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    黑龍江省4種野生百里香揮發(fā)油成分GC-MS分析

    2022-11-01 10:13:28楊雪冰夏海濤山小淞梅雪松魏曉雪
    黑龍江科學(xué) 2022年20期
    關(guān)鍵詞:百里香興安揮發(fā)油

    楊雪冰,董 上,夏海濤,山小淞,梅雪松,魏曉雪

    (1.黑龍江省科學(xué)院,哈爾濱 150000; 2.黑龍江省林業(yè)科學(xué)院伊春分院,黑龍江 伊春 153000; 3.黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所,哈爾濱 150040; 4.黑龍江省科學(xué)院大慶分院,黑龍江 大慶 163319)

    百里香屬(ThymusL.)植物是唇形科的低矮灌木,在中國分布有17種,2變種,主要分布于黃河以北的干旱及半干旱山區(qū)礫石坡地及草地[1]。黑龍江省分布8種,1變種,調(diào)查中發(fā)現(xiàn)百里香、地椒2種在黑龍江省也有分布[2]。顯脈百里香和興安百里香分布具有地帶性,其中顯脈百里香只分布于黑龍江省,興安百里香分布于黑龍江省和遼寧省[3-4]。關(guān)于顯脈百里香和興安百里香揮發(fā)油提取和成分的研究鮮有報(bào)道,對(duì)興安百里香的探討多集中于植物形態(tài)和快速繁育方面[5-6]。王玲等對(duì)黑龍江省4種野生百里香屬植物東北百里香(ThymusmandschuricusRonn.)、顯脈百里香、興凱百里香(ThymusprzewalskiiNakai)、興安百里香的種子微形態(tài)進(jìn)行了比較研究[5],并于2010年對(duì)這4種百里香屬植物的扦插苗在不同處理?xiàng)l件下的生根情況進(jìn)行了比較研究[6]。閆紅秀等運(yùn)用微波法提取興安百里香揮發(fā)油并對(duì)其主要組分活性進(jìn)行了研究,得到主要成分為百里香酚(52.52%)、α-萜品烯(12.72%)和對(duì)傘花烴(8.24%)。體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明,興安百里香揮發(fā)油3種主要組分中,百里香酚抑菌活性最強(qiáng)[7]。本研究采用水蒸氣蒸餾法提取百里香揮發(fā)油,利用GC-MS對(duì)黑龍江省4種野生百里香的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析、鑒定,以期為進(jìn)一步合理開發(fā)利用黑龍江省興安百里香資源提供可靠的科學(xué)依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 材料與儀器

    百里香和興安百里香采集于黑龍江省黑河市五大連池風(fēng)景區(qū)(東經(jīng)126°00′~126°26′,北緯48°34′~48°48′),地椒和顯脈百里香采集于黑龍江省伊春市(東經(jīng)127°37′~130°46′,北緯46°28′~4°26′),模式標(biāo)本保存于黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所植物標(biāo)本室(HNR)。采樣于2020年9月進(jìn)行,選擇在天氣晴好的上午,在植株離地面10 cm處用剪刀截取整株百里香,包括植株的莖、葉、花和果實(shí),多株混合隨機(jī)采樣,帶回實(shí)驗(yàn)室陰干。氣質(zhì)聯(lián)用分析儀為安捷倫7890A-7000B氣質(zhì)聯(lián)用儀(美國安捷倫科技公司生產(chǎn)),所用試劑除正己烷為色譜純外,其余試劑均為分析純。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 百里香揮發(fā)油提取

    稱取百里香粉末10~20 g置于1 L圓底燒瓶中,按料液比1∶10(m/V)的體積加入蒸餾水并避光浸泡15 h,用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油5 h,提取的揮發(fā)油用過量無水硫酸鈉吸取水分后保存于2 mL Agilent樣品瓶中,放入-4℃ 冰箱中保存待測(cè)。含油率計(jì)算如下:

    W(%)=m1/m2×100%

    式中:W為含油率,%;m1為百里香揮發(fā)油的質(zhì)量,計(jì)量單位為g;m2為百里香陰干樣原料的質(zhì)量,計(jì)量單位為g。

    1.2.2 百里香揮發(fā)油成分分析

    色譜條件:色譜柱:HP-5 MS,5%苯甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),進(jìn)樣口溫度250℃,柱室溫度70℃(5 min),以8℃/min 升溫速率升至150℃(保持10 min),10℃升至250℃(保持8 min);載氣:高純氦氣,柱前壓8.12 Psi,流速1.0 mL/min,分流比37∶1。

    質(zhì)譜條件:接口溫度280℃。電離方式:EI,電子能量70 eV,離子源溫度250℃,四極桿溫度130℃。調(diào)諧方式:標(biāo)準(zhǔn)調(diào)諧。質(zhì)量掃描方式:SCAN,溶劑延遲3 min。掃描范圍m/z:35~550。

    分析方法:用 HP-5 MS 色譜柱對(duì)色譜分離條件進(jìn)行優(yōu)化,確定了最佳的分離條件,進(jìn)行GC-MS分析,獲得揮發(fā)油的總離子流色譜圖(TIC)。利用該儀器所配的Nist 2008 質(zhì)譜庫進(jìn)行檢索,再對(duì)所得的譜圖進(jìn)行人工核對(duì)和補(bǔ)充檢索,用面積歸一化法測(cè)得各組分的百分含量。

    1.2.3 百里香揮發(fā)油香氣的感官評(píng)價(jià)方法

    百里香揮發(fā)油的感官評(píng)價(jià)方法按GB/T 14454.2-2008《香料香氣評(píng)定法》對(duì)百里香揮發(fā)油進(jìn)行香氣感官評(píng)價(jià),天然香料除評(píng)辨其即時(shí)的香氣外,還應(yīng)注意對(duì)其在揮發(fā)過程中所呈現(xiàn)的頭香香韻特征、體香香韻特征、尾香香韻特征進(jìn)行評(píng)析,以綜合評(píng)定其香氣質(zhì)量[8]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 百里香揮發(fā)油含油率比較

    從表1可知,不同品種的百里香揮發(fā)油的含油率有較大差異,含油率范圍為0.29%~1.72%,其中,興安百里香的揮發(fā)油含油率最高,為1.72%,百里香次之,為0.76%,顯脈百里香含油率為0.55%,地椒含油率最低為0.29%。4種百里香揮發(fā)油含量之間的差異顯著,五大連池地區(qū)的2種百里香揮發(fā)油含油率顯著高于伊春地區(qū)。

    表1 4種百里香揮發(fā)油含量比較Tab.1 Comparison of the content of essential oil from 4 Thymus species

    2.2 百里香揮發(fā)性成分分析

    4種百里香屬植物共檢測(cè)出55種化合物,利用Nist標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫—計(jì)算機(jī)聯(lián)機(jī)檢索,結(jié)合查閱質(zhì)譜手冊(cè)和文獻(xiàn)資料分析核對(duì),共鑒定出38種化合物采用面積歸一化法測(cè)定各種成分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù),結(jié)果見表2。從化學(xué)成分種類來看,4種揮發(fā)油主要由16種萜烯類、9種醇類、5種酚類、2種酯類、1種酮類、1種醚類、1種醛類等組成。黑龍江省4種野生百里香揮發(fā)性成分占比最多的均為百里香酚,其中興安百里香、顯脈百里香、地椒的揮發(fā)油百里香酚占比達(dá)到75%以上,按照揮發(fā)油中主要成分分類法,可以將4種百里香揮發(fā)油均定為百里香酚型。

    表2 4種百里香揮發(fā)油化學(xué)成分及其相對(duì)含量Tab.2 Volatile chemical compositions and relative content of essential oil from 4 Thymus species

    4種野生百里香揮發(fā)油的主要化學(xué)成分及相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)表現(xiàn)出一定的差異。興安百里香鑒定出21種成分,占總質(zhì)量分?jǐn)?shù)的98.16%,百里香酚占比最高,為79.04%。其次為2-環(huán)己烯-1-醇和2-異丙基-1-甲基苯,分別占比5.15%和4.09%,其余成分總和占總量的9.88%。百里香鑒定出20種成分,占總質(zhì)量分?jǐn)?shù)的96.85%,主要成分為百里香酚32.86%、龍腦13.45%、4-萜品醇9.93%、2-環(huán)己烯-1-醇7.77%、橙花醇乙酸酯5.94%等。顯脈百里香鑒定出25種成分,占總質(zhì)量分?jǐn)?shù)的95.49%,百里香酚占比最高,為77.73%,其余成分占比不高,只有5種成分占比超過1%,剩余14種都未超過1%。地椒鑒定出21種成分,占總質(zhì)量分?jǐn)?shù)的97.05%,百里香酚為最主要成分,占比最高,為78.05%,其余20種成分占比總和為18%,其中含量在1%~5%的化合物共6種,剩余沒有占比超過1%的成分。

    從鑒定出的化合物相對(duì)分子質(zhì)量來看,相對(duì)分子質(zhì)量稍大的倍半萜及含氧倍半萜含量占絕大多數(shù)。所鑒定的化合物中,最小相對(duì)分子質(zhì)量為128,只有1-辛烯-3-醇一種化合物;相對(duì)分子質(zhì)量為136的化合物共6個(gè),都為帶環(huán)的烯烴類(單萜),平均含量較??;相對(duì)分子質(zhì)量為154的化合物較多,有7種,全為醇類或其衍生物,其中龍腦含量較大,其次為4-萜品醇和2-環(huán)己烯-1-醇平均含量相對(duì)較大;相對(duì)分子質(zhì)量為150的化合物有4種,其中百里香酚是百里香揮發(fā)油的主要成分,含量最高。相對(duì)分子質(zhì)量為152的化合物有反式-松香芹醇和檸檬醛2種,含量在2%左右;相對(duì)分子質(zhì)量超過200的化合物共11種,其中相對(duì)分子質(zhì)量為204化合物最多,共8個(gè),都是倍半萜類化合物,平均含量較小,總量也不大,但為重要的尾香成分;相對(duì)分子質(zhì)量為220的化合物只有異長(zhǎng)葉烯一種,是萜烯類化合物。

    2.3 百里香揮發(fā)油香氣的感官評(píng)價(jià)

    百里香揮發(fā)油提取物的感官特征呈微黃至淡褐色,按照GB/T 14454.2-2008《香料香氣評(píng)定法》評(píng)價(jià)表明,具有清涼帶干焦的藥草香又兼有龍腦、芳樟醇、石竹烯等的清香氣息,香氣透發(fā)有力但粗糙,留香持久。4種百里香揮發(fā)油共有的化合物有5個(gè),分別為α-萜品烯、百里香酚、4-萜品醇、石竹烯、異長(zhǎng)葉烯,其中百里香酚在4種百里香揮發(fā)油中含量均為最高,除百里香酚和龍腦外,沒有超過占比10%的成分。

    3 討論

    國內(nèi)已報(bào)道的新疆、陜西、貴州、寧夏和甘肅等地野生百里香的揮發(fā)油含量為0.16%~0.67%[9-13],但本研究中,興安百里香揮發(fā)油含量高達(dá)1.72%,百里香揮發(fā)油含量為0.76%,顯著高于其他地區(qū),也高于伊春地區(qū)的顯脈百里香和地椒。經(jīng)調(diào)查,野生興安百里香生長(zhǎng)在五大連池地區(qū)龍門石寨,百里香生長(zhǎng)在藥泉山,兩處皆為火山熔巖經(jīng)風(fēng)化形成的火山灰土。火山灰土是五大連池地區(qū)的主要土壤類型之一,具有有機(jī)質(zhì)含量含量高、土壤容重小、孔隙度與持水能力高等特點(diǎn),同時(shí)受玄武巖母質(zhì)中礦物態(tài)磷和鉀的作用,使火山灰土中全磷和全鉀含量較高[14],這可能是興安百里香揮發(fā)油含量顯著高于其他百里香的原因。

    百里香酚型是百里香屬植物主要的化學(xué)型,于二汝等總結(jié)了已報(bào)道的國內(nèi)13種百里香的化學(xué)型,有8種為百里香酚型,其主要成分百里香酚的含量介于22.72%~36.00%;國內(nèi)引進(jìn)的13種百里香也主要以百里香酚型為主,其中上海引進(jìn)的銀斑百里香的百里香酚含量占比最高,為60.62%[13]。閆紅秀等提取的興安百里香揮發(fā)油中,百里香酚為52.52%[7],均低于本研究中興安百里香的百里香酚79.04%。本研究中,顯脈百里香為百里香酚型,與張妤研究結(jié)果顯脈百里香為橙花醇型、但在花末期轉(zhuǎn)變?yōu)辇埬X/百里香酚型有明顯區(qū)別[15]。

    閆紅秀等研究發(fā)現(xiàn),興安百里香精油主要成分為百里香酚(52.52%)、α-萜品烯(12.72%)和對(duì)傘花烴(8.24%)[7]。本研究中,興安百里香的揮發(fā)油成分與閆紅秀的研究結(jié)果類似,都以百里香酚為主,不同的是本研究中未檢出對(duì)傘花烴;祁偉等[16]對(duì)山東德州郊區(qū)野生百里香精油成分進(jìn)行分析,鑒定出30種化合物,主要成分為百里香酚(15.64%)和香芹酚等;張有林等[5]研究發(fā)現(xiàn),甘肅鎮(zhèn)原縣的百里香精油主要成分為百里香酚(22.72%)和香芹酚(11.57%)等,本研究中百里香精油主要成分為百里香酚32.86%,未檢測(cè)到香芹酚;苗延青等[17]對(duì)陜西秦嶺山區(qū)地椒的精油成分進(jìn)行分析,鑒定出52種化合物,主要成分為百里香酚(20.87%)、香芹酚(16.58%)、對(duì)傘花烴(15.62%)和龍腦(4.68%)等物質(zhì)。而本研究中地椒精油中,百里香酚為最主要成分,占比78.05%,未檢測(cè)到龍腦。由此可見,百里香屬植物精油的主要組分與前人研究存在較大差異,地區(qū)差異性明顯,同種、不同產(chǎn)地的百里香精油成分和含量存在明顯差異,受基因型、地理環(huán)境、氣候條件等因素影響較大。黑龍江省分布的3種野生百里香百里香酚含量占比遠(yuǎn)高于其他地區(qū),這可能與黑龍江省的地理環(huán)境、取樣時(shí)期相關(guān),同時(shí)受到基因型和環(huán)境型的共同影響。

    4 結(jié)論

    黑龍江省4種野生百里香含油率范圍為0.29%~1.72%,而本研究中,興安百里香揮發(fā)油含量高達(dá)1.72%,百里香揮發(fā)油含量為0.76%,顯著高于其他地區(qū),也高于伊春地區(qū)的顯脈百里香和地椒。

    4種百里香屬植物共檢測(cè)出55種化合物,共鑒定出38種化合物。從化學(xué)成分種類來看,4種揮發(fā)油主要由16種萜烯類、9種醇類、5種酚類、2種酯類、1種酮類、1種醚類、1種醛類等組成。4種百里香揮發(fā)油共有的化合物有5個(gè),分別為α-萜品烯、百里香酚、4-萜品醇、石竹烯、異長(zhǎng)葉烯。

    黑龍江省4種野生百里香揮發(fā)性成分占比最多的均為百里香酚,其中興安百里香、顯脈百里香、地椒的揮發(fā)油百里香酚占比達(dá)到75%以上,按照揮發(fā)油中主要成分分類法,可以將4種百里香揮發(fā)油均定為百里香酚型。黑龍江省分布的3種野生百里香,百里香酚含量占比遠(yuǎn)高于其他地區(qū)。

    百里香揮發(fā)油提取物的感官特征呈微黃至淡褐色,按照GB/T 14454.2-2008《香料香氣評(píng)定法》評(píng)價(jià)表明,具有清涼帶干焦的藥草香又兼有龍腦、芳樟醇、石竹烯等的清香氣息,香氣透發(fā)有力但粗糙,留香持久。

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