探討血清CD4水平聯(lián)合陰道微生態(tài)環(huán)境指標(biāo)與老年女性人類(lèi)乳頭瘤病毒感染的關(guān)系

葉揚(yáng)英，張忠源，楊淑珍

1.南平市第一醫(yī)院體檢科，福建南平 353000；2.南平市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建南平 353000

人類(lèi)乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染每年導(dǎo)致60 多萬(wàn)例癌癥［1］。大多數(shù)女性會(huì)在一生中通過(guò)性交感染HPV，大多數(shù)HPV 感染會(huì)在幾個(gè)月內(nèi)自行消退，少數(shù)HPV 感染會(huì)持續(xù)存在并造成不可逆轉(zhuǎn)的病變［1］。雖然大多數(shù)HPV 感染會(huì)被人體免疫系統(tǒng)清除，但持續(xù)感染會(huì)導(dǎo)致病毒基因整合到宿主基因組中，并導(dǎo)致HPV 相關(guān)性癌癥［2-3］。局部菌群失調(diào)、上皮表面完整性破壞、免疫調(diào)節(jié)異常是HPV 向癌癥發(fā)展的協(xié)同因素。大量的研究［4-5］表明，陰道微環(huán)境在HPV 感染方面起著重要的作用。此外，機(jī)體免疫功能的變化，特別是淋巴T 細(xì)胞功能異常，同樣與HPV 感染相關(guān)。老年女性特有的生理改變與HPV 感染風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。隨著年齡增大，老年女性因絕經(jīng)導(dǎo)致陰道乳酸桿菌減少，陰道微生態(tài)環(huán)境失調(diào)風(fēng)險(xiǎn)增大，機(jī)體免疫功能不斷下降，HPV 感染風(fēng)險(xiǎn)或者由HPV 潛伏期轉(zhuǎn)入HPV 相關(guān)腫瘤期的風(fēng)險(xiǎn)增大［6］。為了進(jìn)一步闡明陰道微生態(tài)環(huán)境以及T 淋巴細(xì)胞與HPV 感染的關(guān)系，本研究旨在通過(guò)Logistic 回歸分析篩選HPV 感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)HPV 感染進(jìn)行評(píng)估和干預(yù)，具有重要的臨床意義。

1 資料與方法

1．1 一般資料選取2021年6月1日—2022年6月1日在南平市第一醫(yī)院門(mén)診進(jìn)行高危型HPV 檢查的老年女性患者。納入標(biāo)準(zhǔn)： （1）患者年齡≥60 歲；（2）已經(jīng)絕經(jīng)；（3）檢查前1 周內(nèi)未服用抗細(xì)菌或真菌藥物以及抗病毒藥物；（4） 1 周內(nèi)未接受陰道浸入性操作；（5）患者1 周內(nèi)無(wú)性生活。符合上述所有標(biāo)準(zhǔn)的病例納入本項(xiàng)研究。排除標(biāo)準(zhǔn)： （1）存在陰道出血癥狀；（2）患有生殖系統(tǒng)腫瘤；（3）患有嚴(yán)重臟器病變；（4）患有精神性疾病，無(wú)自主行為能力；（5）參與了其他臨床研究。具有上述任意1 項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的病例不納入本研究。

1．2 觀察指標(biāo)與方法

1.2.1 陰道微生態(tài)環(huán)境檢測(cè) 收集患者陰道以及宮頸分泌物。陰道環(huán)境檢查包括念珠菌、滴蟲(chóng)、細(xì)菌、陰道清潔度、pH 值、唾液酸苷酶、過(guò)氧化氫和白細(xì)胞酯酶。陰道清潔度分為Ⅰ～Ⅳ度，Ⅰ度和Ⅱ度表示陰道清潔度正常，Ⅲ度和Ⅳ度表示陰道清潔度異常。

1.2.2 高危型HPV 檢查 收集患者宮頸脫落細(xì)胞，提取上述標(biāo)本的DNA，通過(guò)雜交捕獲檢查進(jìn)行高危型HPV 檢測(cè)。陽(yáng)性表示高危型HPV 感染，陰性表示無(wú)高危型HPV 感染。HPV 高危型有HPV16 亞型、HPV18 亞型、HPV31 亞型和HPV33 亞型等。

1.2.3 血細(xì)胞分化抗原簇檢查 收集患者靜脈血10 mL，通過(guò)細(xì)胞流式技術(shù)檢測(cè)患者血細(xì)胞分化抗原簇水平，包括CD3，CD4 以及CD8。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本研究所有數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS 24.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；采用單因素和多因素Logistic 回歸分析篩選高危型HPV 感染的危險(xiǎn)因素；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線(xiàn)評(píng)估臨床變量對(duì)高危型HPV 的診斷效能。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 一般情況本研究共納入143 例老年女性患者，其中高危型HPV 陽(yáng)性組患者29 例（20.28%），高危型HPV 陰性組患者114 例（79.72%）。高危型HPV 陽(yáng)性組患者平均年齡（65.2 ±13.2）歲；初潮平均年齡（13.3 ±1.5）歲；絕經(jīng)平均年齡（49.0 ±6.2）歲；初次妊娠平均年齡（26.3 ± 8.1）歲；平均孕次（2.63 ±0.83）次。高危型HPV 陰性組患者平均年齡（64.4 ±11.1）歲；初潮平均年齡（13.8 ±1.0）歲；絕經(jīng)平均年齡（48.8 ±7.3）歲；初次妊娠平均年齡（25.9 ±6.2）歲；平均孕次（2.5 ±0.8）次。2 組患者基線(xiàn)資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2．2 高危型HPV 陽(yáng)性組和陰性組陰道感染情況及清潔度比較高危型HPV 陽(yáng)性組細(xì)菌感染（P＝0.003）和陰道清潔度異常（P＝0.001）患者比例均高于高危型HPV 陰性組；高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV 陰性組患者在念珠菌感染（P＝0.952）和滴蟲(chóng)感染（P＝0.314）患者比例上的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV 陰性組陰道感染情況及清潔度比較［例（%）］

2．3 高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV 陰性組陰道微生態(tài)環(huán)境指標(biāo)值比較高危型HPV 陽(yáng)性組陰道唾液酸苷酶陽(yáng)性患者比例高于高危型HPV 陰性組（P＝0.001）。高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV 陰性組在pH 值（P＝0.862）、過(guò)氧化氫異常（P＝0.564）以及白細(xì)胞酯酶異常（P＝0.950）上的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV 陰性組陰道微生態(tài)環(huán)境指標(biāo)值比較［例（%）］

2．4 高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV 陰性組血細(xì)胞簇分化抗原比較高危型HPV 陽(yáng)性組血清CD4 水平（P＝0.001）以及CD8 水平（P＝0.008）均低于高危型HPV 陰性組。高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV陰性組在血清CD3 水平（P＝0.156）上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。

表3 高危型HPV 陽(yáng)性組和高危型HPV 陰性組血細(xì)胞簇分化抗原比較

2．5 單因素Logstic 回歸分析篩選高危型HPV 感染危險(xiǎn)因素陰道清潔度異常（OR＝2.18，P＝0.034）、陰道細(xì)菌感染（OR＝4.44，P＝0.005）、血清CD4 降低（OR＝3.16，P＝0.001）、血清CD8 降低（OR＝1.53，P＝0.004）是高危型HPV 感染的危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表4。

表4 單因素Logstic 回歸分析篩選高危型HPV 感染危險(xiǎn)因素

2．6 多因素Logstic 回歸分析篩選高危型HPV 感染獨(dú)立危險(xiǎn)因素在陰道微生態(tài)和血清抗原分化簇中，細(xì)菌感染（OR＝2.36，P＝0.016）、血清CD4 降低（OR＝1.83，P＝0.002）是高危型HPV 感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表5。

表5 多因素Logstic 回歸分析篩選高危型HPV 感染危險(xiǎn)因素

2．7 獨(dú)立危險(xiǎn)因素診斷效能評(píng)估ROC 曲線(xiàn)表明，陰道細(xì)菌感染曲線(xiàn)下面積為0.54 （P＝0.034）；血清CD4 水平曲線(xiàn)下面積為0.61 （P＝0.008）；血清CD4水平聯(lián)合細(xì)菌感染曲線(xiàn)下面積為0.73 （P＝0.004）。見(jiàn)表6。

表6 獨(dú)立危險(xiǎn)因素診斷效能評(píng)估

3 討論

在本研究中，高危型HPV 陽(yáng)性率20.28%，較人群感染率高，這可能與樣本選擇偏倚有關(guān)。本研究的樣本為主動(dòng)進(jìn)行高危型HPV 篩查的老年女性患者。本研究發(fā)現(xiàn)，老年女性中高危型HPV 陽(yáng)性組細(xì)菌感染以及陰道清潔度異常患者比例高于高危型HPV 陰性組。細(xì)菌感染是高危型HPV 感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。劉潤(rùn)麗等［9］研究發(fā)現(xiàn)，在高危型HPV 感染的患者中，患有細(xì)菌性陰道炎的患者比例高于高危型HPV 感染陰性組。該研究指出細(xì)菌感染是高危型HPV 感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。老年女性陰道微環(huán)境具有區(qū)別于年輕女性的特點(diǎn)。在絕經(jīng)之后，陰道微環(huán)境中乳酸菌減少，陰道粘膜變薄。微環(huán)境和生理結(jié)構(gòu)的改變導(dǎo)致老年女性更容易發(fā)生陰道感染。Gillet 等［7］的研究顯示，細(xì)菌性陰道炎患者更容易發(fā)生高危型HPV 感染，而Guo 等［8］研究了細(xì)菌性陰道炎對(duì)高危HPV 感染患者預(yù)后的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在研究開(kāi)始時(shí)，持續(xù)高危型HPV 組和清除組的細(xì)菌性陰道炎發(fā)生率相似；在研究結(jié)束時(shí)，持續(xù)高危型HPV 組細(xì)菌性陰道炎患者患病率為11.2%，而清除組細(xì)菌性陰道炎患病率明顯更低為5.0%。與未感染細(xì)菌性陰道炎的女性相比，細(xì)菌性陰道炎可能延長(zhǎng)了高危型HPV 感染的持續(xù)時(shí)間和消退時(shí)間。

還有研究［10－11］指出，陰道微環(huán)境紊亂與HPV 感染有關(guān)。與無(wú)細(xì)菌性陰道病的女性相比，患有細(xì)菌性陰道病患者的高危型HPV 感染率增加。陰道微環(huán)境紊亂與炎癥因子增加、粘膜損傷和慢性炎癥有關(guān)。有研究［14］指出，作為陰道微環(huán)境的重要組成部分，代謝組對(duì)菌群的致病性起著重要作用。細(xì)菌感染可能導(dǎo)致乳酸桿菌缺乏，從而導(dǎo)致陰道微生態(tài)環(huán)境pH 值改變。乳酸桿菌產(chǎn)生的過(guò)氧化氫可以催化過(guò)氧化物酶，進(jìn)一步產(chǎn)生次氯酸鹽。這一過(guò)程可以防止HPV 侵入宮頸上皮細(xì)胞，防止宮頸病變。白細(xì)胞酯酶是一種細(xì)胞內(nèi)酶。當(dāng)陰道發(fā)生炎癥時(shí)，大量白細(xì)胞聚集起來(lái)吞噬病原體，導(dǎo)致白細(xì)胞膜破壞，從而檢測(cè)出白細(xì)胞酯酶。但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這些反映陰道微生態(tài)環(huán)境指標(biāo)與HPV 感染之間相關(guān)性。這可能與本研究納入的樣本量過(guò)小有關(guān)，也可能與樣本僅針對(duì)老年患者有關(guān)，今后需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。

本研究發(fā)現(xiàn)，高危型HPV 陽(yáng)性組陰道唾液酸苷酶陽(yáng)性患者比例高于高危型HPV 陰性組。唾液酸苷酶是1 種切割唾液酸末端殘基的酶，與組織破壞、免疫反應(yīng)逃避、細(xì)菌入侵和獲得細(xì)菌相關(guān)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)［12］。唾液酸苷酶可降解粘膜保護(hù)因子，引起陰道上皮細(xì)胞溶解和排出［13］。

本研究還發(fā)現(xiàn)，高危型HPV 感染陽(yáng)性組與陰性組患者外周血T 細(xì)胞亞群水平存在差異。與高危型HPV 陰性組相比，陽(yáng)性組患者血清CD4 和CD8 水平顯著降低，血清CD4 水平降低是高危型HPV 感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這與既往的研究相符。李軍等［15］研究表明，外周血T 細(xì)胞標(biāo)志物與HPV 感染相關(guān)。此外，本研究通過(guò)ROC 曲線(xiàn)證實(shí)，細(xì)菌感染聯(lián)合血清CD4 水平對(duì)HPV 具有較好的診斷效能。

本研究針對(duì)老年女性患者，在陰道微生態(tài)環(huán)境指標(biāo)和血清免疫學(xué)標(biāo)志物種篩選了HPV 感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究中的聯(lián)合獨(dú)立危險(xiǎn)因素為老年女性HPV 感染風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估和預(yù)防干預(yù)提供了參考依據(jù)。

本研究存在一些不足之處，包括樣本量偏小，缺乏外部數(shù)據(jù)驗(yàn)證和機(jī)制研究等，在后續(xù)的研究中需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證，以及進(jìn)行體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)闡明標(biāo)志物變化的機(jī)制。

綜上所述，本研究中老年女性的陰道微生態(tài)和血清抗原分化簇中，細(xì)菌感染、血清CD4 是高危型HPV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。細(xì)菌感染聯(lián)合血清CD4 水平檢測(cè)對(duì)老年女性HPV 感染具有一定的評(píng)估價(jià)值。