瀏陽市規(guī)模羊場小反芻獸疫流行情況和抗體水平分析

趙琴，楊輝* ，席旭晴，張建超，李敏，王承義，陳功，聶厚湘，唐建如，陳濤

（1.湖南省瀏陽市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 長沙 410300；2.河北省固安縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 河北廊坊 065500）

小反芻獸疫（peste des petis ruminants，PPR）是由副粘病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒（peste des petis ruminants virus，PPRV）引起的，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征的急性接觸性傳染病，山羊和綿羊易感，但山羊發(fā)病率和病死率均較高，易感羊群發(fā)病率通常達60%以上，病死率可達50%以上，特急性、急性病死率高達100%，目前尚無有效的治療方法。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。

2007 年，PPR 首次傳入我國西藏阿里地區(qū)，自2013 年底起，全國多個省份均發(fā)生PPR。近期，以色列、蒙古國、阿爾及利亞、利比亞等境外國家陸續(xù)發(fā)現(xiàn)羊群感染小反芻獸疫，而我國西北方西藏自治區(qū)、新疆維吾爾自治區(qū)、青海省等地也陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多起小反芻獸疫，雖然都及時按照有關(guān)預案和當?shù)匾箝_展疫情處置工作，但仍給養(yǎng)殖戶造成了不可挽回的損失。近年來，瀏陽市通過強制免疫、監(jiān)測、調(diào)運監(jiān)管等綜合措施使得該病得到有效控制。為評估2021 年的PPR 流行情況和抗體水平，瀏陽市動物疫病預防控制中心對轄區(qū)內(nèi)部分規(guī)模羊場進行抽檢，對其采集的樣品開展病原學和血清學的檢測。現(xiàn)將檢測結(jié)果分析如下。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2021 年8 月，瀏陽市動物疫病預防控制中心隨機選取了轄區(qū)內(nèi)存欄50 只以上的規(guī)模羊場41 家，采樣地點覆蓋瀏陽市4 個分區(qū)，采集樣品共2,160 份，其中羊眼-鼻拭子樣品1,352 份，血清樣品808 份，所有樣品采集至實驗室后立即置于-20℃保存，備檢。

1.2 實驗器材

熒光定量PCR 儀，核酸提取儀，電熱恒溫培養(yǎng)箱，12 道移液器，單道移液器、離心機、酶標儀、純水儀、冰箱、生物安全柜等。

1.3 檢測試劑及方法

小反芻獸疫檢測參照國標規(guī)定方法（GB/T 27987-2011）。小反芻獸疫病毒單重熒光PCR 檢測試劑盒來源于北京億森寶生物科技有限公司；小反芻獸疫競爭ELISA 抗體檢測試劑盒來源于中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所。檢測步驟及判定標準均按照各項目試劑盒說明書執(zhí)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

本次共檢測存欄50 只以上的規(guī)模羊場41 家，涵蓋瀏陽市東西南北4 個片區(qū)，累計檢測樣品2,160 份次，其中眼-鼻拭子樣品病原學檢測1,352 份次，均未檢出PPRV 核酸陽性，血清學檢測808 份次，整體抗體水平為60.02%。

2.2 場點分布情況

從場點的統(tǒng)計結(jié)果來看，在10 個被抽檢的鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，有8 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的小反芻獸疫抗體水平高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部最低標準70%，其中西區(qū)和北區(qū)的羊場抗體水平均已達標，不達標的羊場分布在東區(qū)的小河鄉(xiāng)和南區(qū)的中和鎮(zhèn)。

表1 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)小反芻獸疫抗體水平檢測結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 血清學檢測結(jié)果分析

從本次小反芻獸疫的專項檢測結(jié)果來看，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的小反芻獸疫免疫抗體水平參差不齊，整體水平低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的最低標準70%，僅有60.02%，80%的鄉(xiāng)鎮(zhèn)抗體效價達標，2 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)存在多家羊場抗體水平遠低于70%的情況。根據(jù)瀏陽市2021 年重大動物疫病免疫效果評估的檢測結(jié)果，5 月PPR 的抗體檢測評估結(jié)果為97.63%，11 月抗體檢測評估結(jié)果為93.79%，本次檢測時間為8月，介于兩個時間節(jié)點之間，抗體水平整體呈現(xiàn)下降的情況，分析其原因，可能是由于7—8 月尚未開展小反芻獸疫的免疫接種工作，免疫期限已過或尚未進行補免，從而導致機體內(nèi)的小反芻獸疫的抗體水平較低。

3.2 病原學檢測結(jié)果分析

按照瀏陽市小反芻獸疫監(jiān)測計劃要求，每年在春季和秋季各進行一次集中監(jiān)測，常規(guī)監(jiān)測根據(jù)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）實際情況進行計劃。目前，在湖南省、長沙市等上級部門的統(tǒng)一部署下，全省將逐步推行PPR 退出強制免疫的工作。2021 年2 月份在永安鎮(zhèn)某養(yǎng)羊戶從外市交易市場調(diào)入的羊群出現(xiàn)過小反芻獸疫可疑病例，已迅速按照當?shù)貏游镆咔榉揽匾髮⒉⊙蚣巴貉?8 只實施強制撲殺和無害化處理，全場內(nèi)外進行全面大消毒和墊料、廢棄物等的無害化處理，及時消除疫情擴散風險，同時組織對該養(yǎng)殖戶周邊3km范圍內(nèi)所有羊只進行小反芻獸疫緊急免疫?，F(xiàn)從本次病原學的檢測結(jié)果來看，盡管PPR 的整體抗體水平僅為60.02%，但并未檢測出PPRV 核酸陽性，由此可見該市轄區(qū)內(nèi)的小反芻獸疫疫病防控成效較好。

3.3 小反芻獸疫診斷技術(shù)分析

目前，除采用GB/T 27982-2011《小反芻獸疫診斷技術(shù)》規(guī)定的臨床癥狀和病理變化進行診斷外，還包括很多其他的病原學和血清學的診斷方法，其中病原鑒定主要有以下幾種：①電鏡觀察法。根據(jù)病毒粒子的形態(tài)特征和大小等特點使用電鏡技術(shù)進行觀察而進行的診斷，此方法對儀器設(shè)備和技術(shù)人員的要求都較高，臨床上較為少用；②病毒培養(yǎng)法。通過采集發(fā)病羊只的病料，選擇急性期或具有明顯臨床癥狀的眼-口鼻試子、淋巴結(jié)組織或血液等樣品，使用羔羊原代腎細胞或VERO 細胞、綿陽上皮細胞等進行分離培養(yǎng)，此方法所需時間較長，適用于對小反芻獸疫病毒進行更加深入的研究；③瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID）和對流免疫電泳（CIEP）法。通過分離樣品中的病毒上清與標準抗血清之間的抗原抗體特異性反應(yīng)檢測病毒抗原的一種方法，CIEP 的靈敏度高于AGID；④間接免疫熒光抗體試驗（IFAT）法。該方法要具有病毒特異性單抗的條件才可開展檢測，可對羊只發(fā)病初期和后期的病料進行檢測并作出快速的鑒別診斷；⑤夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（sELISA）。1994 年Jeremiah 等利用病料組織中含有PPRV 粒子，通過捕獲抗體和特異性檢測抗體建立的一種夾心ELISA 方法；⑥核酸識別法（PCR）?；诓《镜暮怂嵝蛄羞M行檢測，針對病毒特異性的N、F、P 基因建立的PCR 和qPCR 檢測方法，能快速、靈敏并特異的對病毒的存在進行檢測，而qPCR 不僅可以判斷樣品中是否存在病原污染，還能通過熒光探針和模板特異性結(jié)合由儀器采集熒光信號達到定量的目的，對病毒的豐度進行研究。而血清學鑒定的方法主要包括中和實驗和競爭酶聯(lián)免疫測定法（cELISA）。中和試驗的敏感性和特異性較好，但耗時較長、操作較為復雜，不適合大規(guī)模的樣品檢測。cELISA 的使用較為廣泛，主要是利用PPRV核蛋白（N）單克隆抗體來構(gòu)建的一種酶聯(lián)免疫吸附法，用來檢測血清中是否含有PPR 的抗體，若存在，則會與單抗競爭性結(jié)合病毒蛋白表位，快速的檢測樣品中是否存在PPR 抗體。

3.4 關(guān)于小反芻獸疫疫病防控的幾點建議

①多管齊下抓實疫情風險排查和監(jiān)測預警。進一步加強對規(guī)模養(yǎng)殖場、農(nóng)貿(mào)市場和大型超市銷售攤位等重點場所的監(jiān)測范圍和力度，同時督導落實消毒滅原、生物安全體系建設(shè)、應(yīng)急處置等綜合防控措施，嚴防病毒在各環(huán)節(jié)交叉污染，尤其要截斷病毒從其他環(huán)節(jié)向養(yǎng)殖場戶的傳播途徑；②多方聯(lián)動抓強動物衛(wèi)生監(jiān)督和執(zhí)法監(jiān)管。建議市、鎮(zhèn)兩級農(nóng)業(yè)執(zhí)法機構(gòu)切實加強與公安、市場監(jiān)督等執(zhí)法單位的協(xié)同互動，建立聯(lián)合打擊違規(guī)調(diào)運、私屠濫宰、隨意丟棄病死動物等不法行為的常態(tài)化機制，完善相關(guān)有獎舉報制度，強化體制機制保障；③多措并舉抓細防控技術(shù)培訓和督查指導。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）要切實加強動物疫病防控相關(guān)政策、生物安全知識、消毒滅原技術(shù)規(guī)范等方面的宣傳普及，在養(yǎng)殖密集區(qū)、農(nóng)貿(mào)市場銷售區(qū)等實行“小區(qū)域單元格式”防控，嚴格落實“風險排查+重點監(jiān)控”“隔離防護+消毒滅原”等措施。

3.5 小結(jié)

瀏陽市位于湘東山地丘陵地區(qū)，牧草資源較為豐富，全市年出欄二十余萬只，養(yǎng)殖規(guī)?；桓?，大部分為散養(yǎng)養(yǎng)殖，圈牧混合為主，管理粗放，養(yǎng)殖環(huán)境一般，養(yǎng)殖戶疫病防控意識較差，缺乏良好的生物安全條件。雖然小反芻獸疫檢測陽性情況較為罕見，但該病的防控意識不可松懈，各級動物疫病防控人員要進一步提高認識，做好各級生物安全防控，根據(jù)實際情況合理制定免疫計劃，免疫后定期做好抗體水平監(jiān)測，實時觀察動物的臨床飼養(yǎng)情況，有效降低疫情發(fā)生風險，提高養(yǎng)殖效率。