微柱凝膠技術(shù)在ABO 血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

胡三強(qiáng) 楊帆 張?chǎng)?孫林

新生兒溶血病屬于一種因?yàn)槟阁w、新生兒血型不合而引發(fā)的血型免疫性反應(yīng),因?yàn)槟阁w內(nèi)發(fā)生和胎兒血型抗原不匹配的血型抗體,借助胎盤進(jìn)入到胎兒的體內(nèi)從而導(dǎo)致同族免疫性溶血,其中ABO 血型不合最為常見,其主要表現(xiàn)在于黃疸、貧血、膽紅素腦病等多種癥狀［1］。因?yàn)樾律鷥喝苎』純旱捏w內(nèi)存在紅細(xì)胞破壞表現(xiàn),大多數(shù)都帶有一定程度的貧血,此時(shí)需要及時(shí)采取血液輸注治療從而緩解癥狀。對(duì)于大多數(shù)新生兒而言,免疫系統(tǒng)并未完全發(fā)育,此時(shí)體內(nèi)無對(duì)應(yīng)的血型抗體,同時(shí)紅細(xì)胞表面的血型抗原表達(dá)強(qiáng)度相對(duì)于成年人而言更低,所以新生兒的輸血和血型鑒定和成年人有明顯的區(qū)別［2,3］。針對(duì)溶血病患兒,不能采用同血型進(jìn)行輸血,應(yīng)當(dāng)基于相容性原則進(jìn)行輸血。交叉配血時(shí)應(yīng)當(dāng)篩查新生兒血液中是否存在抗A、抗B,但是準(zhǔn)確性會(huì)因?yàn)闄z測(cè)方式而受到影響［4,5］。對(duì)此,為了進(jìn)一步保障新生兒溶血病得到有效控制,本文對(duì)微柱凝膠技術(shù)在ABO 血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果進(jìn)行分析。具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020 年1 月～2022 年2 月本院47 例新生兒溶血病患兒作為研究對(duì)象,其中男30 例、女17 例；年齡1～5 d,平均年齡(2.81±0.83)d；體質(zhì)量2.2～3.8 kg,平均體質(zhì)量(3.12±0.34)kg。所有患兒家屬均對(duì)研究知情且簽署知情同意書。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：產(chǎn)前孕婦及其配偶均接受ABO 血型檢測(cè)并被確診為新生兒溶血??；產(chǎn)后監(jiān)測(cè)新生兒膽紅素,黃疸較早發(fā)生且存在進(jìn)行性加重表現(xiàn)；臨床資料完整且接受系統(tǒng)產(chǎn)檢。排除標(biāo)準(zhǔn)：產(chǎn)婦或新生兒資料不完整；未接受產(chǎn)后系統(tǒng)檢查；合并先天性疾病或血液系統(tǒng)疾??；母體存在嚴(yán)重妊娠并發(fā)癥；檢測(cè)前接受過相關(guān)治療。

1.3方法 應(yīng)用微柱凝膠技術(shù)、凝聚胺介質(zhì)技術(shù)將所有患兒和5 份ABO 同型紅細(xì)胞制劑進(jìn)行主側(cè)交叉配血試驗(yàn)。血液采樣標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)用正定凝集強(qiáng)度達(dá)到3+、反定凝集強(qiáng)度達(dá)到2+,正反定型血型復(fù)查一致。凝聚胺介質(zhì)技術(shù)方法：應(yīng)用一支試管置入ABO 溶血病患兒2 滴紅細(xì)胞放散液或血漿,加入3%～5%的ABO 同型血樣紅細(xì)胞懸液,加入0.7 ml 低離子介質(zhì)進(jìn)行均勻混合,再加入凝聚胺溶液進(jìn)行離心。去掉上清液后輕搖試管,觀察紅細(xì)胞凝聚狀況,如果存在凝集則重新操作。滴入2 滴重懸液進(jìn)行搖勻并觀察結(jié)果。微柱凝膠技術(shù)方法：在微柱凝膠卡加入患兒2 滴紅細(xì)胞放散液或血漿,再加入血樣在凝膠卡中,實(shí)行5 min 離心處理,離心處理標(biāo)準(zhǔn)為900 r/min 離心2 min,1500 r/min 離心3 min,觀察最終結(jié)果。所有患兒均接受直接抗人體球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)和抗體釋放試驗(yàn)。

1.4觀察指標(biāo) 對(duì)比檢驗(yàn)技術(shù)結(jié)果、直抗類型、血漿交叉配血結(jié)果、放散液交叉配血結(jié)果以及兩種技術(shù)的配血結(jié)果。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)；一致性評(píng)估采用Kappa 檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1診斷結(jié)果 47 例患兒檢驗(yàn)后確診為ABO 新生兒溶血病,直抗檢測(cè)陽性22 例、游離檢測(cè)陽性38 例、放散檢測(cè)陽性47 例,占比分別為46.81%、80.85%、100.0%。見表1。

表1 診斷結(jié)果(n)

2.2直抗類型和血漿交叉配血結(jié)果 47 例患兒血漿交叉配血次數(shù)235 次。微柱凝膠技術(shù)血漿交叉配血不合次數(shù)124 次(52.77%),凝聚胺介質(zhì)技術(shù)血漿交叉配血不合次數(shù)26 次(11.06%)；微柱凝膠技術(shù)血漿交叉配血不合率明顯高于凝聚胺介質(zhì)技術(shù),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。直抗陽性與直抗陰性患兒血漿交叉配血不合率分別為39.55%(87/220)、25.20%(63/250)；直抗陽性血漿交叉配血不合率高于直抗陰性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 直抗類型和交叉配血結(jié)果［次(%)］

2.3直抗類型和放散液交叉配血結(jié)果 47 例患兒放散液交叉配血235 次。微柱凝膠技術(shù)放散液交叉配血不合98 次(41.70%),凝聚胺介質(zhì)技術(shù)放散液交叉配血不合23 次(9.79%)；微柱凝膠技術(shù)放散液交叉配血不合率明顯高于凝聚胺介質(zhì)技術(shù),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。直抗陽性與直抗陰性患兒放散液交叉配血不合率分別為33.18%(73/220)、19.20%(48/250)；直抗陽性放散液交叉配血不合率高于直抗陰性,直抗陰性(P＜0.05)。見表3。

表3 直抗類型和放散液交叉配血結(jié)果［次(%)］

2.4微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺介質(zhì)技術(shù)配血結(jié)果對(duì)比血漿凝聚胺介質(zhì)技術(shù)配血不合的微柱凝膠技術(shù)配血均為不合,基于Kappa 一致性檢驗(yàn),兩種檢驗(yàn)結(jié)果一致性對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),兩種技術(shù)交叉配血結(jié)果一致性較差。見表4。

表4 微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺介質(zhì)技術(shù)配血結(jié)果對(duì)比(n)

3 討論

新生兒溶血病患兒的母體大多數(shù)屬于O 型血,患兒則是以A、B 型血為主,其原因在于O 型血母體的患兒體內(nèi)抗A、抗B 免疫球蛋白抗體相對(duì)較多,并且A 抗原的抗原性相對(duì)于B 抗原更加強(qiáng)烈,所以A 型血新生兒的溶血病發(fā)生率相對(duì)較高［5］。近些年有研究認(rèn)為,O 型孕婦在產(chǎn)前免疫球蛋白G(IgG)血型抗體是導(dǎo)致發(fā)生溶血病的主要原因,并且該指標(biāo)水平和溶血病呈正相關(guān)［6］。溶血病患兒因?yàn)轶w內(nèi)有被動(dòng)輸入母體溶血性免疫球蛋白的抗體,同時(shí)該抗體在血清中能夠與紅細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合,所以臨床檢測(cè)溶血病可以應(yīng)用直接抗人球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)和抗體釋放試驗(yàn)［7］。輸血前交叉配血檢驗(yàn)也包含放散液與血清兩種,其中放散液的交叉配血能夠展現(xiàn)細(xì)胞溶血性抗體和輸注紅細(xì)胞不相容的特征,血清的交叉配血可以展現(xiàn)血清溶血性抗體和輸注紅細(xì)胞不相容［8］。但是,新生兒溶血病被動(dòng)輸入的抗體性質(zhì)、數(shù)量以及紅細(xì)胞血型抗原表達(dá)的強(qiáng)度存在個(gè)體性的差異,此時(shí)患兒清除代謝方面的變化并不相同,所以不同的溶血病患兒在交叉配血檢測(cè)方面的準(zhǔn)確性會(huì)受檢測(cè)方式靈敏度的影響,臨床普遍采用直接抗人球蛋白試驗(yàn),其中微柱凝膠技術(shù)被廣泛應(yīng)用［9,10］。微柱凝膠技術(shù)屬于血凝試驗(yàn)技術(shù)方式,其主要是凝膠分子篩技術(shù)與抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合結(jié)果,在凝膠介質(zhì)的影響下抗原抗體可以形成凝集反應(yīng),并且微柱凝膠技術(shù)具備操作簡單、檢測(cè)速度較快等多方面的優(yōu)勢(shì)［11］。

有研究認(rèn)為,微柱凝膠技術(shù)應(yīng)用在ABO 血型不合新生兒溶血病方面的診斷有著比較明顯的優(yōu)勢(shì),其具備診斷結(jié)果準(zhǔn)確性較高及可以重復(fù)進(jìn)行的優(yōu)勢(shì),可以對(duì)患兒輸血安全形成積極的保護(hù)作用［12,13］。微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)新生兒溶血病交叉配血的敏感度相對(duì)較高,但是在檢測(cè)期間需要注意,交叉配血期間哪怕是應(yīng)用微柱凝膠技術(shù),放散液和血漿交叉配血仍然可能呈現(xiàn)出陰性,這也證明了陽性溶血病患兒采用同型紅細(xì)胞制劑進(jìn)行輸注時(shí)仍然可能存在交叉配血不合漏檢的風(fēng)險(xiǎn),所以在臨床中應(yīng)當(dāng)提高重視,針對(duì)新生兒輸血不能盲目應(yīng)用同型輸血原則,應(yīng)當(dāng)應(yīng)用交叉配血檢測(cè)結(jié)果保障輸血合理性［14,15］。溶血病患兒因?yàn)樽陨砜贵w方面的差異,機(jī)體的紅細(xì)胞血型抗原表達(dá)強(qiáng)度可能并不相同,此時(shí)因?yàn)轶w內(nèi)被動(dòng)輸入的溶血性抗體數(shù)量和性質(zhì)方面的差異,臨床中交叉配血檢測(cè)期間準(zhǔn)確度會(huì)因?yàn)榕溲绞降撵`敏度差異而呈現(xiàn)出較差的結(jié)果差異［16,17］。但是,雖然臨床推薦應(yīng)用直接抗人球蛋白試驗(yàn)檢測(cè),但是基于目前國內(nèi)條件,臨床中凝聚胺介質(zhì)技術(shù)可以獲得哪一層度的效果仍然有較大的爭議。整體來看微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病方面有著較高的診斷價(jià)值,但是需要注意,對(duì)于新生兒溶血患兒診斷期間哪怕是應(yīng)用微柱凝膠技術(shù)也很難保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性能夠達(dá)到100%,仍然存在部分患兒同型紅細(xì)胞制劑引發(fā)交叉配血檢測(cè)不合與漏診的風(fēng)險(xiǎn),所以交叉配血的檢測(cè)結(jié)果陰性不應(yīng)當(dāng)定義為新生兒輸血安全的評(píng)價(jià)金標(biāo)準(zhǔn)［18］。對(duì)此,新生兒輸血期間應(yīng)當(dāng)注意,首先需要做好直接抗人球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)和抗體釋放試驗(yàn)篩查溶血病,明確是否存在新生兒溶血病,按照檢測(cè)結(jié)果做好合理輸血的結(jié)果指導(dǎo),如果沒有篩查溶血病,則應(yīng)當(dāng)先考慮母源性溶血的風(fēng)險(xiǎn),并提供AB型血漿和O 型洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行相容性輸血,從而保障輸血安全性［19］。

本研究結(jié)果顯示,47 例患兒均基于檢驗(yàn)后確診為ABO 新生兒溶血病,微柱凝膠技術(shù)血漿交叉和放散液交叉配血不合率均高于凝聚胺介質(zhì)技術(shù),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。直抗陽性血漿交叉和放散液交叉配血不合率均高于直抗陰性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。血漿凝聚胺介質(zhì)技術(shù)檢測(cè)不合的微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)均為不合,基于Kappa 一致性檢驗(yàn)兩種檢驗(yàn)結(jié)果一致性對(duì)比差異差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),兩種技術(shù)交叉配血結(jié)果一致性較差。結(jié)果充分證明微柱凝膠技術(shù)與凝聚胺介質(zhì)技術(shù)在血漿和放散液的交叉配血結(jié)果存在較差的一致性表現(xiàn),借助對(duì)直抗檢測(cè)結(jié)果分析,可以發(fā)現(xiàn)直抗陽性患兒的配血不合率明顯高于直抗陰性,這也證明了在新生兒溶血病輸血治療前應(yīng)當(dāng)先基于直抗試驗(yàn)并輔助配血檢驗(yàn),同時(shí)微柱凝膠技術(shù)相對(duì)而言有著更高的應(yīng)用價(jià)值,能夠更加準(zhǔn)確的展現(xiàn)患兒體內(nèi)的可溶性抗體,特異性優(yōu)勢(shì)比較明顯,結(jié)果穩(wěn)定且可以重復(fù)進(jìn)行,可以作為臨床常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)方式。

綜上所述,微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病的輸血前檢驗(yàn)具備較高靈敏度,在輸血檢驗(yàn)開始前可以增加直抗試驗(yàn),有著較高的應(yīng)用價(jià)值,但是微柱凝膠技術(shù)也有一定的缺陷,無法完全替代凝聚胺介質(zhì)技術(shù),實(shí)踐應(yīng)用期間需要結(jié)合應(yīng)用兩者之間的優(yōu)勢(shì)達(dá)到相互補(bǔ)充的效果,按照患兒的個(gè)體狀況充分考慮血清免疫學(xué)特征和生理特征靈活應(yīng)用多種方式篩查抗原抗體,最大程度降低輸血事故的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),值得推廣應(yīng)用。