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    CK2β與E-cadherin在宮頸癌中的表達及對患者3年生存率的預測價值

    2022-10-14 12:00:40談微微
    甘肅科學學報 2022年5期
    關鍵詞:陽性細胞生存率分化

    胡 靜,朱 莉,談微微

    (江蘇大學第四附屬醫(yī)院婦科,江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

    宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤,其具有侵襲性強、發(fā)病率高和預后極差等特征[1],早期臨床表現(xiàn)較為隱蔽,如陰道出血或陰道排液等,因特異性較弱而被忽視;中晚期通常表現(xiàn)為宮頸潰瘍、坐骨神經(jīng)疼痛及尿毒癥等癥狀,中晚期5年存活期極低,且極易復發(fā),嚴重威脅患者生命安全[2]。目前臨床上首選手術治療宮頸癌,但術后復發(fā)率約為15.86%[3];而針對中晚期宮頸癌患者只能行放療和化療等手段,以減緩癌細胞擴散速度,但其預后極差[4]。研究表明[5],有效的腫瘤預后預測指標可在一定程度上提高患者近、遠期療效,而腫瘤直徑、肝癌轉移及治療方法等參數(shù)均會影響患者預后,但目前尚無統(tǒng)一結論。蛋白激酶CK2β廣泛分布并表達于真核細胞內(nèi),是機體重要的信號傳導因子[6],研究表明[7],CK2β可激活信號通路,拮抗癌細胞凋亡,促進癌細胞增殖,在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。而E-鈣黏蛋白(E-cadherin)是一種跨膜蛋白,廣泛分布并表達于上皮細胞,在維持細胞完整性和極性方面發(fā)揮著重要功效[8]。Rhys等[9]研究表明,E-cadherin的低表達可增強癌細胞增殖、遷移等作用,加重腫瘤患者病情。E-cadherin和CK2β均與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有一定相關性,但針對二者在宮頸癌組織的具體表達及其對宮頸癌患者預后評估的研究相對較少,因此研究通過E-cadherin與CK2β在宮頸癌中的表達及其對患者3年生存率的預測價值,旨在為臨床宮頸癌患者復發(fā)及預后評估提供依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 資料

    研究時間:2013年3月—2017年2月。研究對象:60例宮頸癌患者,其中22例腺癌,38例鱗癌;20例淋巴結轉移。臨床分期:41例Ⅰ~Ⅱ期,19例Ⅲ~Ⅳ。分化程度:26例低分化,34例中高分化。

    納入標準:①所有患者均經(jīng)影像學和病理組織活檢等方式確診為宮頸癌[10];②年齡范圍為18~75歲;③患者臨床病例資料齊全;④首次診斷為宮頸癌,且未經(jīng)過化療、手術治療等;⑤在篩選受試者時獲得患者及家屬同意。

    排除標準:①合并患有自身免疫疾病者;②合并患有其他惡性腫瘤;③心臟、肝及腎等重要臟器官嚴重損傷者;④合并精神疾病者;⑤不配合者。研究經(jīng)江蘇大學第四附屬醫(yī)院倫理委員會審查并批準。

    1.2 E-cadherin與CK2β表達檢測

    分別采集患者治療前宮頸癌和旁癌組織標本,行病理穿刺活檢,并對宮頸組織標本行一系列處理,使其滿足檢測要求。具體操作如下:應用體積分數(shù)10%甲醛溶液行常規(guī)固定包埋操作,制作5 μm石蠟切片,不同梯度乙醇水溶液處理,PBS磷酸鹽緩沖液沖洗3次,在高溫和高壓狀態(tài)下修復3 min,在體積分數(shù)3%雙氧水培育10 min,再用相同PBS緩沖液洗滌3次,并分別滴加CK2β和E-cadherin一抗,室溫下孵育120 min,棄去一抗后,分別滴加二抗,室溫下繼續(xù)孵育60 min,棄去PBS洗滌液。

    檢測方法:在上述樣品中加入DAB顯色劑避光顯色3~5 min,蘇木精染色5 min,脫水至透明色后應用中性樹膠封片,由2名高年資醫(yī)護人員在顯微鏡下觀察并分別評分,取平均值。研究中兔抗人克隆CK2β抗體和鼠抗人E-cadherin抗體、DAB顯色劑和PBS緩沖液均來自北京百奧萊博科技有限公司。

    判定標準[11]:應用半定量計數(shù)方法評估宮頸癌組織和旁癌組織CK2β和E-cadherin表達水平,且免疫組化評分為染色強度評分和陽性細胞評分之積,0~3分為陰性表達,4~9分為陽性表達。陽性細胞評分:顯微高倍鏡下選取10個視野區(qū)域,計算陽性細胞占比,具體評分細則為:陽性細胞占比≤10%,0分;11%≤陽性細胞占比≤25%,1分;26%≤陽性細胞占比≤50%,2分;陽性細胞占比>50%,3分。

    1.3 隨訪

    隨訪時間:3年,從患者入組后即開始,至患者死亡或隨訪時間到達為止。隨訪頻率:前2年每3個月1次,第3年每6個月1次。隨訪內(nèi)容:血清標志物、影像學資料等,并記錄患者總生存期。

    1.4 統(tǒng)計學

    SPSS25.0計數(shù)資料以[n(%)]表示,行χ2檢驗,生存分析行l(wèi)og-rank檢驗,多因素分析行Cox回歸分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 E-cadherin與CK2β表達

    宮頸癌組織E-cadherin與CK2β蛋白表達情況比較見表1。由表1可以看出,宮頸癌組織CK2β蛋白陽性率明顯高于旁癌組織,而宮頸癌組織E-cadherin陽性率明顯低于旁癌組織(P<0.05)。E-cadherin與CK2β在宮頸癌組織和旁癌組織的陽性表達分別見圖1、圖2。

    圖1 免疫組化檢測E-cadherin在組織中的陽性表達

    圖2 免疫組化檢測CK2β在組織中的陽性表達 (×400)

    表1 宮頸組織E-cadherin與CK2β表達情況比較[n(%)]

    2.2 宮頸癌組織E-cadherin與CK2β蛋白表達與患者臨床病理參數(shù)的關系

    宮頸癌組織E-cadherin、CK2β蛋白表達與患者臨床病理參數(shù)的關系見表2。由表2可知,宮頸癌組織E-cadherin、CK2β蛋白與臨床分期、淋巴結轉移和分化程度等標志物有關(P<0.05),而與病理類型、脈管瘤栓、腫瘤直徑深肌層浸潤及宮旁浸潤等標志物無關(P>0.05)。

    表2 宮頸癌組織E-cadherin、CK2β蛋白表達與患者臨床病理參數(shù)的關系[n(%)]

    2.3 宮頸癌患者單因素分析

    單因素分析結果顯示,宮頸癌患者3年生存率與腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、CK2β蛋白表達及E-cadherin表達等指標差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),詳情見表3。由表3可見,CK2β蛋白陽性表達3年生存率為67.50%,明顯低于陰性的95.00%(χ2=5.637,P=0.020);E-cadherin陽性表達3年生存率為86.96%,明顯高于陰性的59.46%(χ2=5.107,P=0.035),不同CK2β蛋白表達和E-cadherin表達生存時間比較分別見圖3、圖4。

    表3 宮頸癌患者3年生存率單因素分析[n(%)]

    圖3 不同CK2β蛋白表達宮頸癌生存時間比較

    圖4 不同E-cadherin表達宮頸癌生存時間比較

    2.4 宮頸癌患者Cox回歸分析

    以單因素差異有統(tǒng)計學意義的指標為自變量,以隨訪期存活狀態(tài)作為因變量(0=存活,1=死亡),進行Cox回歸分析。結果顯示,臨床分期(OR=1.335,95%CI:1.029~1.733)、分化程度 (OR=2.018,95%CI:1.034~3.937)、淋巴結轉移(OR=2.770,95%CI:2.093~3.667)、CK2β蛋白陽性表達(OR=2.563,95%CI:2.102~3.124)和E-cadherin陽性表達(OR=0.415,95%CI:0.339~0.508)是宮頸癌患者3年生存率的獨立影響因素,詳情見表4。

    表4 宮頸癌患者預后Cox回歸分析

    3 討論

    宮頸癌是女性較為常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率僅次于乳腺癌,且發(fā)病群體有年輕化趨勢,嚴重威脅患者生命安全[12]。早期臨床表現(xiàn)特征不明顯,而中晚期宮頸癌擴散和轉移程度較高,子宮切除術和放療、化療等措施無法完全阻斷癌細胞分化和轉移,降低患者生存期,影響預后[13]。目前臨床尚無評估宮頸癌預后的統(tǒng)一標志物,且年齡、淋巴結轉移、腫瘤分型及治療方式等標志物均對預后有一定的影響[14],但無法通過上述諸因素準確判斷。E-cadherin和CK2β在宮頸癌組織中呈異常表達狀態(tài),二者在宮頸癌細胞的增殖、分化上有一定的作用[7,9],但其對宮頸癌預后的研究相對較少,因而本次研究E-cadherin與CK2β在宮頸癌中的表達及其對患者3年生存率的預測價值,旨在為臨床研究提供依據(jù)。

    研究結果顯示,宮頸癌組織CK2β蛋白陽性率明顯高于旁癌組織,而宮頸癌組織E-cadherin陽性率明顯低于旁癌組織(P<0.05),說明CK2β蛋白和E-cadherin參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。針對我院治療的60例宮頸癌患者隨訪3年,Cox多因素分析表明,臨床分期 (OR=1.335,95%CI:1.029~1.733)、分化程度 (OR=2.018,95%CI:1.034~3.937)、淋巴結轉移(OR=2.770,95%CI:2.093~3.667)、CK2β蛋白陽性表達(OR=2.563,95%CI:2.102~3.124)和E-cadherin陽性表達(OR=0.415,95%CI:0.339~0.508)是宮頸癌患者3年生存率的獨立影響因素。淋巴結轉移是癌細胞轉移的主要方式,其可穿透淋巴管壁,且分化或脫落后以淋巴結為中心增殖、分化,加快疾病進程[15]。中高分化型癌細胞具有生長緩慢、惡性程度低等特征,而低分化細胞則相反,具有很強的分化、轉移等潛力,是臨床風險極高的腫瘤分型[16]。腫瘤分期可綜合評估患者腫瘤部位、淋巴結轉移及是否遠處轉移等,臨床分期越高,則提示癌細胞惡性程度越高[17]。

    CK2β歸屬于蛋白激酶,廣泛分布于機體真核細胞中,可發(fā)揮CK2信號傳導作用,而CK2可激活信號傳導途徑阻止宮頸癌細胞的凋亡進程,且還能形成宮頸癌組織血管,對宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展起一定促進作用[18]。E-cadherin是臨床常見的抑癌因子,正常情況下其與機體內(nèi)連環(huán)素有機結合形成復合體結構,在維持上皮細胞結構穩(wěn)定等方面具有重要作用,而宮頸組織發(fā)生癌變后,E-cadherin水平明顯降低,進而破壞上皮細胞結構穩(wěn)定性,提高宮頸癌細胞增殖、分化及遷移的能力,因而E-cadherin是宮頸癌的保護因素[19]。本次研究對象及得出的結論僅限于60 例宮頸癌患者,仍需擴充研究樣本;同時E-cadherin與CK2β蛋白的相關性可作為下一步研究思路,值得臨床進一步研究和推廣。

    綜上所述,E-cadherin、CK2β表達與宮頸癌淋巴結轉移、臨床分期和分化程度相關,且E-cadherin與CK2β是影響宮頸癌患者3年生存率的獨立預后因素。

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