青皮配方顆粒制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

朱 倩，時(shí)向利，張江艷

（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量部，江蘇連云港 222000；2.江蘇康緣醫(yī)藥商業(yè)有限公司質(zhì)量部，江蘇連云港 222000）

青皮是蕓香科植物橘以及相關(guān)變種的干燥幼果或尚未成熟果實(shí)的果皮，最早對(duì)青皮記載出自金·張?jiān)氐摹墩渲槟摇罚骸扒嗥ぶ鳉鉁?，破積結(jié)，少陽(yáng)經(jīng)下藥也”。目前臨床中主要將其用于治療胸肋脹痛、胃痞、疝氣、食積、乳房腫脹、乳核等諸多癥狀。配方顆粒是應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)生產(chǎn)工藝，經(jīng)提取濃縮、干燥、制粒、分裝等工藝將單味中藥飲片制備成可直接沖飲的顆粒制劑，不僅有利于藥物的吸收，更有利于中藥房的調(diào)劑效率，是對(duì)傳統(tǒng)中藥飲片劑型的改革[2]。本次研究將以標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率、橙皮苷含量等作為參照，對(duì)青皮配方顆粒制備工藝進(jìn)行評(píng)價(jià)和優(yōu)化，同時(shí)建立青皮配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以期為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量提供參考。

1 材料

青皮飲片購(gòu)自于中藥飲片廠（批號(hào)分別為2020012、2020033以及2019009），經(jīng)專業(yè)人士鑒定均為蕓香科植物橘及其變種的干燥幼果或未成熟果實(shí)的果皮，符合《中國(guó)藥典》（2020）中關(guān)于青皮藥材的相關(guān)條件；青皮對(duì)照藥材（批號(hào)：121155200502，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；橙皮苷（批號(hào)110721201115，以95.3%計(jì)，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。甲醇（色譜級(jí)）；水（超純水）。

2 方法及結(jié)果

2.1 青皮提取工藝

2.1.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

參考相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本次研究以橙皮苷含量、出膏率作為考察指標(biāo)，以加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)作為因素，應(yīng)用L9（3）4正交表開展實(shí)驗(yàn)研究，見表1。

表1 因素水平

2.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)定及結(jié)果

采用電子天平（MS-105瑞士 Mettler Toledo公司）精準(zhǔn)稱取各個(gè)批次的青皮飲片各3份，每份10g，共9份樣品。根據(jù)設(shè)計(jì)好的正交試驗(yàn)表的研究方法加工青皮煎煮液，然后將煎煮液濃縮，對(duì)濃縮的青皮煎煮液中的橙皮苷含量和出膏率進(jìn)行測(cè)定，見表2。

表2 青皮配方顆粒煎煮正交試驗(yàn)

表3 方差分析表

通過試驗(yàn)結(jié)果可以看出，各個(gè)因素之間影響大小順序分別為C＞A＞B，且以A3B3C2作為煎煮條件時(shí)制備所得的青皮配方顆粒效最佳。在考慮A2與A3，B2與B3之間數(shù)據(jù)相差的差異性無顯著意義，從節(jié)約能耗、降低工時(shí)、節(jié)約生產(chǎn)成本等方面進(jìn)行綜合考慮，選擇A2B2C2作為最佳的青皮配方顆粒提取調(diào)節(jié)，即在加水12倍量、煎煮兩次，每次30min的條件下，即可獲得最佳的煎煮效果。

2.1.3 對(duì)照品指標(biāo)

采用標(biāo)準(zhǔn)湯劑作為配方顆粒衡量基準(zhǔn)制備青皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑。取青皮對(duì)照品飲片10g，12倍加水量浸泡30min后煮沸，文火微沸30min后，再加入10倍量水平煎煮20min，去渣留液。將兩次濾液合并后減壓濃縮到150mL。將制備好的濃縮液利用真空冷凍干燥機(jī)（RE-3000A，上海亞榮生化儀器廠）凍干處理后，即可得到青皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉。

取橙皮苷對(duì)照品適量，加入制備好的50%甲醇（標(biāo)準(zhǔn)品），制備成每1mL含橙皮苷0.15mg的對(duì)照品溶液。

制備青皮配方顆粒時(shí)取青皮飲片2 500g，按照上述設(shè)計(jì)好的流程制備煎煮液，濾過后加入適量的麥芽精，采用噴霧干燥技術(shù)干燥后再次加入適量的麥芽精華和二氧化硅助流，攪拌制粒后制備成青皮配方顆粒。每個(gè)批次各制備一批配方顆粒（QP01、QP02、QP03）。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證

2.3.1 薄層色譜鑒別

取青皮樣本0.2g，研磨后加入10mL甲醇，利用數(shù)控超聲波清洗器（KQ-600型，昆山市超聲儀器有限公司）超聲處理20min后過濾留液，蒸干后再次加入甲醇2mL溶解，制備成供試品溶液。

取制備好的青皮配方顆粒加入甲醇10mL，按照供試品制備方法制成對(duì)照品溶液。另取青皮陰性樣本0.2g，按照供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。取制備好的各組樣本各2μL，對(duì)照藥物溶液1μg，加入1%氯氧化鈉溶液制備的硅膠C薄層板（G型，青島海洋化工有限公司）中，采用乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）作為展開劑，展開至3cm后取出晾干，再次以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液作為展開劑，展至8cm，取出晾干。再噴三氯化鋁溶液，利用暗箱三用紫外分析儀（ZF-7，上海佳鵬科技有限公司）進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)波長(zhǎng)設(shè)定為365nm?？梢姽┰嚻啡芤荷V與對(duì)照藥材溶液色譜對(duì)應(yīng)位置存在著相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照則無干擾。

2.2.2 出膏率測(cè)定

青皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率根據(jù)凍干粉量來計(jì)算，即出膏率=凍干粉重量/湯劑制備所用飲片量 ×100%。青皮配方顆粒出膏率則根據(jù)干燥后的干膏粉量計(jì)算，即配方顆粒出膏率=浸膏干膏粉重量/原料飲片重量 × 100%。通過測(cè)定可見，3個(gè)不同批次青皮提取物出膏率在16.03%～29.14%，均值為25.48%，SD=2.15%。根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算青皮標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率在17.84%～33.12%，而三個(gè)不同批次青皮飲片的出膏率分別為24.83%、26.04%和25.57%，均在標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率范圍之內(nèi)，表明本次研究設(shè)計(jì)的青皮配方顆粒提取工藝合理。

2.2.3 橙皮苷含量測(cè)定

采用A2B2C2作為制備工藝，以標(biāo)準(zhǔn)湯劑的橙皮苷含量作為對(duì)照，對(duì)正交試驗(yàn)準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果可見，標(biāo)準(zhǔn)青皮湯劑的橙皮苷含量為8.01%，而采取A2B2C2作為提取條件時(shí)，青皮樣本的橙皮苷含量為7.90%，通過結(jié)果可以看出，A2B2C2作為提取條件效果良好。

2.4 青皮配方顆粒制備

根據(jù)《中國(guó)藥典》2020版中關(guān)于顆粒劑的相關(guān)操作方法和規(guī)定，以研究設(shè)計(jì)好的提取工藝制備青皮提取物，再將提取物制備成配方顆粒。制備顆粒時(shí)將A2B2CB提取工藝制備的干膏與配料按照1∶1的比例加入輔料，再將濃縮好的藥液加入到全自動(dòng)顆粒機(jī)制備成青皮配方顆粒。

2.5 青皮配方顆粒質(zhì)量檢驗(yàn)

2.5.1 粒度檢測(cè)

3個(gè)批次的青皮各稱取適量制備成青皮配方顆粒，每份10g，分別過5號(hào)篩和1號(hào)篩，分析青皮顆粒中能過5號(hào)篩但未能通過1號(hào)篩的顆粒比例。結(jié)果可見，3個(gè)批次青皮配方顆粒中能夠5號(hào)篩但未能通過1號(hào)篩的顆粒比例分別為11.9%、12.4%和12.7%，均未超過15%，符合《中國(guó)藥典》（2020版）相關(guān)規(guī)定。

2.5.2 水分檢查

根據(jù)《中國(guó)藥典》（2020）中顆粒制劑水分測(cè)定相關(guān)方法，對(duì)制備好的青皮顆粒水分進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，三個(gè)批次青皮配方顆粒水分含量分別為5.08%、4.94%以及5.17%。三個(gè)批次的青皮配方顆粒水分均未超過8%，符合相關(guān)規(guī)定要求。

2.5.3 干燥失重檢查

稱取3個(gè)批次的青皮配方顆粒各10g，置入到電熱恒溫干燥箱內(nèi)，以80℃的溫度恒溫烘烤至顆粒恒重，再次對(duì)顆粒進(jìn)行稱重。結(jié)果可見，3份樣本干燥失重比為0.0131g、0.0139g和0.0111g，干燥失重比平均值為0.0127g，符合相關(guān)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

2.5.4 溶化性檢查

取不同批次的青皮配方顆粒各10g置入到燒杯內(nèi)，加入80℃蒸餾水30mL，對(duì)液體勻速攪拌約5min，觀察顆粒的溶化情況。結(jié)果可見，顆粒在加入熱水后快速溶解，經(jīng)攪拌后出現(xiàn)輕微的渾濁現(xiàn)象，所有顆粒均溶化，符合《中國(guó)藥典》（2020版）相關(guān)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

2.5.5 流動(dòng)相考察

休止角測(cè)定采用固定漏斗法，即將三個(gè)串聯(lián)在一起的漏斗采用鐵架臺(tái)進(jìn)行固定，然后將最下方的漏斗放置在距離水平繪圖紙約1cm高度的位置，然后將顆粒小心地沿著漏斗壁傾倒于漏斗內(nèi)，直至下方顆粒形成的錐體尖端能夠接觸到漏斗下方口為止，對(duì)圓錐體的高度以及錐體底部半徑（R）tan?=H/R，其中?即休止角。結(jié)果可見，三組樣本的休止角分別為24.6°、23.4°和24.1°，均＜40°，符合相關(guān)要求。

2.5.6 重復(fù)性考察

以青皮橙皮苷含量作為重復(fù)性考察指標(biāo)，檢測(cè)時(shí)取青皮橙皮苷，按照供試品溶液配制方法，制備供試品溶液6份，利用色譜法對(duì)供試品溶液中的橙皮苷含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果可見，6份樣本平均橙皮苷面積RSD分別為0.68%，可見該方法具有良好的重復(fù)性。

2.5.7 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精準(zhǔn)稱取制備好的青皮配方顆粒粉末6份，每份0.2g，分別置入到50mL量瓶?jī)?nèi)，加入適量的甲醇，超聲處理30min后冷卻，再次加入甲醇定容后搖勻，精準(zhǔn)吸取25mL置入到50mL容量瓶?jī)?nèi)，精密加入對(duì)照品溶液3mL（橙皮苷質(zhì)量濃度為0.483g/L），再次加入甲醇定容后搖晃均勻，抽取濾液后，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。通過結(jié)果可見，3個(gè)不同批次青皮配方顆粒的回收率分別為96.41%、97.58%和98.55%，RSD為1.42%，可見該工藝回收率良好。

3 討論

采用正交試驗(yàn)對(duì)青皮配方顆粒的生產(chǎn)條件進(jìn)行篩選優(yōu)化，經(jīng)優(yōu)選后，以A2B2C2作為青皮藥物提取工藝，即加水12倍量、煎煮兩次，每次30min，所得提取物無論是在穩(wěn)定性還是在出膏率方面，均表現(xiàn)良好。橙皮苷可溶于稀堿、吡啶或超過70℃的熱水，微溶于甲醇，因此煎煮液采用水作為溶媒，通過加熱可有效提取到青皮內(nèi)的橙皮苷成分。研究以青皮作為對(duì)照藥材，采用TLC法對(duì)青皮配方顆粒和對(duì)照品藥材的色譜進(jìn)行對(duì)比，可見兩者相應(yīng)位置上的斑點(diǎn)顏色相同，斑點(diǎn)清晰，表明兩者成分相同。通過對(duì)該工藝制備的青皮配方顆粒質(zhì)量進(jìn)行考察，以橙皮苷作為考察指標(biāo)，結(jié)果表明，所得青皮配方顆粒具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，以該參數(shù)制備的青皮配方顆粒成本質(zhì)量穩(wěn)定，有利于降低生產(chǎn)成本，且質(zhì)控簡(jiǎn)便，可用于工業(yè)生產(chǎn)。

4 結(jié)論

以加水12倍量、煎煮兩次、每次30min作為青皮配方顆粒的提取工藝，采用自動(dòng)化制粒機(jī)制備顆粒作為制備工藝所制青皮配方顆粒具有較高的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，且質(zhì)控方法操作簡(jiǎn)便，適宜工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。