LC-MS/MS測(cè)定水果制品中的5種農(nóng)藥殘留

李麗鑫，唐一秋

（1.昆明市食品藥品檢驗(yàn)所，云南昆明 650000；2.云南商務(wù)信息工程學(xué)校，云南昆明 650000）

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

Triple Quad 3500液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜-質(zhì)譜儀（AB科技有限公司）、AL104電子天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易有限公司）、Multi Reax振蕩器（德國(guó)海道爾夫公司）、ALLEGRA X-30R大容量冷凍離心機(jī)（美國(guó)貝克曼公司）、Arium comfort超純水器（賽多利斯公司）、FSJ-A05B1粉碎機(jī)、IKA T18均質(zhì)器及KQ5200DB超聲波清洗器。

100 μg·mL-1的咪鮮胺、多菌靈、啶蟲(chóng)脒、噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液（天津農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；甲酸（色譜純，阿拉丁試劑）；乙腈（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司）；鹽包（含4 g無(wú)水硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸二水合物、0.5 g檸檬酸二鈉鹽倍半水合物，美國(guó)Agilent公司）；15 mL SPE凈化管（含150 mg無(wú)水硫酸鎂、25 mg PSA，美國(guó)Agilent公司）；待測(cè)樣品為市售木瓜干、香蕉干和葡萄干。

1.2 樣品前處理

將木瓜干、香蕉干和葡萄干分別放入粉碎機(jī)打碎，樣品按1∶9（質(zhì)量比）比例復(fù)水，靜置30 min[1]。再用均質(zhì)機(jī)把水和樣品均勻混合后，準(zhǔn)確稱(chēng)取10 g（精確至0.01 g）于50 mL的離心管中，加入10 mL乙腈，在振蕩器下震蕩5 min，加入QuEChERS提取鹽包，振蕩提取5 min后4 200 r·min-1離心5 min，準(zhǔn)確移取6 mL上清液于15 mL SPE凈化管中，在振蕩器上振蕩混勻5 min，4 200 r·min-1離心5 min，吸取1 mL上清液經(jīng)0.22 μm尼龍有機(jī)濾膜過(guò)濾，待分析。

1.3 儀器工作條件1.3.1 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK ADME-HR S2（2.1 mm×100 mm，2 μm）；進(jìn)樣量：3 μL；流速：0.300 0 mL·min-1；流動(dòng)相：0.1%甲酸水和乙腈，洗脫梯度見(jiàn)表1。

表1 農(nóng)藥殘留洗脫梯度

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子化模式：正離子掃描；質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；氣簾氣（CUR）：35 psi；離子化電壓：5 500 V；離子源溫度：550 ℃；GS1：50 psi；GS2：50 psi。具體參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 農(nóng)藥殘留的質(zhì)譜條件

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

溶劑標(biāo)液的配制：用乙腈稀釋得系列濃度分別為0.5 ng·mL-1、1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、40 ng·mL-1、80 ng·mL-1和160 ng·mL-18個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。

基質(zhì)標(biāo)液的配制：用基質(zhì)溶液稀釋得系列濃度分別為0.5 ng·mL-1、1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、40 ng·mL-1、80 ng·mL-1和160 ng·mL-18個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。

空白樣品按樣品前處理1.2的方法提取后配制基質(zhì)標(biāo)液。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

本次實(shí)驗(yàn)在國(guó)標(biāo)的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)流動(dòng)相、進(jìn)樣量和洗脫梯度的不斷嘗試、優(yōu)化，觀察在不同的條件下5種農(nóng)藥殘留色譜圖的峰形、分離效果和保留時(shí)間，選擇最佳的分析條件，盡可能縮短分析時(shí)間、提高效率的同時(shí)又能確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和準(zhǔn)確性[2]。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，本次實(shí)驗(yàn)采用了0.1%的甲酸水和乙腈為流動(dòng)相。

2.2 提取方法的選擇

實(shí)驗(yàn)嘗試了復(fù)水和不復(fù)水2種方法。不復(fù)水時(shí)5種農(nóng)藥殘留加標(biāo)回收率在65.49%～88.91%；復(fù)水后加標(biāo)回收率在76.00%～104.14%。2種方法的加標(biāo)回收率的結(jié)果相比，復(fù)水時(shí)5種農(nóng)藥殘留的提取效果更理想，回收率更高，因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用了樣品與水按1∶9的比例進(jìn)行復(fù)水。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

實(shí)驗(yàn)還對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了分析考察，用乙腈和不含目標(biāo)物的木瓜干、香蕉干和葡萄干樣品提取液配制成和溶劑標(biāo)液等濃度的標(biāo)液，各連續(xù)進(jìn)樣2針[3]。結(jié)果顯示，木瓜干、香蕉干和葡萄干樣品用溶劑標(biāo)液定量時(shí)，5種農(nóng)藥殘留的加標(biāo)回收率在69.25%～84.26%，用空白基質(zhì)溶液配制標(biāo)液5種農(nóng)藥的回收率在76.00%～104.14%。因此，為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度，在樣品的檢測(cè)過(guò)程中，為消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，需要使用基質(zhì)配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)定量[4]。

2.4 色譜條件的選擇

依據(jù)2.1優(yōu)化的色譜條件（1.3.1的色譜條件），噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉、多菌靈、啶蟲(chóng)脒和咪鮮胺5種農(nóng)藥殘留的分離效果如圖1所示，多菌靈的保留時(shí)間為1.37 min，啶蟲(chóng)脒的保留時(shí)間為2.78 min，吡蟲(chóng)啉的保留時(shí)間為2.68 min，噻蟲(chóng)嗪的保留時(shí)間為2.07 min，咪鮮胺的保留時(shí)間為4.18 min。

圖1 噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉、多菌靈、啶蟲(chóng)脒和咪鮮胺5種農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

在上述實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)木瓜干、香蕉干和葡萄干樣品中噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉、多菌靈、啶蟲(chóng)脒和咪鮮胺5種農(nóng)藥殘留，樣品均未檢出5種農(nóng)藥殘留。在該實(shí)驗(yàn)條件下，在空白的木瓜干、香蕉干和葡萄干中分別加入1 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液50 μL、400 μL、1 000 μL，按1.2的方法進(jìn)行處理，每個(gè)濃度處理6個(gè)樣，經(jīng)過(guò)LC-MS/MS檢測(cè)，根據(jù)各個(gè)組分的測(cè)定濃度與加標(biāo)濃度之間的差異來(lái)計(jì)算5種農(nóng)藥殘留的精密度與加標(biāo)回收率[5]。由表3可知，加標(biāo)回收率在79.64%～100.60%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.2%～4.9%，滿(mǎn)足測(cè)定需求。

表3 木瓜干、香蕉干、葡萄干中5種農(nóng)藥的相關(guān)系數(shù)、平均回收率、精密度

2.6 檢出限與定量限的測(cè)定

在1.3.1色譜條件和1.3.2質(zhì)譜條件下，將濃度標(biāo)樣1 ng·mL-1連續(xù)測(cè)定10次，確定其基線(xiàn)信噪比（S/N），求其平均值，然后根據(jù)3倍的信噪比計(jì)算出檢出限，根據(jù)10倍信噪比計(jì)算出定量限，可以得出噻蟲(chóng)嗪的檢出限為0.000 55 μg·kg-1、定量限為0.001 8 μg·kg-1；吡蟲(chóng)啉的檢出限為0.001 μg·kg-1、定 量 限 為0.003 3 μg·kg-1；多 菌 靈 的 檢 出 限 為0.000 15 μg·kg-1、 定 量 限 為0.000 49 μg·kg-1；啶 蟲(chóng) 脒 的 檢 出 限 為0.000 19 μg·kg-1、定 量 限 為0.000 65 μg· kg-1；咪鮮胺的檢出限為0.000 061 μg·kg-1、定量限為0.000 202 μg·kg-1。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，建立的檢測(cè)木瓜干、香蕉干、葡萄干中噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉、多菌靈、咪鮮胺和啶蟲(chóng)脒的方法，加標(biāo)回收率在79.64%～100.60%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.2%～4.9%。5種農(nóng)藥殘留的檢出限均小于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 23200.121—2021所給出的檢出限。當(dāng)針對(duì)性檢測(cè)水果干制品的這5種農(nóng)藥殘留時(shí)，此方法在樣品前處理過(guò)程中所用的時(shí)間簡(jiǎn)短，過(guò)程簡(jiǎn)單，容易操作，再結(jié)合靈敏度較高的檢測(cè)儀器，能夠在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物的提取和檢測(cè)，且完全滿(mǎn)足農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求，有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，可為水果制品中多種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。