黔產(chǎn)不同海拔野生型刺梨原汁對(duì)2型糖尿病小鼠糖脂代謝及氧化應(yīng)激的干預(yù)作用

陳珍，任廷遠(yuǎn),2*，譚書(shū)明

（1.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025）（2.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550006）

糖尿?。―iabetes Mellitus，DM）是以持續(xù)高血糖和脂代謝異常為特征的代謝綜合征[1]。近年來(lái)，糖尿病的發(fā)病率正在上升，據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)合會(huì)（IDF）估計(jì)，到2040年，將有6.24億人患有糖尿病[2]。糖尿病可分為1型糖尿?。═1DM）、2型糖尿?。═2DM）、妊娠糖尿?。℅DM）和其他類(lèi)型糖尿病[3]。其中，T2DM是最為常見(jiàn)的類(lèi)型，在患病人群中就有超過(guò)90%的患者被診斷為T(mén)2DM[4]。T2DM的發(fā)生機(jī)理主要是由于患者長(zhǎng)時(shí)間高脂高能量膳食造成胰島素產(chǎn)生不足或是由于患者的效應(yīng)細(xì)胞對(duì)胰島素并不敏感，而產(chǎn)生胰島素抵抗，導(dǎo)致脂代謝異常[5-8]。氧化應(yīng)激是糖尿病發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素，研究表明，糖尿病患者持續(xù)高血糖會(huì)導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)自由基代謝異常形成氧化應(yīng)激，加速糖尿病發(fā)展[9]。因此，糾正糖尿病的糖脂代謝紊亂及如何從代謝機(jī)制上確定T2DM的發(fā)生機(jī)制，并依此預(yù)防、延緩、控制糖尿病的發(fā)生具有重要意義。

刺梨（Rosa roxburghiiTratt），屬薔薇科落葉灌木植物，廣泛分布于我國(guó)貴州、四川、云南等海拔500～2 500 m的山區(qū)和丘陵中[10,11]。刺梨富含Vc、多酚、多糖、黃酮等多種活性成分[12-14]。近年來(lái)，有研究發(fā)現(xiàn)黃酮、多酚、多糖具有降糖、降脂、抗氧化和治療糖尿病等功效[15-17]。陳曉琪等[18]研究發(fā)現(xiàn)桑寄生總黃酮可降低T2DM小鼠的血糖水平、調(diào)節(jié)血脂代謝平衡；張曉波[19]研究發(fā)現(xiàn)毛酸漿多糖可降低STZ誘導(dǎo)糖尿病小鼠的血糖值及小鼠肝、腎中MDA含量，增強(qiáng)SOD、CAT、GSH-Px活性，提高其抗氧化能力；Liu等[20]研究發(fā)現(xiàn)玫瑰多酚對(duì)糖尿病小鼠引起的氧化應(yīng)激具有抑制作用。前期課題組以龍里、盤(pán)州兩個(gè)地區(qū)刺梨汁進(jìn)行濃縮、復(fù)配，發(fā)現(xiàn)刺梨汁具有降血脂、降血糖、治療T1DM等功效[21,22]，隨后進(jìn)一步對(duì)貴州省22個(gè)地區(qū)刺梨進(jìn)行品質(zhì)分析，發(fā)現(xiàn)高、中、低海拔對(duì)野生刺梨營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)影響較大，而煎茶、以那、擺所是野生高、中、低海拔中最具有代表性的，其特點(diǎn)是野生刺梨分布廣、集中連片多，也是貴州采食和加工野生刺梨最具代表性的區(qū)域[23]。故本研究在前期海拔差異影響刺梨品質(zhì)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討不同海拔地區(qū)刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠糖脂代謝及氧化應(yīng)激的影響。同時(shí)，進(jìn)一步發(fā)掘我省刺梨資源的綜合效應(yīng)，提高我省刺梨產(chǎn)業(yè)的全面發(fā)展，為后續(xù)食品刺梨產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

不同海拔野生刺梨分別采集于貴州省黔南布依族苗族自治州長(zhǎng)順縣擺所鎮(zhèn)、貴州省銅仁市德江縣煎茶鎮(zhèn)、貴州省畢節(jié)市織金縣以那鎮(zhèn)；栽培品種“貴龍5號(hào)”，采自貴州省黔南布依族苗族自治州龍里縣國(guó)級(jí)刺梨示范園區(qū)，產(chǎn)地環(huán)境概況見(jiàn)表1。昆明種雄性小鼠，SPF級(jí)，22～24 g，70只，由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0013；鏈脲佐菌素（STZ），美國(guó)Sigma公司；基礎(chǔ)飼料由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供；糖化血清蛋白（GSP）試劑盒、糖化血紅蛋白（GHb）試劑盒、糖原試劑盒、總蛋白定量測(cè)試盒（BCA法）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽還原酶（GSH-Px）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、SOD等試劑盒均購(gòu)于南京建成生物科技有限公司。

表1 刺梨產(chǎn)地環(huán)境概況Table 1 Environmental conditions of Rosa roxburghii producing areas

1.2 儀器與設(shè)備

L5S紫外分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司；750血糖儀與配套血糖試紙，江蘇魚(yú)躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司；pectraMax190連續(xù)波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)Molecular Devices公司；YH-A5003分析天平，五星衡器有限公司；FSH-2可調(diào)高速勻漿器，江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠；H1-16KB高速冷凍離心機(jī)，湖南可成儀器設(shè)備有限公司；Eclipse Ci-L光學(xué)顯微鏡，日本Nikon公司。

1.3 方法

1.3.1 刺梨原汁制備

每個(gè)地區(qū)隨機(jī)挑選新鮮成熟、無(wú)霉?fàn)€變質(zhì)的刺梨鮮果，經(jīng)去蒂、去籽及表面雜質(zhì)，采用機(jī)械破碎和壓榨，經(jīng)過(guò)濾、滅菌后的清汁，通過(guò)無(wú)菌灌裝后，分裝于-20 ℃保存，37 ℃解凍后灌胃。

1.3.2 動(dòng)物分組與處理

小鼠基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)1 w后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組（n=10）和高脂高糖組（n=60），空白組飼喂基礎(chǔ)飼料，高脂高糖組飼喂高脂高糖飼料（高脂高糖飼料配方參考《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》配制，配方（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為：78%基礎(chǔ)飼料+1.5%膽固醇+10%豬油+0.5%膽鹽+10%蔗糖）。6 w后，小鼠禁食不禁水12 h，腹腔注射60 mg/kg（以小鼠質(zhì)量為基準(zhǔn)計(jì)）STZ建模，建模期間自由攝食、飲水。建模7 d后，禁食12 h，尾尖采集血測(cè)FBG值，當(dāng)FBG值高于11.10 mmol/L時(shí)，視為建模成功[24]。將建模成功的50只小鼠分為5組（n=10），即模型組（MC），野生型刺梨汁織金以那（高海拔組，HF）、黔南長(zhǎng)順（中海拔組，MF）、德江煎茶（低海拔組，DF）和人工種植刺梨汁對(duì)照組（黔南龍里，PC）。為確保每只小鼠為等劑量灌胃（10 g體質(zhì)量小鼠灌胃0.1 mL劑量），NC組、MC組灌胃等劑量的生理鹽水；HF組、MF組、DF組和PC組分別灌胃織金以那、長(zhǎng)順、煎茶野生型刺梨汁和龍里栽培刺梨汁，于每日上午9:00灌胃。實(shí)驗(yàn)期間小鼠均自由攝食、飲水，除NC組飼喂基礎(chǔ)飼料外，其余各組給予高脂高糖飼料，每周記錄攝食量、飲水量和體質(zhì)量，并據(jù)體質(zhì)量調(diào)整灌胃劑量，持續(xù)飼喂28 d。動(dòng)物飼養(yǎng)末期，將小鼠禁食不禁水12 h后，在麻醉狀態(tài)下眼眶取血后解剖。取出腹部脂肪、肝臟、心臟等臟器，用冰凍生理鹽水洗凈，吸水紙除去表面水滴，進(jìn)行稱(chēng)重后轉(zhuǎn)移至-80 ℃。

1.3.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.3.1 空腹血糖濃度測(cè)定灌胃后的第0、7、14、21、28 d，禁食不禁水6 h，剪尾采血測(cè)定空腹血糖濃度[25]。

1.3.3.2 口服糖耐量測(cè)定

灌胃28 d后，禁食不禁水12 h，按照每千克體質(zhì)量2.00 g灌胃葡萄糖溶液，剪尾取血測(cè)定0、0.5、1 h和2 h時(shí)的血糖水平[26]，觀察各組小鼠血糖濃度變化情況。血糖曲線下面積（area under the cure，AUC）根據(jù)公式（1）計(jì)算[27]。

式中：

S——血糖曲線下面積AUC，hmmol/L；

A、B、C、D——灌胃葡萄糖溶液后0、0.5、1 h和2 h的血糖值。

1.3.3.3 小鼠臟器指數(shù)測(cè)定

小鼠臟器指數(shù)按公式（2）計(jì)算[28]

式中：

F——臟器指數(shù)，%

W1——小鼠臟器質(zhì)量，g；

W2——小鼠體質(zhì)量，g。

1.3.3.4 理化指標(biāo)測(cè)定

小鼠糖化血紅蛋白（GHb），糖化血清蛋白（GSP），糖原水平，血清、肝臟和腎臟中脂代謝（TG、TC、HDL-L、LDL-C）和氧化應(yīng)激（MDA、CAT、SOD、GSH-Px）含量的測(cè)定具體步驟參考試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.3.4 HE染色

解剖摘取各組小鼠肝臟，經(jīng)4%多聚甲醛固定，固定狀態(tài)良好后，進(jìn)行修剪、脫水、包埋、切片、染色、封片制作切片，蘇木精-伊紅（Hematoxylin- eosinstaining，HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間分析比較用單因素方差分析，全部統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均由SPSS 22.0完成，并用LSD、Duncan法進(jìn)行組間兩兩比較，以p＜0.05表示差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠體質(zhì)量、攝食量及飲水量的影響

T2DM小鼠攝食量、飲水量及體質(zhì)量分別見(jiàn)圖1a與圖1b。與NC組相比，小鼠攝食量、飲水量在注射STZ后都有所增加，糖尿病癥狀明顯（多飲、多食、多尿）。由圖1a所示，與NC組相比，MC組小鼠體質(zhì)量一直呈下降趨勢(shì)，提示T2DM小鼠建模成功。與MC組相比，經(jīng)28 d灌胃后不同海拔刺梨組均能抑制小鼠體質(zhì)量減少，其中HF組、MF組、DF組和PC組均分別顯著（p＜0.05）增加23.64%、20.59%、21.93%、17.19%。由圖1b知，與NC組相比，T2DM小鼠MC組攝食量與飲水量均顯著升高，進(jìn)一步驗(yàn)證了糖尿病的癥狀，但經(jīng)過(guò)不同海拔刺梨原汁灌胃治療28 d后，劑量組攝食量及飲水量均有所改善，提示不同海拔刺梨原汁均能改善T2DM小鼠癥狀。

圖1 各組小鼠攝食量、飲水量及體質(zhì)量的變化（n=10）Fig.1 The changes of food intake, water intake and body weight in each group were observed (n=10)

2.2 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠FBG的影響

T2DM小鼠FBG濃度見(jiàn)圖2，NC組FBG濃度一直處于正常范圍，相比NC組，在給藥處理前（0 d），其余各組小鼠FBG值均大于11.1 mmol/L，提示糖尿病模型造模成功。與NC組相比，MC組FBG濃度較高，最高可達(dá)23.2 mmol/L，說(shuō)明MC組小鼠糖尿病嚴(yán)重。相比MC組，不同海拔刺梨原汁治療組FBG濃度明顯下降，經(jīng)28 d灌胃治療后，小鼠FBG濃度分別下降了31.03%、47.28%、43.84%、12.96%，總體效果MF組＞DF組＞HF組＞PC組。

圖2 各組小鼠空腹血糖的變化（n=10）Fig.2 Changes of fasting blood glucose in mice of each group(n=10)

2.3 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠口服耐糖量及AUC的影響

圖3 各組小鼠糖耐量(a)及AUC(b)的變化（n=10）Fig.3 Changes of glucose tolerance (a) and area under curve in mice of each group (n=10)

T2DM小鼠口服耐糖量見(jiàn)圖3a，在灌胃葡萄糖溶液后，NC組小鼠血糖水平很快升高，在0.5 h達(dá)到最高，隨后又迅速下降，2 h后降至正常水平。MC組小鼠血糖水平在0.5 h達(dá)到最高水平。與MC組相比，不同海拔刺梨原汁組在0.5 h時(shí)也達(dá)到最高水平，但過(guò)后都有不同程度的下降趨勢(shì)，雖不能回到初始水平，但也能證實(shí)不同海拔刺梨原汁可改善T2DM小鼠的糖耐量。圖3b顯示，MC組AUC顯著（p＜0.05）高于NC組。與MC組相比，不同海拔刺梨原汁組AUC均降低，但MF組、DF組和PC組差異不顯著（p＞0.05）。結(jié)果表明，不同海拔刺梨原汁可提高T2DM小鼠的糖耐量，總體效果HF組＞DF組＞MF組＞PC組。

2.4 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠臟器指數(shù)的影響

T2DM小鼠臟器指數(shù)見(jiàn)表2，與NC組相比，MC組小鼠肝臟、腎臟、心臟及脾臟指數(shù)分別顯著（p＜0.05）升高了76.88%、26.32%、33.33%、43.48%。與MC組相比，不同海拔刺梨原汁組臟器指數(shù)均有所降低，但心臟指數(shù)HF組、MF組、DF組和PC組小鼠肝臟指數(shù)差異不顯著（p＞0.05），且DF組、PC組小鼠腎臟指數(shù)也無(wú)顯著性差異，這與陳小敏、陸敏濤等[22,29]研究結(jié)果相一致。

表2 各組小鼠臟器指數(shù)（%，n=10）Table 2 Organ index of mice in each group (%, n=10)

2.5 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠血清GHb與GSP水平的影響

T2DM小鼠血清GHb與GSP的變化分別見(jiàn)圖4a與4b，與NC組相比，MC組小鼠血清GHb與GSP分別顯著（p＜0.05）增加116.68%、73.87%。與MC組相比，不同海拔刺梨原汁組GHb與GSP水平均顯著（p＜0.05）下降，其中HF組、MF組、DF組、PC組GHb水平分別下降58.45%、53.63%、47.18%、36.80%，且呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)；GSP水平分別下降25.28%、28.24%、32.18%、16.45%，總體效果DF組＞MF組＞HF組＞PC組。

圖4 各組小鼠GHb(a)與GSP(b)的變化（n=10）Fig.4 Changes of GHb (a) and GSP (b) levels in mice of each group (n=10)

2.6 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠肝糖原與肌糖原含量的影響

圖5 各組小鼠肝糖原與肌糖原含量的變化（n=10）Fig.5 Changes of glycogen content in liver and muscle of mice in each group (n=10)

T2DM小鼠肝糖原與肌糖原含量見(jiàn)圖5，相比NC組，MC組小鼠肝糖原與肌糖原含量分別下降59.64%、43.66%。與MC組相比，不同海拔刺梨原汁組的肝糖原與肌糖原含量均有所提高，其中HF組、MF組、DF組、PC組肝糖原含量分別提高129.61%、122.63%、78.94%、113.69%，總體效果HF組＞MF組＞PC組＞DF組；肌糖原含量分別提高14.17%、16.66%、21.63%、19.15%，總體效果DF組＞PC組＞MF組＞HF組，但差異均不顯著（p＞0.05）。

2.7 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠脂代謝的影響

T2DM小鼠脂代謝水平分別見(jiàn)圖6a、b、c和d，與NC組相比，MC組小鼠血清、肝臟與腎臟中TG、TC、LDL-C水平均顯著（p＜0.05）上升，HDL-C水平顯著（p＜0.05）下降，提示T2DM小鼠引發(fā)了脂代謝紊亂。當(dāng)采用不同海拔刺梨原汁灌胃治療28 d后，與MC組相比，T2DM小鼠血清中HF組、MF組、DF組、PC組TG水平均分別下降27.29%、9.44%、12.55%、2.73%，差異均不顯著（p＞0.05），總體效果HF組＞DF組＞MF組＞PC組；TC水平均分別下降35.09%、17.44%、9.63%、1.65%，除PC組不顯著外，其余各組均有顯著差異性，且有劑量效應(yīng)；LDL-C水平均分別顯著（p＜0.05）下降84.57%、83.52%、75.99%、84.57%，總體效果HF組＞PC組＞MF組＞DF組；HDL-C水平均分別上升107.10%、74.23%、51.59%、126.37%，其中、低海拔組差異不顯著，總體效果PC組＞HF組＞MF組＞DF組。此外，T2DM小鼠肝臟與腎臟中不同海拔組TG、TC、LDL-C水平均下降，HDL-C水平均上升，說(shuō)明不同海拔刺梨原汁在一定程度上可以改善T2DM小鼠脂代謝紊亂。

圖6 各組小鼠血清、肝臟、腎臟脂代謝相關(guān)指標(biāo)的變化（n=10）Fig.6 Changes of lipid metabolism indexes in serum, liver and kidney of mice in each group (n=10)

2.8 不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠氧化應(yīng)激的影響

氧化應(yīng)激是糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)生與發(fā)展的因素之一。T2DM小鼠糖尿病氧化應(yīng)激的含量見(jiàn)圖7a、7b、7c和7d，與NC組相比，MC組小鼠血清、肝臟及腎臟中CAT、GSH-Px、SOD含量均顯著（p＜0.05）下降，MDA含量均分別顯著（p＜0.05）升高57.50%、96.37%、41.86%。與MC組相比，不同海拔刺梨原汁組血清、肝臟及腎臟中CAT、GSH-Px、SOD含量均升高，MDA含量均顯著（p＜0.05）下降，其中，HF組、MF組、DF組、PC組T2DM小鼠肝臟CAT含量均分別顯著（p＜0.05）升高151.27%、101.38%、87.46%、91.13%，總體效果HF組＞MF組＞PC組＞DF組。小鼠血清與腎臟中CAT含量只有HF組顯著（p＜0.05），其他海拔組均不顯著（p＞0.05）。而GSH-Px含量除了血清與腎臟中HF組、DF組顯著外，其余組差異均不顯著。結(jié)果表明，經(jīng)不同海拔刺梨原汁灌胃治療28 d后，對(duì)T2DM小鼠氧化應(yīng)激的損傷具有修復(fù)作用，可提高抗氧化能力。

圖7 各組小鼠血清、肝臟、腎臟氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的變化（n=10）Fig.7 Changes of oxidative stress related indexes in serum, liver and kidney of mice in each group (n=10)

2.9 T2DM小鼠肝臟、腎臟病理學(xué)分析

如圖8所示，NC組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)明顯的炎癥。MC組小鼠肝細(xì)胞排列松散，大量脂肪空泡變性，肝細(xì)胞氣球樣變，胞質(zhì)疏松淡染，可見(jiàn)炎性細(xì)胞灶性浸潤(rùn)。經(jīng)刺梨原汁干預(yù)后，治療組小鼠空泡變性量均有所減少，未見(jiàn)明顯炎癥，形態(tài)有所改善。

圖8 肝臟病理學(xué)分析Fig.8 Liver pathology

3 討論

為了解基于不同海拔差異的刺梨原汁對(duì)T2DM建模小鼠血糖、脂代謝和氧化應(yīng)激水平的作用情況，本研究以昆明種雄性小鼠為研究對(duì)象，利用高脂高糖飲食配合STZ構(gòu)建T2DM模型，通過(guò)測(cè)量小鼠血糖、脂代謝和氧化應(yīng)激等關(guān)鍵指標(biāo)的變化情況，分析該海拔差異對(duì)于小鼠糖尿病及其并發(fā)癥的作用效果。

糖尿病是一種以高血糖為主要特征的代謝性疾病[30,31]，長(zhǎng)期高血糖會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生糖化反應(yīng)，對(duì)各個(gè)臟器造成損害[32-34]。結(jié)果顯示，不同海拔刺梨原汁對(duì)高脂高糖聯(lián)合STZ誘導(dǎo)T2DM小鼠的攝食量、飲水量及體質(zhì)量減輕等癥狀具有明顯的改善效果，還可降低T2DM小鼠的臟器指數(shù)，提示刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠的臟器具有保護(hù)和修復(fù)作用，能抵抗高血糖對(duì)器官造成的慢性損害，抑制代謝器官的腫大，這與陸敏濤等[35]研究結(jié)果一致。T2DM是一種慢性?xún)?nèi)分泌疾病，血糖水平升高是該疾病的典型特征[36]。目前，國(guó)際糖尿病診斷顯示正常人FBG在3.3～6.1 mmol/L之間，若大于11.1 mmol/L則視為血糖超標(biāo)，而血糖濃度又與GHb、GSP和糖耐量相關(guān)，其中糖尿病患者GHb和GSP水平均高于正常人[37-39]。結(jié)果顯示，不同海拔刺梨原汁均可降低高脂高糖聯(lián)合STZ誘導(dǎo)T2DM小鼠的血糖水平，提高糖耐受量。此外，與MC組相比，不同海拔刺梨原汁組GHb與GSP濃度均顯著（p＜0.05）下降，其中HF組、MF組、DF組、PC組GHb水平分別下降58.45%、53.63%、47.18%、36.80%，且存在劑量效應(yīng)。糖尿病的糖代謝與糖原的含量密切相關(guān)，糖原的含量可以間接反應(yīng)血糖水平[40]。結(jié)果顯示，不同海拔刺梨原汁組均能提高小鼠糖原含量，但差異不顯著（p＞0.05），而血糖水平的降低也證實(shí)了不同海拔刺梨原汁可通過(guò)提高糖原含量，降低血糖水平，糾正T2DM小鼠糖代謝異常，起到降血糖作用，進(jìn)而達(dá)到預(yù)防或治療糖尿病癥狀，這與王婧茹等[41]采用番石榴葉總?cè)疲═TPGL）治療高糖高脂+腹腔注射小劑量STZ誘導(dǎo)T2DM大鼠發(fā)現(xiàn)TTPGL劑量組能顯著（p＜0.05）降低T2DM大鼠FBG濃度，提高GHb含量，達(dá)到降糖、降脂作用結(jié)果相一致。

脂代謝異常是糖尿病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，脂代謝紊亂會(huì)伴隨糖尿病的發(fā)展愈發(fā)明顯[42]。T2DM的脂代謝異常一般呈現(xiàn)出TG、TC、LDL-C升高，HDL-C降低。結(jié)果顯示，MC組小鼠血清、肝臟及腎臟中TG、TC、LDL-C水平明顯增加，而HDL-C水平顯著（p＜0.05）降低，提示由高脂高糖飲食誘導(dǎo)聯(lián)合腹腔注射STZ構(gòu)建的T2DM模型小鼠脂代謝已經(jīng)發(fā)生紊亂，在經(jīng)過(guò)不同海拔刺梨原汁灌胃治療7 w后，不同海拔組小鼠血清、肝臟及腎臟中TG、TC、LDL-C水平明顯下降，HDL-C水平明顯增加，說(shuō)明脂代謝紊亂得到了控制，這與陳萍等[43]研究結(jié)果相一致。推測(cè)可能是刺梨中的活性成分能促進(jìn)T2DM小鼠胰島β細(xì)胞的修復(fù)和再生，進(jìn)而改善胰島素分泌，在一定程度上緩解T2DM小鼠的代謝紊亂[44]。其中HF組對(duì)LDL-C、HDL-C、TC、TG改善效果均顯著（p＜0.05），DF組對(duì)肝、腎TG、TC、LDL-C改善效果顯著（p＜0.05），MF組對(duì)腎TG、TC、LDL-C改善效果顯著（p＜0.05），PC組對(duì)肝HDL-C、TG改善效果顯著（p＜0.05）?？傮w治療效果：HF組＞DF組＞MF組＞PC組。

研究表明，糖尿病患者的高血糖水平與自由基引發(fā)的氧化應(yīng)激有關(guān)[45]。隨著病程的發(fā)展，糖尿病患者清除自由基的能力會(huì)減弱，因此針對(duì)糖尿病防治的一個(gè)重要機(jī)制是提高機(jī)體內(nèi)抗氧化的穩(wěn)定性[46]。通過(guò)測(cè)定MDA可以較直觀地反映機(jī)體的抗氧化能力，其中抗氧化酶活性越強(qiáng)，MDA含量越低。CAT、SOD、GSH-Px作為生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，具有抑制自由基產(chǎn)生、減少氧化損傷的作用[47,48]。結(jié)果顯示，MD組小鼠CAT、SOD、GSH-Px活性下降，MDA含量升高，說(shuō)明高脂高糖聯(lián)合STZ誘導(dǎo)的T2DM小鼠可使體內(nèi)血清、肝臟及腎臟的抗氧化能力受到明顯損傷。在通過(guò)不同海拔刺梨原汁灌胃治療后可顯著（p＜0.05）提升T2DM小鼠體內(nèi)CAT、SOD、GSH-Px的抗氧化酶活性，降低MDA含量，其中HF組小鼠血清、肝臟、腎臟MDA含量分別顯著（p＜0.05）降低71.84%、51.89%、30.74%，提示不同海拔組刺梨原汁可增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的活性，降低機(jī)體氧化應(yīng)激，進(jìn)而發(fā)揮緩解糖尿病的作用[49]，這與高雪婧等[50]實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。不同海拔地區(qū)的刺梨在不同品質(zhì)指標(biāo)上各有優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，研究表明，刺梨黃酮、Vc、SOD和還原糖等活性成分具有明顯的抗氧化活性[51,52]，前期研究發(fā)現(xiàn)刺梨在海拔690～1468 m范圍內(nèi)除海拔在1412 m和692.9 m地區(qū)的刺梨類(lèi)黃酮含量最高（22.26 mg/100 g）和最低（3.55 mg/100 g）之外，其余地區(qū)在9.18～15.60 mg/100 g之間；刺梨Vc含量除海拔在960 m地區(qū)含量最高（2725.32 mg/100 g）之外，其余地區(qū)Vc含量大都在1000～2000 mg/100 g之間；刺梨SOD活性主要分布在330.05 ～446.50 U/g；刺梨還原糖主要分布在3.14%～5.48%之間，其含量與海拔差異都不大，但針對(duì)T2DM而言，研究發(fā)現(xiàn)不同海拔組對(duì)小鼠血清、肝臟及腎臟中的SOD及MDA的改善效果均顯著（p＜0.05），其中HF組對(duì)小鼠體內(nèi)CAT、GSH-Px活性改善效果均顯著（p＜0.05），DF組和MF組分別對(duì)小鼠血清和腎臟中GSH-Px活性改善效果顯著（p＜0.05），PC組對(duì)小鼠體內(nèi)血清GSH-Px活性改善效果不顯著（p＞0.05）?？傮w治療效果：HF組＞DF組=MF組＞PC組，推測(cè)可能與刺梨中SOD、還原糖等兩種活性成分增強(qiáng)了T2DM小鼠體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的活性有關(guān)，另外與其它未檢測(cè)（如刺梨槲皮素、多酚類(lèi)物質(zhì)及刺梨精油等）的活性成分也可能有關(guān)。因此，還需繼續(xù)深入研究黔產(chǎn)刺梨不同海拔、活性成分、功能差異這三者的內(nèi)在關(guān)聯(lián)。

4 結(jié)論

不同海拔刺梨原汁均能緩解T2DM小鼠“三多一少”的癥狀，提高糖耐量，降低體內(nèi)TG、TC、LDL-C水平和MDA含量，增加HDL-C水平和SOD、CAT、GSH-Px活性，使T2DM小鼠的血脂紊亂和氧化損傷得到改善，此外，HE染色結(jié)果顯示不同海拔刺梨原汁能減輕肝組織的病理?yè)p傷。表明不同海拔刺梨原汁對(duì)T2DM小鼠引發(fā)的糖代謝、脂代謝及氧化應(yīng)激都有一定的防治作用，為后期刺梨品種篩選、大規(guī)模種植及藥食商品加工提供科學(xué)依據(jù)。