全基因組與免疫調(diào)節(jié)的基因有關(guān)[15]。

本結(jié)果顯示，觀察組血清TNF-α、IL-2水平顯著高于對(duì)照組，治療后血清TNF-α、IL-2水平顯著低于治療前，提示復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)生過程中，TNF-α表達(dá)水平上調(diào)可促進(jìn)炎癥性損傷。TNF-α是由單核巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)多種炎性介質(zhì)分泌，在免疫和炎性反應(yīng)中扮演重要角色[16-17]。IL-2是調(diào)控免疫應(yīng)答中重要細(xì)胞因子，在復(fù)發(fā)性口腔潰瘍中表達(dá)明顯升高，可加重炎性反應(yīng)，促進(jìn)潰瘍發(fā)生[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組血清MUC1、CCL11水平顯著高于對(duì)照組，治療后血清MUC1、CCL11水平顯著低于治療前，提示MUC1、CCL11可能影響復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的發(fā)生。CCL11屬于CC類趨化因子家族，一種嗜酸性粒細(xì)胞趨化劑，也是重要的免疫物質(zhì)調(diào)節(jié)劑[18]。國外研究報(bào)道，潰瘍性結(jié)腸炎患者血漿中CCL11表達(dá)明顯升高，與TNF-α、IL-2具有密切關(guān)系[19]。以往研究顯示，TNF-α刺激的支氣管上皮細(xì)胞可通過激活STAT6信號(hào)通路增加CCL11表達(dá)[20]。MUC1是高分子量、高度糖基化的跨膜蛋白，MUC1主要表達(dá)于消化道、呼吸道和生殖道等各種組織器官的上皮細(xì)胞腺體表面[21]。早期研究表明，MUC1主要生物學(xué)功能是潤滑、細(xì)胞保護(hù)、黏附維持和細(xì)胞識(shí)別[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，血清MUC1、CCL11均與TNF-α、IL-2呈正相關(guān)，提示MUC1、CCL11可能與復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患兒體內(nèi)炎性反應(yīng)相關(guān)。猜測TNF-α、IL-2可能通過影響某個(gè)通路從而影響患兒體內(nèi)MUC1、CCL11表達(dá)，影響復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)生。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，再次復(fù)發(fā)組血清MUC1、CCL11水平顯著高于未再次復(fù)發(fā)組，提示MUC1、CCL11可能影響復(fù)發(fā)性口腔潰瘍疾病的預(yù)后，初步研究表明，復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患兒再次發(fā)生口腔潰瘍可能與MUC1、CCL11表達(dá)有關(guān)。ROC曲線分析表明，MUC1、CCL11預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的AUC為0.886、0.813；MUC1聯(lián)合CCL11預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的AUC為0.908，敏感度為84.40%，特異性為86.50%，提示MUC1、CCL11可預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)，MUC1聯(lián)合CCL11對(duì)復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)有較高的預(yù)測價(jià)值。

綜上所述，治療后復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患兒血清MUC1、CCL11水平顯著降低，對(duì)預(yù)測復(fù)發(fā)性口腔潰瘍患兒再次復(fù)發(fā)具有一定價(jià)值，但是兩者參與復(fù)發(fā)性口腔潰瘍?cè)俅螐?fù)發(fā)的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。