采用凝聚胺法及微柱凝膠法檢測不規(guī)則抗體的應(yīng)用比較

馬慶宗 ，楊志釗 ，鄒美霞 ，蔣旭 ，吳少梅 ，陳信 ，周巨明 ，鄭楚忠

(1、中山市人民醫(yī)院輸血科；2、中山市人民醫(yī)院藥學(xué)部配置中心，廣東 中山 528403；3、深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳518116)

輸血前進(jìn)行常規(guī)的不規(guī)則抗體檢測，能夠有效幫助臨床發(fā)現(xiàn)有意義的不規(guī)則抗體，也為臨床輸血提供正確、配合的理論依據(jù)，為患者的診治、搶救爭取更多的時(shí)間[1]。在交叉配血不合的情況中，有一大部分的原因是抗人球蛋白試驗(yàn)陽性，因此造成交叉配血不合的常見原因往往是血清中含有不完全或不規(guī)則抗體[2]。交叉配血方法包括早期的鹽水法、酶技術(shù)配血法、凝聚胺法和微柱凝膠法等。本研究通過采用凝聚胺法和微柱凝膠法，對輸血前患者進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取 2016年 3月至 2017年 3月我院收治的需輸血患者12680例，所有患者均符合輸血的臨床指征，其中男5326例，女7354例，年齡3～86歲。部分患者有輸血史和多次妊娠史及單次腫瘤術(shù)后受血史?；颊呒{入標(biāo)準(zhǔn)：無輸血治療禁忌癥者。

1．2 儀器與試劑 凝聚胺法試劑由中山生科有限公司提供，不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞由江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司提供檢測試劑盒，微柱凝膠卡由北京佰利申科貿(mào)有限公司提供，專用離心機(jī)、37℃孵育器均由西班牙基立福公司提供。以上試劑均批檢合格并在有效使用期內(nèi)使用。為了保證結(jié)果的穩(wěn)定性、可比性，標(biāo)本檢驗(yàn)嚴(yán)格按照試劑說明書，采用同一批號的試劑。

1．3 方法 采集受血者EDTA－K2抗凝靜脈血3ml，對樣本進(jìn)行離心，確保無纖維蛋白凝塊干擾，立即進(jìn)行檢測，如未立即進(jìn)行檢測則保存于2～8℃。凝聚胺法和微柱凝膠法參照滕藝艷等[3]研究的方法。對上述兩種方法篩查陽性者，采用鹽水法和抗人球蛋白法方法進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，確定抗體的特異性。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩種方法對不規(guī)則抗體檢測的比較 在12680例患者中，凝聚胺法檢出不規(guī)則抗體30例（0．237%），微柱凝膠法檢出不規(guī)則抗體 48例（0．379%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見表 1。

表1 凝聚胺法與微柱凝膠法對不規(guī)則抗體檢測的比較

2．2 兩種方法對不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果的比較 凝聚胺法對抗D、抗 E、抗e、抗 C、抗M 和自身抗體的鑒定結(jié)果分別為 1、20、2、2、3、2 例；微柱凝膠法對抗D、抗 E、抗e、抗 C、抗M 和自身抗體的鑒定結(jié)果分別為 1、37、2、2、4、2 例，見表 2。

3 討論

當(dāng)患者機(jī)體血容量降低，組織血液灌注減少時(shí)會(huì)引起休克，此時(shí)為患者進(jìn)行輸血治療，能夠有效提高患者血容量，使患者血液循環(huán)得到改善，從而降低患者死亡率[3]。輸血治療過程中存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，血清中含有的不規(guī)則抗體會(huì)引起一系列輸血不良反應(yīng)，如新生兒溶血癥、血型鑒定困難等。采用酶法、凝聚胺法和抗人球蛋白法都能夠?qū)Σ灰?guī)則抗體進(jìn)行篩查，而目前使用更為廣泛的是微柱凝膠法[4]。微柱凝膠法克服了酶法等其它傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，使不規(guī)則抗體的篩查更加安全、便捷、靈敏，已經(jīng)成為國際公認(rèn)的方法，能夠更準(zhǔn)確地保證輸血的安全[5]。本研究通過對凝聚胺法與微柱凝膠法對不規(guī)則抗體的檢測結(jié)果進(jìn)行分析比較，希望能減少溶血性輸血反應(yīng)并保證臨床輸血安全。

表2 凝聚胺法與微柱凝膠法對不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果的比較[n(%)]

本研究采用凝聚胺法檢出不規(guī)則抗體30例，陽性率為0．237%，低于微柱凝膠法檢出率（0．379%），這表明微柱凝膠法在進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)中的敏感性明顯高于凝聚胺法，且經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，χ2值為 4．167，兩種方法間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），這與張娜[6]等文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果不一致。凝聚胺法的原理是將細(xì)胞抗原抗體用低離子介質(zhì)致敏，紅細(xì)胞間的靜電作用力會(huì)在凝聚胺等帶正電荷的大分子聚合物作用下減少，從而使細(xì)胞間的距離縮短，形成肉眼可見的凝集；非特異性的凝集會(huì)在假凝集清除液的作用下消除，而由抗原抗體介導(dǎo)的特異性凝集則不會(huì)被假凝集清除液影響而分散。凝聚胺法主要用于搶救急診患者時(shí)的緊急交叉配血，操作方法相對簡單快捷，且能夠有效減少假陽性，降低成本[7]。崔慶林[8]等研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)紅細(xì)胞懸液濃度為3%時(shí)反應(yīng)情況最好，不會(huì)出現(xiàn)假陽性或者假陰性；當(dāng)紅細(xì)胞濃度低于3%時(shí)，過多的抗體會(huì)導(dǎo)致前帶現(xiàn)象的發(fā)生；當(dāng)紅細(xì)胞濃度高于3%時(shí)，抗體過少而導(dǎo)致假陰性。另外，凝聚胺法難以檢測出Kell血型系統(tǒng)，需在抗人球蛋白試驗(yàn)的配合下檢測[9]。凝聚胺法存在靈敏度低的問題，需要操作人員對反應(yīng)終點(diǎn)與結(jié)果判讀具有一定的經(jīng)驗(yàn)，存在著一定的漏檢率。微柱凝膠法的原理是抗原抗體反應(yīng)時(shí)，IgG類抗體致敏的紅細(xì)胞在抗人球蛋白的作用下發(fā)生特異性凝集，在離心力的作用下使凝集紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞分離。微柱凝膠法操作方法簡捷，對實(shí)驗(yàn)室人員要求簡單，且微柱凝膠法檢測結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，即節(jié)省試劑成本，又減少了環(huán)境污染[10]。其缺點(diǎn)主要是孵育、離心時(shí)間長，無法滿足特急的急診標(biāo)本配血要求，假陽性率相對較高，成本高。

本結(jié)果顯示，凝聚胺法及微柱凝膠法檢出的抗D抗體均只有1例。目前RhD檢測已經(jīng)成為臨床實(shí)驗(yàn)室必測項(xiàng)目，這也導(dǎo)致了抗E抗體產(chǎn)生的頻率高于抗D抗體[11]，RhD配合性輸注使用頻率增高，加上RhD抗原檢測在臨床輸血工作中已成為常規(guī)的檢測項(xiàng)目[12]，預(yù)防和降低了抗D抗體產(chǎn)生的因素。不規(guī)則抗體主要是通過輸血、妊娠等免疫刺激產(chǎn)生的，這是產(chǎn)生免疫性紅細(xì)胞血型抗體的主要途徑[13，14]，本結(jié)果中陽性標(biāo)本多來自于有輸血史和多次妊娠史的患者，亦證明了這一點(diǎn)。不規(guī)則抗體篩查能夠保證已有輸血史、妊娠史等患者的輸血安全，同時(shí)對具有溶血性反應(yīng)、原因不明貧血等患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，能夠有效地減少輸血反應(yīng)的發(fā)生[15]。此外，還能減少血液輸注無效、浪費(fèi)血液的現(xiàn)象，降低因不規(guī)則抗體引起新生兒溶血病的危險(xiǎn)發(fā)生率[16]，爭取更多的時(shí)間尋找相配血型的血液[17]，為產(chǎn)科、兒科大大地減輕疾病風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的治愈率、存活率。

綜上所述，兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，但為避免不規(guī)則抗體的漏檢，減少輸血反應(yīng)的發(fā)生，應(yīng)結(jié)合凝聚胺法，開展微柱凝膠法對不規(guī)則抗體的檢測，聯(lián)合應(yīng)用能有效保證患者的輸血安全。凝聚胺交叉配血試驗(yàn)法操作快速簡便、試劑的穩(wěn)定性好、試劑無需特殊設(shè)備且結(jié)果清晰，利于保障臨床輸血安全，值得各級醫(yī)院推廣使用。