UPLC-Q-TOF-MS法快速分析石楠葉中化學成分

馬永犇，王春龍，王鳳霞，王 夢，田 偉，吳玲芳*，牛麗穎*

UPLC-Q-TOF-MS法快速分析石楠葉中化學成分

馬永犇1, 2, 3，王春龍4，王鳳霞1, 2, 3，王 夢1, 2, 3，田 偉1, 2, 3，吳玲芳1, 2, 3*，牛麗穎1, 2, 3*

1. 河北中醫(yī)學院，河北 石家莊 050091 2. 河北省中藥配方顆粒技術創(chuàng)新中心，河北 石家莊 050091 3. 中藥材品質評價與標準化河北省工程研究中心，河北 石家莊 050091 4. 盈科瑞（天津）創(chuàng)新醫(yī)藥研究有限公司，天津 300382

采用超高效液相色譜串聯(lián)飛行時間質譜（UPLC-Q-TOF-MS）法快速分析石楠葉化學成分。色譜柱為Waters BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動相為乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫，體積流量0.3 mL/min。采用peakview 1.2軟件解析樣品和混合對照品質譜圖，得到化合物的精確相對分子質量、多級質譜數(shù)據(jù)、質譜碎片離子信息等，結合文獻報道進行成分鑒定。共鑒定了98個化學成分，主要包括30個黃酮類成分，24個有機酸類成分，15個苯丙素類成分，14個萜類成分和15個其他類成分，其中95個化合物是首次從該植物中發(fā)現(xiàn)的化學成分。建立的UPLC-Q-TOF-MS法能快速、準確、較全面地鑒定石楠葉藥材化學成分，為石楠葉藥效物質基礎研究提供依據(jù)。

UPLC-Q-TOF-MS；石楠葉；黃酮；有機酸；酚酸；苯丙素；三萜類

石楠Lindl. 是薔薇科石楠屬Lindl. 植物，石楠的藥用部位為其干燥葉片，稱為石楠葉，現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥材第一冊》（1992年版）。石楠葉是彝族常用藥材，性平，味辛、苦，有小毒，具有祛風補腎的功效，用于腰背酸痛、腎虛腳弱、偏頭痛、風疹、風痹、風濕筋骨痛、陽痿遺精等癥。石楠葉呈長橢圓形或長倒卵形，長8～16 cm，寬2.5～6.5 cm。廣泛分布于長江流域及秦嶺以南。石楠葉別稱石眼樹葉、老少年葉，因獨特的樹形和不斷變幻顏色的葉子而常用作觀賞樹種。

石楠葉用藥歷史悠久，歷代本草都有關于石楠葉的記載，功效均為祛風補腎。《本草擇要綱目》記載石楠葉浸酒飲治頭風，為治風痹腎弱要藥?！侗静菥V目》記載，石南（通石楠），古方為治風痹腎弱要藥，浸酒飲治頭風。《本草從新》記載石楠利筋骨皮毛，逐諸風，療風痹腳弱，浸酒飲，治頭風?！侗静輦湟酚涊d，石楠補內(nèi)傷陰衰，利筋骨皮毛，為治腎虛、腳弱、風痹要藥?！短交菝窈蛣┚址健分杏涊d，石楠丸常服補益元氣，令人筋骨壯健，耳目聰明，婦人血氣亦可服之不拘候。

目前關于石楠葉的現(xiàn)代研究報道較少，現(xiàn)有的報道多傾向于臨床研究，主要是治療不孕癥、婦科疾病和男性疾病的臨床應用。關于石楠葉化學成分研究的僅有少量文獻報道，崔俊鳳等[1]采用HPLC法測定不同產(chǎn)地石楠葉中熊果酸的含量。羅曉清等[2]采用RP-HPLC法測定石楠葉中熊果酸和齊墩果酸的含量。周玉等[3]采用超臨界CO2流體萃取石楠葉中的揮發(fā)油，經(jīng)GC-MS對揮發(fā)油成分進行分離和鑒定，共鑒定出55種化學成分，均為極性較小的脂溶性成分。本研究關注石楠葉中非揮發(fā)性成分，首次采用UPLC-Q-TOF-MS法對石楠葉化學成分進行指認，共鑒別了98個成分，除齊墩果酸、α-石竹烯和β-石竹烯為文獻已經(jīng)報道的，另外95個均是首次從石楠葉中發(fā)現(xiàn)的，本研究為石楠葉藥效物質研究提供基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters超高效液相色譜；ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm，美國Waters公司）；SCIEX Triple-TOF 6600+質譜系統(tǒng)（美國AB公司）；BSA224S-CW電子天平（德國賽多利斯）；KQ-250型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料

石楠葉經(jīng)楚雄彝族自治州中醫(yī)院名余惠祥副主任醫(yī)師鑒定為薔薇科植物石楠Lindl.的干燥葉片。

對照品腺苷（批號110879-201703，質量分數(shù)99.7%）、蘋果酸（批號190013-201702，質量分數(shù)99.7%）、表兒茶素（批號110878-201703，質量分數(shù)99.7%）、阿魏酸（批號110773-201915，質量分數(shù)99.4%）、蘆?。ㄅ?00080-201811，質量分數(shù)91.7%）、異槲皮苷（批號111809-201804，質量分數(shù)97.2%）、金絲桃苷（批號111521-201507，質量分數(shù)94.3%）、槲皮素（批號100081-201610，質量分數(shù)99.8%）、山柰酚（批號110861-202013，質量分數(shù)93.2%）黃芩苷（批號110715-202122，質量分數(shù)94.2%），購自中國食品藥品檢定研究院；紫云英苷（批號MUST-16030810，質量分數(shù)98.81%）購自成都曼思特生物科技有限公司。屈臣氏蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）、甲醇、乙腈為色譜純（德國默克醫(yī)藥生物科技公司），其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 供試品溶液的制備

取石楠葉藥材，粉碎過40目篩，精密稱取藥材粉末0.1 g置具塞三角瓶中，加入50%甲醇20 mL，超聲（功率500 W）提取10 min，靜置放涼至室溫，補足減失質量。樣品用12 000 r/min離心10 min取上清液，過0.22 μm微孔濾膜備用。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取對照品金絲桃苷10.79 mg、黃芩苷11.84 mg、表兒茶素7.04 mg、阿魏酸11.21 mg、蘋果酸10.55 mg、紫云英苷11.06 mg、槲皮素10.80 mg、蘆丁10.60 mg、異槲皮苷12.20 mg、兒茶素4.25 mg和腺苷9.91 mg于25 mL量瓶中，加入分析純甲醇定容至25 mL并溶解制備成母液，將母液稀釋1000倍，過0.22 μm微孔濾膜，供分析用。溶液中各對照品質量濃度分別為金絲桃苷0.43 μg/mL、黃芩苷0.47 μg/mL、表兒茶素0.28 μg/mL、阿魏酸0.45 μg/mL、蘋果酸0.42 μg/mL、紫云英苷0.44 μg/mL、槲皮素0.43 μg/mL、蘆丁0.42 μg/mL、異槲皮苷0.49 μg/mL、兒茶素0.17 μg/mL和腺苷0.40 μg/mL。

2.3 色譜和質譜條件

2.3.1 液相色譜條件 采用梯度洗脫（0～6 min，10% A；6～9 min，10%～14% A；9～18 min，14%～18% A；18～2 min，18%～23% A；22～26 min，23%～29% A；26～29 min，29%～40% A；29～31 min，40%～90% A）。體積流量0.3 mL/min，柱溫25℃，進樣體積1 μL。

2.3.2 質譜條件 SCIEX Triple-TOF 6600+質譜系統(tǒng)采用電噴霧離子源（ESI），正、負離子模式，電壓分別為5500V/?4500V，離子源溫度為550℃，霧化氣344.74 kPa，輔助氣344.74 kPa，氣簾氣241.32 kPa，DP：±80 V，CE：（40±20）V。一級質譜母離子掃描范圍為/100～1500，IDA設置響應值超過100 cps的15個最高峰進行二級質譜掃描，子離子掃描范圍為/50～1000，開啟動態(tài)背景扣除。

2.4 分析方法

由于關于石楠葉化學成分的報道比較少，為了更全面地對石楠葉中化學成分進行鑒定，將化學成分檢索范圍擴大到薔薇科，建立了包括化合物的中、英文名稱、分子式、精確相對分子質量等信息的本地數(shù)據(jù)庫。將液質聯(lián)用儀采集的數(shù)據(jù)導入Peakview 1.2軟件中，結合所建立的本地數(shù)據(jù)庫、Chem spider（http://www.chemspider.com/）和Chem book（https:// www.chemicalbook.com/）數(shù)據(jù)庫得到化合物可能的分子式。采用Analyst TF 1.6和Peakview 1.2（AB SCIEX）軟件對石楠葉的質譜數(shù)據(jù)進行解析，按偏差小于5.0×10?6、同位素分布正確及含有二級質譜裂解碎片的原則，確定化合物的分子式，匹配可能的化合物。根據(jù)二級碎片信息和檢索的化合物裂解過程中產(chǎn)生的碎片信息，分析總結化合物的質譜裂解規(guī)律。

3 結果

3.1 化學成分的鑒定

通過查閱國內(nèi)外文獻以及相關的數(shù)據(jù)庫，建立薔薇科48個屬的735個化學成分的本地數(shù)據(jù)庫。對提取溶劑、色譜條件、質譜條件等進行了優(yōu)化，選擇最優(yōu)的條件對石楠葉供試液進行UPLC-Q-TOF-MS分析。正離子模式下顯示出更為豐富的信息，因此本研究選擇正離子模式所得的質譜數(shù)據(jù)進行解析，正離子模式下樣品和混合對照品的總離子流圖見圖1、2。根據(jù)化合物相對分子質量、二級質譜碎片信息及在線數(shù)據(jù)庫的檢索，共鑒定了98個成分，包括30個黃酮類成分，24個有機酸類成分，16個苯丙素類成分，14個萜類成分和15個其他類成分，如表1所示。

圖1 石楠葉樣品總離子流圖

1-腺苷 2-蘋果酸 3-表兒茶素 4-阿魏酸 5-蘆丁 6-異槲皮苷 7-金絲桃苷 8-紫云英苷 9-黃芩苷 10-槲皮素 11-山柰酚

表1 石楠葉中鑒定出的98個化合物

Table 1 98 compounds identified in Folium Photiniae

峰號tR/min分子式實驗值理論值偏差(×10?6）碎片離子（MS）化合物名稱 1b0.59C6H10O4147.065 2 [M＋H]+146.057 9?2.7101.017 1 [M＋H－C2H6O]+琥珀酸單乙酯 2e0.59C7H6O3139.039 0 [M＋H]+138.031 7?3.5111.042 8 [M＋H－C2H4]+, 121.033 0 [M＋H－H2O]+原兒茶醛 3b0.60C7H6O3139.039 0 [M＋H]+138.031 7?3.5111.042 8 [M＋H－C2H4]+, 121.033 0 [M＋H－H2O]+水楊酸 4b0.61C7H6O3139.039 0 [M＋H]+138.031 7?3.5111.042 8 [M＋H－C2H4]+, 121.033 0 [M＋H－H2O]+對羥基苯甲酸 5e0.79C10H13N5O4268.104 0 [M＋H]+267.096 8?1.4136.061 1 [M＋H－C5H9O4]+, 119.034 3 [M＋H－C5H11NO4]+腺苷 6c0.80C9H8O3182.081 2 [M＋NH4]+164.047 3?3.7119.047 2 [M＋NH4－CH5O2N]+, 123.046 9 [M＋NH4－C2H5ON]+對香豆酸 7b0.84C4H6O5152.055 4 [M＋NH4]+134.021 52.5135.032 9 [M＋NH4－NH3]+蘋果酸 8c1.16C11H12O4209.080 8 [M＋H]+208.073 6?1.9132.901 9 [M＋H－C2H4O3]+, 193.084 8 [M＋H－O]+甲基阿魏酸 9b1.66C7H6O4155.033 6 [M＋H]+154.026 6?0.7137.027 3 [M＋H－H2O]+, 109.027 4 [M＋H－CH2O2]+龍膽酸 10b1.66C7H6O4155.033 6 [M＋H]+154.026 6?0.7137.027 3 [M＋H－H2O]+, 109.027 4 [M＋H－CH2O2]+原兒茶酸 11b1.73C8H8O4169.049 5 [M＋H]+168.042 3?3.4115.056 2 [M＋H－C3H2O]+, 139.056 4 [M＋H－CH2O]+香草酸 12b2.13C9H10O3167.070 3 [M＋H]+166.063 0?2.9123.046 6 [M＋H－C2H4O]+, 105.040 4 [M＋H－C2H6O2]+, 121.028 9 [M＋H－C2H6O]+, 151.040 7 [M＋H－CH4]+羅布麻寧 13e2.13C15H22O9369.115 6 [M＋Na]+346.126 4?0.9185.041 3 [M＋Na－C6H9O5Na]+, 167.069 9 [M＋Na－C6H11O6Na]+4-(羥基甲基)-2,6-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷 14c3.79C10H10O4195.065 2 [M＋H]+194.057 9?4.3135.043 4 [M＋H－C2H4O2]+, 105.030 2 [M＋H－C3H6O3]+, 163.031 2 [M＋H－CH4O]+異阿魏酸 15c3.79C10H10O4195.065 2 [M＋H]+194.057 9?4.3135.043 4 [M＋H－C2H4O2]+, 105.030 2 [M＋H－C3H6O3]+, 133.022 7 [M＋H－CH2O3]+, 163.031 2 [M＋H－CH4O]+反式阿魏酸 16c3.79C10H10O4195.065 2 [M＋H]+194.057 9?4.3135.043 4 [M＋H－C2H4O2]+, 105.030 2 [M＋H－C3H6O3]+, 163.031 2 [M＋H－CH4O]+順式阿魏酸 17c4.20C9H6O4179.033 8 [M＋H]+178.026 6?4.2133.031 4 [M＋H－CH2O2]+, 123.045 6 [M＋H－C2O2]+，135.015 4 [M＋H－CO2]+7,8-二羥基香豆素 18c4.21C16H18O9372.129 0 [M＋NH4]+354.095 1?2.4163.038 8 [M＋NH4－C7H15O6N]+, 145.027 6 [M＋NH4－C7H17O7N]+, 135.043 1 [M＋NH4－C8H15O7N]+, 117.032 2 [M＋NH4－C8H17O8N]+綠原酸 19c4.21C18H22O9400.160 2 [M＋NH4]+382.126 4?1.8163.038 3 [M＋NH4－C9H19O6N]+, 145.027 3 [M＋NH4－C9H21O7N]+, 117.029 7 [M＋NH4－C13H17O6N]+, 135.044 5 [M＋NH4－C10H19O7N]+綠原酸乙酯 20c4.21C9H6O4179.033 9 [M＋H]+178.026 6?4.2133.031 4 [M＋H－CH2O2]+, 109.034 1 [M＋H－C3H2O2]+, 123.045 6 [M＋H－C2O2]+, 135.015 4 [M＋H－CO2]+七葉內(nèi)酯 21a4.26C22H22O11485.105 4 [M＋Na]+462.116 2?2.1265.044 1 [M＋Na－C6H12O6－OH]+當藥黃素 22b4.71C10H12O4197.080 8 [M＋H]+196.073 6?4.3151.039 3 [M＋H－C2H6O]+, 123.042 3 [M＋H－C3H6O2]+短葉蘇木酚 23e5.13C20H27NO11475.192 2 [M＋NH4]+457.158 4?0.9145.049 1 [M＋NH4－C14H22N2O7]+, 163.058 9 [M＋NH4－C14H20N2O6]+1H-吲哚-3-基-4-O-β- D-吡喃葡萄糖基- β-D-吡喃葡萄糖苷 24a5.40C30H26O12579.149 7 [M＋H]+578.142 4?0.7127.038 4 [M＋H－C23H16O10]+, 123.045 4 [M＋H－C23H20O10]+, 163.040 5 [M＋H－C21H20O9]+, 135.043 1 [M＋H－C22H20O10]+原花青素B1

續(xù)表1

峰號tR/min分子式實驗值理論值偏差(×10?6)碎片離子（MS）化合物名稱 25a5.41C30H26O12579.149 7 [M＋H]+578.142 4?0.7135.043 1 [M＋H－C22H20O10]+, 151.043 1 [M＋H－C22H20O9]+原花青素B2 26a6.24C15H14O6291.086 3 [M＋H]+290.079 0?1.6139.039 7 [M＋H－C8H8O3]+, 123.042 7 [M＋H－C8H8O4]+, 207.061 6 [M＋H－C4H4O2]+(+)-兒茶素 27a6.25C15H14O6291.086 3 [M＋H]+290.079 0?1.6139.039 7 [M＋H－C8H8O3]+, 123.042 7 [M＋H－C8H8O4]+, 207.061 6 [M＋H－C4H4O2]+(-)-表兒茶素 28b7.40C8H8O3153.054 6 [M＋H]+152.047 3?4.3121.026 5 [M＋H－CH4O]+水楊酸甲酯 29b7.41C8H8O3153.054 6 [M＋H]+152.047 3?4.3121.026 5 [M＋H－CH4O]+對羥基苯乙酸 30b7.43C8H8O3153.054 6 [M＋H]+152.047 3?4.3121.026 5 [M＋H－CH4O]+茴香酸 31a8.17C45H38O18867.213 1 [M＋H]+866.205 81.0245.052 2 [M＋H－C32H30O13]+, 287.061 7 [M＋H－C30H28O12]+原花青素C1 32c8.40C10H10O3179.070 3 [M＋H]+178.063 0?4.0105.067 5 [M＋H－C3H5O－OH]+松柏醛 33c8.49C10H10O3179.070 3 [M＋H]+178.063 0?4.0105.067 5 [M＋H－C3H5O－OH]+阿魏醛 34a8.50C17H16O5301.107 1 [M＋H]+300.100 0?1.8120.992 2 [M＋H－C9H8O4]+, 123.011 2 [M＋H－C10H10O3]+, 135.107 8 [M＋H－C9H10O3]+杜鵑素 35c8.51C10H10O3179.070 3 [M＋H]+178.063 0?4.0105.067 5 [M＋H－C2HO2－OH]+對香豆酸甲酯 36e11.13C16H28O7355.172 3 [M＋Na]+332.183 5?0.6163.045 7 [M＋Na－C10H17O2]+, 250.984 6 [M＋Na－CH3－C5H6]+羅哌啶 37a12.29C15H10O7303.0548 [M＋H]+302.042 7?3.4153.018 3 [M＋H－C8H6O3]+, 137.023 5 [M＋H－C8H6O4]+, 165.020 3 [M＋H－C7H6O3]+, 285.047 7 [M＋H－H2O]+, 123.041 6 [M＋H－C9H8O4]+槲皮素 38a12.29C15H10O7303.049 9 [M＋H]+302.042 7?3.4153.018 3 [M＋H－C8H6O3]+, 137.023 5 [M＋H－C8H6O4]+, 165.020 3 [M＋H－C7H6O3]+, 285.047 7 [M＋H－H2O]+草質素 39a12.29C21H20O12465.102 8 [M＋H]+464.095 5?4.7303.050 4 [M＋H－C6H10O5]+槲皮素-4′-O-葡萄糖苷 40a12.29C21H20O12465.102 8 [M＋H]+464.095 5?4.7303.050 4 [M＋H－C6H10O5]+異槲皮苷 41a12.29C21H20O12465.102 8 [M＋H]+464.095 5?4.7303.050 4 [M＋H－C6H10O5]+金絲桃苷 42e12.30C19H28O10439.157 5 [M＋Na]+416.168 30.4147.042 6 [M＋Na－C13H17O6Na]+, 291.069 8 [M＋Na－C2H3O－C5H6ONa]+, 356.973 8 [M＋Na－C2H3O2Na]+, 388.965 8 [M＋Na－C2H3Na]+戊-4-烯基-2,3,4,6-四- O-乙酰基-D-甘露吡喃糖苷 43a12.50C27H30O16611.160 7 [M＋H]+610.153 4?0.3303.049 1 [M＋H－C12H20O9]+蘆丁 44a13.60C15H10O6287.055 0 [M＋H]+286.047 7?1.4153.020 3 [M＋H－C8H6O2]+, 137.022 9 [M＋H－C8H6O3]+山柰酚 45a13.98C27H30O15595.165 8 [M＋H]+594.158 5?2.5287.055 7 [M＋H－C15H16O7]+煙花苷 46a13.98C27H30O15595.165 8 [M＋H]+594.158 5?2.5287.055 7 [M＋H－C15H16O7]+3,6-二葡萄糖基芹菜素 47e14.06C41H32O26958.152 0 [M＋NH4]+940.118 2?0.3153.017 6 [M＋NH4－C34H31O22N]+, 771.101 7 [M＋NH4－C7H9O4N]+1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖 48a14.13C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?1.4287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+槲皮苷 49a14.14C15H10O6287.055 0 [M＋H]+286.047 7?1.4153.020 3 [M＋H－C8H6O2]+, 137.022 9 [M＋H－C8H6O3]+，163.045 1 [M＋H－C6H4O3]+木犀草素 50a14.15C15H10O6287.055 0 [M＋H]+286.047 7?2.6153.020 3 [M＋H－C8H6O2]+, 147.045 9 [M＋H－C6H4O4]+野黃芩素 51a14.16C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+山柰酚-4'-葡萄糖苷 52a14.17C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+木犀草素-7-O-葡萄糖苷 53a14.18C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+山柰酚-3-O-半乳糖苷 54a14.19C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+紫云英苷 55a14.20C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+木犀草素-5-O-葡萄糖苷 56c14.25C25H24O12517.134 1 [M＋H]+516.126 8?2.4163.038 8 [M＋H－C16H18O9]+異綠原酸C

續(xù)表1

續(xù)表1

峰號tR/min分子式實驗值理論值偏差(×10?6)碎片離子（MS）化合物名稱 80a28.32C30H24O12594.160 6 [M＋NH4]+576.126 8?0.2533.115 8 [M＋NH4－C2H7ON]+原花青素A6 81d28.34C15H24205.195 0 [M＋H]+204.187 8?1.4149.022 6 [M＋H－C4H8]+, 121.026 0 [M＋H－C6H12]+, 107.077 9 [M＋H－C7H14]+β-石竹烯 82a28.34C15H12O2225.091 0 [M＋H]+224.083 7?2.6105.033 2 [M＋H－C8H8O]+, 197.093 0 [M＋H－CO]+, 181.064 5 [M＋H－C2H4O]+黃烷酮 83e28.51C18H39N270.315 5 [M＋H]+269.308 30.5144.076 8 [M＋H－C9H18]+, 102.130 2 [M＋H－C12H24]+, 155.060 7 [M＋H－C7H17N]+, 158.094 1 [M＋H－C8H16]+，184.204 2 [M＋H－C6H14]+N,N-二甲基-1-十六烷基胺 84e28.67C11H16O3197.117 2 [M＋H]+196.109 9?2.9151.118 0 [M＋H－CH2O2]+, 179.102 6 [M＋H－H2O]+黑麥草內(nèi)酯 85e28.91C18H34O284.294 8 [M＋NH4]+266.261 0?4.5149.055 8 [M＋NH4－C7H21ON]+亞麻醇 86b28.93C24H38O4391.284 3 [M＋Na]+390.277 0?0.8149.022 4 [M＋Na－C16H34O]+, 333.202 9 [M＋Na－C4H10]+，361.220 9 [M＋Na－C2H6]+鄰苯二甲酸二辛酯 87b28.94C24H38O4391.284 3 [M＋H]+390.277 0?0.8149.022 4 [M＋H－C16H34O]+, 333.202 9 [M＋H－C4H10]+，361.220 9 [M＋H－C2H6]+鄰苯二甲酸二(2-乙基)已酯 88e28.98C18H30O263.236 9 [M＋H]+262.229 7?4.0233.105 6 [M＋H－C2H6]+2,6-二叔丁基-4-仲丁基苯酚 89d29.00C15H24205.195 1 [M＋H]+204.187 8?1.4121.029 9 [M＋H－C6H12]+, 149.027 0 [M＋H－C4H8]+α-石竹烯 90d29.01C15H24205.195 1 [M＋H]+204.187 8?1.4149.022 6 [M＋H－C4H8]+, 121.026 0 [M＋H－C6H12]+, 105.078 2 [M＋H－C7H16]+, 107.077 9 [M＋H－C7H14]+, 109.101 2 [M＋H－C7H12]+, 119.082 3 [M＋H－C6H14]+, 149.128 6 [M＋H－C4H8]+α-金合歡烯 91b29.10C21H36O4353.268 6 [M＋H]+352.261 4?1.3121.100 8 [M＋H－C12H24O4]+, 105.069 7 [M＋H－C13H28O4]+, 261.223 8 [M＋H－C3H8O3]+, 107.084 1 [M＋H－C13H26O4]+, 131.087 0 [M＋H－C14H22O2]+, 135.114 1 [M＋H－C11H22O4]+亞麻酸甘油酯 92b29.12C18H30O2279.231 9 [M＋H]+278.224 6?1.7149.022 5 [M＋H－C7H14O2]+, 121.028 6 [M＋H－C9H18O2]+亞麻酸 93d29.21C15H22O2252.195 8 [M＋NH4]+234.162 00.6211.107 0 [M＋NH4－C2H3N]+蜂斗菜內(nèi)酯A 94d29.27C30H46O5487.341 2 [M＋H]+486.334 5?2.3159.115 4 [M＋H－C21H28O3]+, 173.131 3 [M＋H－C20H26O3]+, 199.149 8 [M＋H－C19H28O2]+, 187.144 5 [M＋H－C19H24O3]+, 249.153 7 [M＋H－C15H26O2]+, 265.196 5 [M＋H－C14H22O2]+葛蘭素A 95b29.36C18H32O2281.247 5 [M＋H]+280.240 2?0.4145.097 9 [M＋H－C10H16]+, 151.032 0 [M＋H－C7H14O2]+, 248.985 6 [M＋H－CH4O]+, 109.101 2 [M＋H－C10H20O2]+, 111.117 6 [M＋H－C10H18O2]+, 149.024 8 [M＋H－C7H16O2]+, 151.023 1 [M＋H－C7H14O2]+亞油酸 96b29.43C12H14O4223.096 5 [M＋H]+222.089 2?2.3149.022 0 [M＋H－C3H6O2]+, 121.028 6 [M＋H－C5H9O2]+鄰苯二甲酸二乙酯 97b29.83C16H22O4279.158 9 [M＋H]+278.151 8?0.4149.026 5 [M＋H－C8H18O]+, 121.029 1 [M＋H－C9H18O2]+鄰苯二甲酸二正丁酯 98b29.84C16H22O4279.159 1 [M＋H]+278.151 8?0.4149.026 5 [M＋H－C8H18O]+, 121.029 1 [M＋H－C9H18O2]+鄰苯二甲酸二異丁酯

a-黃酮類 b-有機酸類 c-苯丙素類 d-萜類 e-其他類

a-flavonoids b-organic acids c-phenylpropanoids d-terpenoids e-others

3.2 質譜裂解規(guī)律總結

根據(jù)文獻報道的薔薇科植物中含有的化學成分建立本地數(shù)據(jù)庫，從石楠葉總離子流圖中選擇較明顯的峰，結合對照品質譜圖，推測其化學結構，共匹配98種化合物。分別對每類化學成分質譜裂解規(guī)律進行總結。

3.2.1 黃酮類化合物 黃酮類化合物的基本母核為2-苯基色原酮，以游離或糖苷的形式存在于自然界[4]，黃酮類化合物具有相同的母核，在進行質譜解析過程中具有相似的裂解規(guī)律，黃酮及其苷類在裂解過程中容易發(fā)生糖苷鍵斷裂、C環(huán)的逆狄爾斯-阿爾德（RDA）裂解以及一氧化碳（CO）、二氧化碳（CO2）、水（H2O）等一些中性分子的丟失[5-6]。本實驗共鑒定出33種黃酮類成分。以化合物槲皮素和翻白葉苷A為例，簡述黃酮類化合物的鑒定過程?；衔?7的保留時間為12.29 min，在正離子模式下準分子離子峰[M＋H]+/303.054 8，分子式為C15H10O7，在二級質譜中，主要進行2種方式的裂解，裂解方式1為C 環(huán)的RDA裂解，產(chǎn)生特征碎片離子/153.018 3 [M＋H－C8H6O3]+，裂解方式2為丟失C7H6O3形成離子碎片/165.020 3 [M＋H－C7H6O3]+，與文獻報道裂解方式一致[7]。故推測其為槲皮素，二級碎片和裂解方式如圖3所示?；衔?3的保留時間為17.50 min，在正離子模式下形成準分子離子[M＋H]+/595.144 2，分子式為C30H26O13，在二級質譜圖主要發(fā)生糖苷鍵的斷裂，產(chǎn)生黃酮苷元/287.055 2和苯丙素苷元/147.044 0，見圖4，與文獻報道裂解方式一致[8]，推測其為翻白葉苷A。

3.2.2 有機酸類成分 本研究共檢測到有機酸類成分（包括脂肪酸和酚酸類成分）有24個，在MS掃描過程中均以[M＋H]+的準分子離子峰形式存在?，F(xiàn)以化合物鄰苯二甲酸二正丁酯為例進行裂解規(guī)律分析。在正離子模式下，化合物97的保留時間為29.83 min形成準分子離子/279.158 9 [M＋H]+，分子式為C16H22O4，在二級質譜中，主要離子碎片有/149.026 5 [M＋H－C8H18O]+，/121.029 1 [M＋H－C9H18O2]+，見圖5，該化合物的質譜裂解方式與文獻報道一致[9]，推測該化合物為鄰苯二甲酸二正丁酯。有機酸中酚酸類物質成分極性強，故出峰時間靠前，共鑒定出14種酚酸類化合物，化合物22在正離子模式下保留時間為4.71 min形成準分子離子/197.080 8 [M＋H]+，分子式為C10H12O4，在二級質譜中，主要離子碎片有/151.039 3 [M＋H－C2H6O]+、123.042 3 [M＋H－C3H6O2]+，根據(jù)文獻數(shù)據(jù)[10-11]對比可知此化合物為短葉蘇木酚。圖6為短葉蘇木酚二級質譜圖及裂解方式。

圖3 槲皮素的二級質譜圖及裂解規(guī)律

圖4 翻白葉苷A的二級質譜圖及裂解規(guī)律

圖5 鄰苯二甲酸二正丁酯二級質譜圖及裂解規(guī)律

3.2.3 苯丙素類 苯丙素是一類由C6-C3結構單元構成的一類化合物，從質譜中檢測出15個苯丙素類成分，包含3個香豆素類成分：7,8-二羥基香豆素、七葉內(nèi)酯、東莨菪內(nèi)酯。12個簡單苯丙素類成分：對香豆酸、甲基阿魏酸、異阿魏酸、反式阿魏酸、順式阿魏酸、綠原酸、綠原酸乙酯、松柏醛、阿魏醛、對香豆酸甲酯、異綠原酸C、丁香酚。以東莨菪內(nèi)酯為例，簡述其鑒定過程。在正離子模式下保留時間為22.98 min，準分子離子峰/193.049 5 [M＋H]+，推測其分子式為C10H8O4。該碎片離子繼續(xù)失去CO2中性分子得到產(chǎn)物離子/149.029 9 [M＋H－CO2]+。結合文獻報道[12]對東莨菪素裂解的介紹，推測其為東莨菪內(nèi)酯。

圖6 短葉蘇木酚的二級質譜圖及其裂解規(guī)律

3.2.4 萜類成分 根據(jù)質譜數(shù)據(jù)結果分析，推測出14個萜類成分，其中包括9個三萜類成分和3個倍半萜類成分和1個二萜，其中4個倍半萜為β石竹烯、α-石竹烯、蜂斗菜內(nèi)酯A和α-金合歡烯，根據(jù)其log值區(qū)分其保留時間，其中9個三萜類成分為齊墩果烷型的五環(huán)三萜類成分，分別為葛蘭素A、委陵菜酸、阿江欖仁酸、鐵冬青酸、積雪草酸、野鴉椿酸、2, 24-二羥基熊果酸、覆盆子酸和2α,19α,23-三羥基齊墩果酸。

3.2.5 其他類成分 從石楠葉提取液中鑒定出15個其他類成分。包括1個鞣質類化合物：1,2,3,4,6-五--沒食子酰葡萄糖；1個胺類成分,-二甲基-1-十六烷基胺；2個生物堿類成分腺苷和1-吲哚-3-基-4--β--吡喃葡萄糖基-β--吡喃葡萄糖苷；1個酮類成分β-紫羅蘭酮；1個脂肪醇類亞麻醇；1個苯甲醇類成分2-苯氧基-1-丙醇；3個苯酚類成分：4-(羥基甲基)-2,6-二甲氧基苯基-β--吡喃葡萄糖苷、羅布麻寧和原兒茶醛和1個脂肪醇類化合物亞麻醇，此外還有二氫獼猴桃內(nèi)酯、姜酮酚、2,6-二叔丁基-4-仲丁基苯酚和羅哌啶。

4 討論

本研究首次基于UPLC-Q-TOF-MSn法對彝族藥石楠葉中化學成分進行了分析，共鑒定了98種成分，其中黃酮類成分30個、有機酸類成分24個、苯丙素類成分15個、萜類成分14個和其他類化合物15個，除了齊墩果酸、α-石竹烯和β石竹烯為文獻已經(jīng)報道的，另外95個均為首次從石楠葉中報道的化學成分。對結果進行分析發(fā)現(xiàn)石楠葉中黃酮和酚酸類成分種類最多，占比大于一半，推測這2類成分可能為石楠葉發(fā)揮藥效的物質基礎。黃酮類化合物具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤以及保護心腦血管等藥理作用，近年來備受關注[13]，酚酸類成分具有抗菌、抗癌、解熱鎮(zhèn)痛[14-16]等藥理作用。從石楠葉中鑒定出的化學成分可能為相關藥理作用的活性成分，但是如何將化學成分與藥效相關聯(lián)，以確定石楠葉藥效物質是今后的一個研究方向。

通過查閱文獻發(fā)現(xiàn)目前關于石楠葉化學成分研究的報道比較少，石楠葉化學成分的相關研究還有很大空間。石楠葉生物多樣性評價及其與化學成分種類及含量的相關性研究、石楠葉中活性成分的積累規(guī)律和最佳采摘時間研究、影響石楠葉化學成分的環(huán)境條件研究等領域，都可以作為今后石楠葉的研究方向[17]。

目前中醫(yī)藥市場需求量大，全國各地都在發(fā)展中藥材種植，但石楠葉藥效物質基礎沒有明確，活性成分的積累規(guī)律和最佳采摘時間、影響化學成分含量的環(huán)境條件等問題均有待解決，這些都是制約石楠葉種植業(yè)發(fā)展的瓶頸問題，而解決這些問題的基礎都是化學成分研究。目前石楠葉的臨床應用僅依靠中醫(yī)基礎理論，缺乏現(xiàn)代化研究，不利于中醫(yī)藥的現(xiàn)代化發(fā)展。另外石楠葉的研究可能涉及農(nóng)學、園林、臨床醫(yī)學等不同學科，需要進行多學科的交叉融合研究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Rapid identification of chemical components ofbased on UPLC-Q-TOF-MS

MA Yong-ben1, 2, 3, WANG Chun-long4, WANGFeng-xia1, 2, 3, WANG Meng1, 2, 3, TIAN Wei1, 2, 3, WU Ling-fang1, 2, 3, NIU Li-ying1, 2, 3

1. Hebei University of Traditional Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, China 2. Hebei Traditional Chinese Medicine Formula Granule Engineering & Technology Innovate Center, Shijiazhuang 050091, China 3. Quality Evaluation & Standardization Engineering Research Center of Traditional Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, China 4. Yingkerui (Tianjin) Innovative Medicine Research Co., Ltd., Tianjin 300382, China

UPLC-Q-TOF-MS was used to quickly analyze the chemical components of.The chromatographic column was waters BEH C18(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm). The mobile phase was acetonitrile (A)-0.1% formic acid water (B). The flow rate was 0.3 mL/min. To obtain the accurate molecular weight, multi-stage mass spectrum data, and mass fragment ion information, etc., peak view 1.2 software was used to analyze the mass spectra. The components were identified in combination with literature reports.A total of 98 chemical components were identified, mainly including 30 flavonoids, 24 organic acids, 15 phenylpropanoids, 14 terpenoids and 15 other components, of which 95 components are first identified from of.The method established in this study can quickly, accurately and comprehensively identify the chemical constituents of, and provide the basis for the research on the material basis of its medicinal effect.

UPLC-Q-TOF-MS;; flavonoids; organic acid; phenolic acids; triterpenoids

R284.1

A

0253 - 2670(2022)20 - 6401 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.20.012

2022-02-16

河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃項目（2023114）；河北省自然基金資助項目（H2019423050）；河北省高等學?？茖W技術研究項目（QN2019119）

馬永犇（1997—），男，碩士研究生，研究方向為中藥藥效物質及作用機制研究。Tel: (0311)89926890 E-mail: Mayongben@hebcm.edu.cn

牛麗穎，博士生導師，二級教授，主要從事中藥藥效物質及作用機制研究。Tel: (0311)89926890 E-mail: niuliyingyy@163.com

吳玲芳，副教授，博士，主要從事中藥藥效物質及作用機制研究。Tel: (0311)89926890 E-mail: fanglingwu@126.com

[責任編輯 王文倩]