基于邁瑞CAL8000流水線復(fù)檢規(guī)則的建立與驗證的單中心研究

劉瑞菡 劉麗 梁英 劉思 王鋒 明亮 劉自剛 孝感市中心醫(yī)院檢驗科 （湖北 孝感 432000）

內(nèi)容提要：目的：提高血細胞分析項目檢測的效能，建立適用于孝感市中心醫(yī)院基于邁瑞CAL8000流水線的血細胞分析復(fù)檢規(guī)則。方法：依據(jù)國際41條復(fù)檢標準結(jié)合CAL8000流水線上血細胞分析儀的性能及實驗室樣本分布特點制定初步的復(fù)檢規(guī)則，并根據(jù)實驗室工作需求制定復(fù)檢預(yù)期目標（假陰性率<5%、復(fù)檢率<20%），選取2021年5月18日～2021年5月28日門診及住院血細胞分析靜脈血標本1100例，以雙盲法分別進行儀器分析和血涂片鏡檢，應(yīng)用血涂片鏡檢的陽性判斷標準，以鏡檢結(jié)果為金標準，對比儀器分析和血涂片鏡檢結(jié)果，評估復(fù)檢規(guī)則對標本判斷的真陽性率、真陰性率、假陽性率、假陰性率以及血涂片復(fù)檢率。隨后重新選取2021年5月30日～5月31日300例標本按上述過程進行復(fù)檢規(guī)則確定后的驗證。結(jié)果：建立復(fù)檢規(guī)則的1100例樣本的真陽性率12.0%，假陽性率7.7%，真陰性率77.4%，假陰性率2.9%，復(fù)檢率19.7%。驗證復(fù)檢規(guī)則的300例樣本的真陽性率10.3%，假陽性率9.0%，真陰性率77.3%，假陰性率3.3%，復(fù)檢率19.3%。結(jié)論：復(fù)檢規(guī)則建立及驗證過程的假陰性率（2.9%<5%、3.3%<5%）及復(fù)檢率（19.7%<20%、19.3%<20%）均達到實驗室預(yù)期目標，復(fù)檢規(guī)則設(shè)置適宜，能滿足現(xiàn)階段實驗室對血細胞分析復(fù)檢的要求。

隨著血細胞分析檢測技術(shù)的發(fā)展，全自動血細胞分析儀能快速對血液樣本進行計數(shù)和分類，檢測結(jié)果的準確性和精密度也不斷提高[1]。但是血液分析儀只能作為細胞形態(tài)學(xué)的篩查手段，尚不能代替人工顯微鏡對各類血細胞（特別是骨髓細胞、異常細胞等）的識別和分類檢查功能，為保證血液分析儀檢測結(jié)果的真實可靠性，還需用顯微鏡驗證[2,3]。如僅依靠儀器的結(jié)果直接報告，可能造成漏診，甚至導(dǎo)致嚴重后果[3]。2005年，國際血液學(xué)復(fù)檢專家組依據(jù)當(dāng)時的客觀條件，提出了41條自動血細胞計數(shù)和白細胞分類計數(shù)的復(fù)檢標準，因復(fù)檢標本大，人力緊張及標本檢測時限要求，實際工作壓力大。為適應(yīng)臨床需求，檢驗科亟需提高檢測效能，做到不漏檢異常結(jié)果，同時更快地審核報告。這就要求各實驗室需根據(jù)自身儀器的性能及患者人群特征來制定適合的復(fù)檢規(guī)則。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年5月18日～2021年5月28日孝感市中心醫(yī)院門診及住院患者血液標本1100例，其中初診980例（占比80%），復(fù)診220例（占比20%）。標本涵蓋新生兒科、兒科、血液科、腫瘤科、婦產(chǎn)科等各臨床科室；標本均為EDTA-K2抗凝靜脈血，且從采集到上機檢測均在2h內(nèi)。

儀器與試劑：邁瑞CAL8000流水線：包含一臺主機、2臺BC-6800血細胞分析儀、1臺SC-120自動推染片機。使用儀器原裝配套各種試劑耗材、質(zhì)控品及校準品。2臺奧林巴斯CX43RF型號顯微鏡。

1.2 方法

1.2.1 確定暫定復(fù)檢規(guī)則、預(yù)期目標及鏡檢陽性標準

由科室從事形態(tài)學(xué)審核的5名高年資技術(shù)人員共同討論確定。依據(jù)國際41條復(fù)檢標準，結(jié)合CAL8000流水線的性能、實驗室樣本分布特點及此前復(fù)檢工作中的經(jīng)驗等，制定了初步的復(fù)檢規(guī)則（復(fù)檢規(guī)則具體內(nèi)容見表1），將復(fù)檢規(guī)則錄入到DMU軟件中，經(jīng)過1d的測試，觀察其運行正常。

表1.血細胞分析復(fù)檢規(guī)則

預(yù)期目標確定為假陰性率<5%，復(fù)檢率<20%。主要依據(jù)為國際血液學(xué)復(fù)檢協(xié)作組提出的為保證患者檢測結(jié)果安全性的最大可接受的假陰性率5%，以及實驗室實際工作中的標本來源、標本數(shù)量、人員能力、人員數(shù)量及臨床診斷需求等具體情況制定。

鏡檢陽性標準依據(jù)我國血細胞分析復(fù)檢血涂片鏡檢陽性判斷標準16條[4,5]：（1）細胞形態(tài)學(xué)改變：①紅細胞明顯大小不等，染色異常紅細胞>30%；②巨大血小板>15%；③見到血小板聚集；④存在Dohle小體的細胞>10%；⑤中毒顆粒中性粒細胞>10%；⑥空泡變性粒細胞>10%。（2）細胞數(shù)量/比例改變：①原始細胞≥1%；②早幼/中幼粒細胞≥1%；③晚幼粒細胞>2%；④桿狀核粒細胞>5%；⑤異常淋巴細胞>5%；⑥嗜酸粒細胞>5%；⑦嗜堿粒細胞>1%；⑧NRBC>1%；⑨漿細胞>1%。其中，④、⑥、⑦和⑧是國內(nèi)血液學(xué)復(fù)檢專家組建議添加的陽性標準。

1.2.2 以雙盲法分別進行儀器檢測和血涂片鏡檢

選定的每例標本分別進行儀器檢測同時制作2張血涂片，分別由兩位通過形態(tài)學(xué)比對的檢驗師對血涂片進行鏡檢[5]。當(dāng)兩者的結(jié)果不一致或偏差較大時，由第3位檢驗師復(fù)核，取結(jié)果相近的兩者均值。兩人各計數(shù)200個白細胞（White Blood Cell，WBC），共計400個WBC，取均值為人工WBC分類值，同時要關(guān)注白細胞、紅細胞及血小板形態(tài)，如存在中毒顆粒、紅細胞明顯大小不等、巨大血小板、血小板聚集等均需要記錄。鏡檢內(nèi)容包括：①WBC分類計數(shù)及形態(tài)觀察；②WBC和血小板（Platelet，PLT）數(shù)量評估；③紅細胞（Red Blood Cell，RBC）和PLT的大小、染色及形態(tài)；④有無巨大PLT及PLT聚集；⑤其他異常：有核紅細胞（Nucleated Red Blood Cells，NRBC）、RBC冷凝集及寄生蟲等[6]。

1.2.3 按照統(tǒng)計結(jié)果確定最終復(fù)檢規(guī)則

對儀器檢測觸發(fā)的陽性規(guī)則與血涂片鏡檢結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，若統(tǒng)計結(jié)果中假陰性率或復(fù)檢率超預(yù)期目標，則根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果調(diào)整復(fù)檢規(guī)則至其假陰性率及復(fù)檢率達預(yù)定目標。

1.2.4 復(fù)檢規(guī)則的驗證

再次選取新的300例樣本，運用已確定的復(fù)檢規(guī)則，重復(fù)上述儀器檢測和血涂片鏡檢，并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，計算其假陰性率及復(fù)檢率等。

2.結(jié)果

2.1 首批1100例樣本檢測結(jié)果

在選定的1100例樣本中，結(jié)果判斷以血涂片鏡檢結(jié)果為金標準，真陽性（TP）：觸發(fā)了任意規(guī)則，同時涂片鏡檢結(jié)果陽性（132例）。假陽性（FP）：觸發(fā)了任意復(fù)檢規(guī)則，涂片結(jié)果為陰性（85例）。真陰性（TN）：未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則，鏡檢結(jié)果為陰性（851例）。假陰性（FN）：未觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則，但涂片結(jié)果為陽性（32例）。儀器檢測1100例標本，觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則的有217例，復(fù)檢率為19.7%（217/1100）。具體數(shù)據(jù)見表2。

表2.首批1100例樣本檢測結(jié)果(n)

假陰性標本主要為：紅細胞形態(tài)異常（18例）、中性粒細胞胞漿中毒顆粒及空泡變性（6例）、桿狀核比率增高的核左移（4例）、血小板聚集（4例）。

假陽性標本主要為：未成熟顆粒（39例）、原始細胞/異常淋巴細胞/（13例）、異型淋巴細胞（12例）、原始細胞（11例）、有核紅細胞（6例）、碎片（4例）。

2.2 第二批300例樣本檢測結(jié)果

在驗證復(fù)檢規(guī)則的300例樣本中，觸發(fā)復(fù)檢規(guī)則的有60例，復(fù)檢率為19.3。數(shù)據(jù)見表3。

表3.第二批300例樣本檢測結(jié)果(n)

假陰性標本主要為：紅細胞形態(tài)異常（6例）、中毒顆粒（2例）、核左移（1例）、血小板聚集（1例）。

假陽性標本主要為：未成熟顆粒（16例）、異型淋巴細胞（6例）、原始細胞/異常淋巴細胞/（3例）、有核紅細胞（2例）。

2.3 結(jié)果綜合描述

建立復(fù)檢規(guī)則的假陰性率（2.9%<5%）、復(fù)檢率（19.7<20%）及設(shè)置的復(fù)檢規(guī)則運行后的假陰性率（3.3%<5%）及復(fù)檢率（19.3<20%）均達到實驗室預(yù)期目標，此次復(fù)檢規(guī)則設(shè)置適宜，能滿足現(xiàn)階段實驗室對血細胞分析復(fù)檢的要求。

3.討論

在此次基于CAL8000流水線復(fù)檢規(guī)則的建立與驗證過程中，本實驗室僅第一次設(shè)置的規(guī)則就通過了驗證，達到了預(yù)期目標。這是由于規(guī)則制定及審核的人員對儀器性能十分了解且前期一直按照舊版規(guī)則執(zhí)行復(fù)檢，積累了豐富的經(jīng)驗。否則可能需要設(shè)置多個版本來驗證，才能選取出最適合的[6]。

假陰性率是復(fù)檢規(guī)則設(shè)置中最重要的指標[4]。在本次實驗中，對疾病診斷有重要意義的原始細胞未發(fā)生漏檢；假陰性主要為紅細胞的形態(tài)、粒細胞中毒顆粒、核左移、血小板聚集等。同臨床相關(guān)科室探討后，紅細胞形態(tài)改變對貧血以及溶血性疾病診斷影響不大；中毒顆粒及核左移在感染、炎癥相關(guān)診斷只是參考指標，影響不大；但血小板出現(xiàn)假性減少對臨床影響很大，不可忽視。在臨床工作中有多種原因?qū)е卵“宄霈F(xiàn)聚集，檢驗人員要重視核實標本和顯微鏡復(fù)核。

此次復(fù)檢規(guī)則的建立結(jié)合了邁瑞CAL8000流水線上各儀器的性能，復(fù)檢率和漏檢率都比較低，具有臨床可操作性和有效性。在今后的工作中，本實驗室還將繼續(xù)在此基礎(chǔ)上，探索適用于血細胞分析流水線自動審核功能的復(fù)檢規(guī)則。