肉桂精油及其主要組分對(duì)飼料中常見(jiàn)真菌的抑菌活性的研究

■閆紅秀 劉香萍 任乃芃 軒一芙 李孟滕 梁文超 包雨微

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163319)

飼料富含多種營(yíng)養(yǎng)成分，且結(jié)構(gòu)疏松、吸濕性強(qiáng)，因此在一定溫度、濕度條件下，微生物易繁殖而發(fā)生腐敗或霉變，導(dǎo)致飼料感官發(fā)生改變，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低，縮短飼料貯存期，造成飼料資源的浪費(fèi)。在飼料中加入防霉劑等飼料添加劑，是提高飼料穩(wěn)定性和延長(zhǎng)貯存期的重要手段[1]。如在飼料中添加丙酸[2]、雙乙酸鈉[3]、苯甲酸和苯甲酸鈉[4]、富馬酸二甲酯[5]，能有效抑制霉菌等有害微生物的生長(zhǎng)繁殖，延長(zhǎng)飼料安全貯藏期。然而傳統(tǒng)防霉劑存在著導(dǎo)致動(dòng)物腸道菌群失衡、藥物殘留和抗藥性等問(wèn)題和風(fēng)險(xiǎn)。因此，尋找安全高效、綠色無(wú)殘留、環(huán)保、多功能的飼料添加劑成為熱點(diǎn)。

植物精油萃取自植物組織，有液體黃金的美譽(yù)，是現(xiàn)今發(fā)展較快的新型飼料添加劑，也是目前畜牧業(yè)、飼料工業(yè)研發(fā)的重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一[6]。肉桂精油在很多研究中表現(xiàn)出了很好的抗菌活性和抗氧化活性。陳毅然等[7]發(fā)現(xiàn)肉桂精油對(duì)黑曲霉（Aspergillus niger）和棕曲霉（Aspergillus ochraceus）具有最佳的抑制效果，優(yōu)于山蒼子精油和丁香精油；邱實(shí)等[8]研究表明肉桂精油能夠有效抑制黃曲霉毒素（Aspergillus flavus），對(duì)蓮子中黃曲霉毒素的污染起到保護(hù)作用；余煒等[9]探討了肉桂精油抗油脂氧化的能力，當(dāng)加入量為0.000 2%（質(zhì)量濃度）時(shí)，抗氧化效果最好；El-Baroty等[10]通過(guò)DPPH自由基清除與β-胡蘿卜素漂白法證實(shí)了肉桂精油具有明顯的抗氧化活性，可作為抗氧化劑的來(lái)源。目前肉桂精油已廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、果蔬保鮮、化工和畜牧業(yè)等領(lǐng)域，在飼料工業(yè)中，肉桂精油擁有良好的應(yīng)用前景[11]。但肉桂精油中各主要組分抑菌活性尚未明確，因此有必要進(jìn)一步進(jìn)行研究。

文章在明確飼料中主要致腐真菌種類基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究肉桂精油中各主要組分抑菌活性差異，為肉桂精油各組分進(jìn)一步開(kāi)發(fā)作為潛在飼料防霉劑提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

分離霉菌材料：豆粕。

肉桂精油，由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)草業(yè)科學(xué)實(shí)驗(yàn)室采用水蒸氣法提??；鄰甲氧基肉桂醛，購(gòu)自上海畢得醫(yī)藥科技有限公司；肉桂醛、乙酸桂酯、苯甲醛，購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 肉桂精油組分分析

氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）氣質(zhì)聯(lián)用條件為：色譜柱為DB-17MS 型毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm，日本島津公司）；起始溫度100 ℃，5 ℃/min的速率升至230 ℃，保持5 min；進(jìn)樣量1 μL；分流比20∶1；以氦作為載體氣體；載氣流量1 mL/min；質(zhì)譜（MS）條件：EI離子源溫度：230 ℃；電子能量：70 eV；掃描質(zhì)量范圍15～500 aum。按上述條件對(duì)精油樣品進(jìn)行GC-MS測(cè)定，將樣品峰質(zhì)譜通過(guò)與NIST02 質(zhì)譜庫(kù)中對(duì)比記錄得出結(jié)論，每種精油組分（以面積百分比表示）通過(guò)峰面積歸一化法分析各組分面積百分比。

1.2.2 飼料中真菌的分離純化

對(duì)飼料中真菌的分離培養(yǎng)，根據(jù)形態(tài)特征計(jì)算分離率，用接種針挑取分離率較高菌種的單個(gè)菌落，轉(zhuǎn)接至新的馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)5 d，培養(yǎng)期間觀察菌落生長(zhǎng)情況，并用光學(xué)顯微鏡鏡檢產(chǎn)孢情況。產(chǎn)孢后進(jìn)行單孢分離純化，用斜面PDA培養(yǎng)基，在4 ℃下保存菌種。

1.2.3 飼料真菌的形態(tài)學(xué)鑒定

采用菌落特征觀察和顯微觀察兩部分，利用光學(xué)顯微鏡，從真菌的培養(yǎng)基、菌落、分生孢子、頂囊等方面對(duì)真菌進(jìn)行初步鑒定。

1.2.4 飼料真菌的分子生物學(xué)鑒定

對(duì)純化真菌利用Omega真菌DNA提取試劑盒提取DNA，并測(cè)定真菌DNA濃度。利用rDNA-ITS區(qū)通用引物ITS1（5'-GTGTTGGGTGTTTGTCTCGC-3'）和ITS4（5'-GCAAAGCGCGA GATGTACTG-3'）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)流程如表1、表2所示。將PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序，所得序列與NCBI上的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)，并利用鄰接（NJ）法構(gòu)建發(fā)育樹(shù)。

表1 真菌PCR反應(yīng)體系

表2 真菌PCR反應(yīng)條件

1.2.5 抑菌圈直徑測(cè)定

采用濾紙片瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定肉桂精油及其主要組分肉桂醛、乙酸桂酯、鄰甲氧基肉桂醛、苯甲醛對(duì)分離得到真菌的抑菌圈直徑[12]。取真菌孢子懸浮液（106～107CFU/mL）100 μL于PDA培養(yǎng)基上均勻涂布，待菌液稍干，在每個(gè)培養(yǎng)皿中央貼一片含藥濾紙片（6 mm，4 μL），同時(shí)以飼料中常用的防霉劑雙乙酸鈉（250 mg/mL）和山梨酸鉀（250 mg/mL）為陽(yáng)性對(duì)照，無(wú)菌水和二甲基亞砜（DMSO）為陰性對(duì)照，每組3 個(gè)重復(fù)，置于28 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后，用十字交叉法測(cè)定抑菌圈直徑。抑菌效果以抑菌圈直徑的大小為衡量標(biāo)準(zhǔn)，精油抑菌試驗(yàn)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)[13]為：抑菌圈直徑＞20 mm為極度敏感、15～20 mm為高度敏感、10～15 mm為中度敏感、7～9 mm為低度敏感、＜7 mm為不敏感。

1.2.6 最小抑菌濃度（MIC）及最小殺菌濃度（MBC）測(cè)定

MIC 測(cè)定[14]：將不同濃度的肉桂精油、肉桂醛、乙酸桂酯、鄰甲氧基肉桂醛、苯甲醛的DMSO溶液，分別加入到熔化后的PDA培養(yǎng)基中，充分混勻后制成不同濃度的含藥培養(yǎng)基。取7種真菌的菌液各100 μL，在含藥培養(yǎng)基上涂布均勻，同時(shí)以山梨酸鉀為陽(yáng)性對(duì)照，DMSO 為陰性對(duì)照，每個(gè)處理3 個(gè)平行，置于恒溫培養(yǎng)箱中28 ℃培養(yǎng)48 h，觀察并統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果，無(wú)明顯生長(zhǎng)菌落的含藥培養(yǎng)基濃度即為待測(cè)樣品的MIC。

MBC測(cè)定：對(duì)MIC測(cè)定試驗(yàn)中的所有無(wú)明顯菌落生長(zhǎng)的平皿進(jìn)行MBC的測(cè)定試驗(yàn)。用少量無(wú)菌水在平皿上沖洗后，取沖洗后的菌液在不含藥的PDA培養(yǎng)基上涂布平板，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h 后，觀察培養(yǎng)基表面有無(wú)菌落生長(zhǎng)，無(wú)菌落生長(zhǎng)則代表該培養(yǎng)基濃度為其MBC。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Microsoft Excel 進(jìn)行簡(jiǎn)單的數(shù)據(jù)錄入及處理，采用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，處理間采用LSD法進(jìn)行多重比較，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的顯著水平以P＜0.05為基準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 肉桂精油組分分析（見(jiàn)表3）

以面積歸一化法測(cè)得肉桂精油的各組分的相對(duì)百分含量，結(jié)果如表3 所示，在已鑒定出的肉桂精油組分中，烯類化合物最多，有15 種，醛類化合物9 種，醇類化合物6 種，酮類化合物2 種。在肉桂精油的所有組分中肉桂醛的相對(duì)百分含量最多，其相對(duì)百分含量為62.72%，乙酸桂酯其次，相對(duì)百分含量為11.54%，其余組分相對(duì)百分含量大于0.5%的組分有鄰甲氧基肉桂醛（7.33%）、苯甲醛（2.67%）、反油酸（1.76%）、苯丙醛（1.48%）、反式肉桂醛（1.18%）、立方烯（0.93%）、苯乙醇（0.92%）、間羥基苯甲醛（0.86%）、石竹烯（0.55%）、α-衣蘭油烯（0.54%）。

表3 肉桂精油化學(xué)組分

2.2 飼料真菌的分離率（見(jiàn)圖1）

圖1 飼料中真菌的分離率

從飼料中分離得到133株具有典型特征的菌株，據(jù)其形態(tài)特征劃分為11類，按分離率（見(jiàn)圖1）由高到低進(jìn)行排序，用A～K表示，其中分離率較高的有7種，A 菌29 株分離率為21.80%，B 菌25 株為18.79%，C、D菌17株為12.78%，E菌15株11.28%，F(xiàn)菌12株9.02%，G 菌10 株7.51%，該7 種菌占總菌株數(shù)的93.96%。H～K菌分離率不足5%，不進(jìn)行后續(xù)研究。

2.3 飼料真菌菌落形態(tài)學(xué)鑒定（見(jiàn)圖2）

圖2 A～G菌菌落形態(tài)特征

將飼料中分離率較高的7 種真菌（A、B、C、D、E、F、G）進(jìn)行分離純化，對(duì)其形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行初步鑒定。菌株A在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)快速，呈赭黃色近于蜜黃色、質(zhì)地絲絨狀、中央部分隆起、具同心環(huán)紋，在培養(yǎng)基上著生根部伴有透明菌絲（圖2A），根據(jù)形態(tài)學(xué)分類，可初步將該菌株鑒定為曲霉菌屬菌種。B菌在PDA 培養(yǎng)基上為分散的灰黃色菌落、質(zhì)地絲絨狀，菌落在培養(yǎng)基上叢生、中間凸、邊緣低（圖2B），根據(jù)其菌落顏色及形態(tài)等特征，可初步鑒定為黃曲霉。C菌在PDA 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速，菌體初為白色、后變成黑色、厚絨狀，呈放射性生長(zhǎng)（圖2C），根據(jù)其形態(tài)特征，可以初步鑒定為黑曲霉（Aspergillus niger）。D 菌在PDA培養(yǎng)基上呈暗煙綠色，菌落生長(zhǎng)迅速，3 d左右成熟，老后菌體顏色變得更深、菌落分散、質(zhì)地絨狀或絮狀（圖2D），根據(jù)其生長(zhǎng)形態(tài)特征，初步鑒定為曲霉屬菌。E菌在PDA培養(yǎng)基上呈深綠色厚毛絨狀、菌落分散、菌落邊緣在培養(yǎng)基上匍匐生長(zhǎng)（圖2E），邊緣菌絲呈白色，菌體生長(zhǎng)伴有色素產(chǎn)生，使培養(yǎng)基改變顏色，與枝孢菌形態(tài)相似。F菌在PDA培養(yǎng)基上呈綠色、表面粗糙、菌落質(zhì)地絲絨狀，中間凸起且菌落底部瓊脂呈紅色、邊界呈規(guī)則圓狀、菌落直徑為1～2 cm，在PDA上著生密集（圖2F），初步鑒定其為籃狀菌。G菌在PDA培養(yǎng)基上為氣生菌絲，最初為粉白色，后變?yōu)榉圩仙?，菌落絨毛狀（圖2G），初步鑒定為鐮刀菌屬。

2.4 飼料真菌的分子生物學(xué)鑒定（見(jiàn)圖3、圖4）

菌株A、B、C、D、E、F、G經(jīng)提取其DNA，以通用引物ITS1和ITS4對(duì)rDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳測(cè)得其片段大小范圍在500～750 bp，如圖3所示。

圖3 A～G菌的rDNA-ITS片段PCR擴(kuò)增圖譜

將測(cè)得的A～G 菌的ITS 序列登錄GenBank 進(jìn)行BLAST 序列比對(duì)，并在MEGA 6.0 軟件中基于rDNAITS區(qū)序列利用NJ法進(jìn)行同源性分析，生成系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖4），結(jié)果顯示：A菌與孔曲霉（A. Ostianus）的ITS序列同源性為100%，親緣關(guān)系最近，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定菌種為孔曲霉；B菌與黃曲霉（A. Flavus）的ITS序列同源性為100%，親緣關(guān)系最近，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定菌種為黃曲霉；C 菌與黑曲霉（A. Niger）ITS序列同源性為100%，親緣關(guān)系最近，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定菌種為黑曲霉；D 菌與煙曲霉菌（A. Fumigatus）ITS序列同源性為100%，親緣關(guān)系最近，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定菌種為煙曲霉。E菌與枝狀枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）ITS 序列同源性為100%，親緣關(guān)系最近，結(jié)合E菌的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定菌種為枝狀枝孢菌；F菌與艾米斯托克籃狀菌（Talaromyces amestolkiae）ITS序列同源性為100%，親緣關(guān)系最近，結(jié)合其形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定菌種為艾米斯托克籃狀菌；G菌與輪狀鐮刀菌（Fusarium verticillioides）ITS序列同源性為100%，親緣關(guān)系最近，結(jié)合其形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果，確定菌種為輪狀鐮刀菌。

圖4 基于rDNA-ITS區(qū)序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

2.5 肉桂精油及其主要組分抑菌圈直徑（見(jiàn)圖5）

由圖5可知，肉桂精油及其主要組分均對(duì)這7種真菌具有不同程度的抑制作用。真菌的兩種陽(yáng)性對(duì)照雙乙酸鈉和山梨酸鉀是飼料中常見(jiàn)的防霉劑，雙乙酸鈉對(duì)部分真菌有抑制效果（黑曲霉、枝狀枝孢菌、艾米斯托克籃狀菌），山梨酸鉀對(duì)所有菌種皆有抑制效果，但由于菌種的復(fù)雜多樣，抑制效果也大有不同，山梨酸鉀對(duì)孔曲霉、黃曲霉、黑曲霉的抑菌圈直徑范圍較?。?～9 mm），屬于低度敏感等級(jí)，對(duì)枝狀枝孢菌極度敏感，其抑菌圈直徑為（21.50±2.92）mm，對(duì)煙曲霉和艾米斯托克籃狀菌中度敏感。肉桂精油及其組分的抑菌圈直徑全部顯著優(yōu)于山梨酸鉀（P＜0.05），抑菌效果強(qiáng)于防霉劑。

在所有參試樣品中，肉桂精油、肉桂醛和鄰甲氧基肉桂醛的抑菌效果較好，對(duì)所有供試菌種的抑菌圈直徑都在20 mm以上，屬極度敏感，肉桂醛抑制效果最好，抑菌圈直徑均在50 mm以上，且強(qiáng)于肉桂精油。肉桂精油、肉桂醛和鄰甲氧基肉桂醛對(duì)孔曲霉、黃曲霉、黑曲霉、煙曲霉、枝狀枝孢菌的抑菌效果均有顯著差異（P＜0.05），而肉桂精油與肉桂醛對(duì)艾米斯托克籃狀菌和輪狀鐮刀菌的抑菌直徑差異不顯著（P＞0.05）。

乙酸桂酯對(duì)煙曲霉和艾米斯托克藍(lán)狀菌的抑制效果較好，為極度敏感，對(duì)黑曲霉和枝狀枝孢菌為高度敏感，對(duì)孔曲霉、黃曲霉和輪狀鐮刀菌為中度敏感。苯甲醛對(duì)孔曲霉和煙曲霉抑制效果較好，為極度敏感，對(duì)其余菌種皆為高度敏感。除黃曲霉和煙曲霉外，苯甲醛與乙酸桂酯的抑菌效果均不顯著（P＞0.05），可見(jiàn)，苯甲醛與乙酸桂酯的抑菌活性并無(wú)太大差異。肉桂精油及其組分的抑菌活性均顯著優(yōu)于對(duì)照飼料防霉劑，其組分抑菌活性總趨勢(shì)為：肉桂醛＞肉桂精油＞鄰甲氧基肉桂醛＞乙酸桂酯＞苯甲醛。

2.6 肉桂精油及其主要組分MIC、MBC（見(jiàn)圖6）

圖6 肉桂精油及其組分對(duì)真菌和細(xì)菌的MIC及MBC

由圖6 可知，肉桂精油及其組分對(duì)這7 種真菌均有不同程度的殺菌效果，其中肉桂醛擁有最強(qiáng)抑菌效果，其MIC范圍是40～80 μg/mL，MBC范圍為60～100 μg/mL，肉桂精油的MIC、MBC 范圍均為60～100 μg/mL，當(dāng)肉桂精油和肉桂醛濃度在100 μg/mL時(shí)，真菌不再生長(zhǎng)。鄰甲氧基肉桂醛的MIC 范圍為80～200 μg/mL，MBC范圍為80～240 μg/mL，對(duì)煙曲霉、枝狀枝孢菌、艾米斯托克籃狀菌、輪狀鐮刀菌表現(xiàn)出了強(qiáng)抑菌效果。乙酸桂酯對(duì)所有參試真菌的MIC值在500～1 000 μg/mL之間，MBC范圍為600～1 200 μg/mL，苯甲醛對(duì)除艾米斯托克籃狀菌外的參試真菌MBC都小于1 000 μg/mL。

3 討論

飼料常常受真菌的影響而腐敗變質(zhì)，在飼料儲(chǔ)藏過(guò)程中的霉菌污染以青霉屬、曲霉屬、根霉屬和鐮刀霉屬為主[15]，如飼料中多種霉菌毒素，如黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、煙曲霉毒素、赭曲霉毒素、念珠鐮孢霉和增生鐮孢霉毒素等[16-19]。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)飼料中的霉菌進(jìn)行分離純化，結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒定和PCR分子檢測(cè)技術(shù)，對(duì)其中7種分離率較高的真菌進(jìn)行鑒定，其中有4種曲霉屬菌，枝孢菌、籃狀菌、鐮刀菌各1種。為了使肉桂精油及其組分能更有效應(yīng)用于飼料中，本試驗(yàn)選擇肉桂精油、肉桂醛、鄰甲氧基肉桂醛、乙酸桂酯和苯甲醛為研究對(duì)象，對(duì)飼料分離得到的7種真菌（孔曲霉、黃曲霉、黑曲霉、煙曲霉、枝狀枝孢菌、艾米斯托克籃狀菌、輪狀鐮刀菌）進(jìn)行抑菌活性測(cè)定。

肉桂醛是肉桂精油中含量最多的組分，在許多研究中都表現(xiàn)了良好的抑菌活性。鄔本成等[20]研究表明肉桂精油中的肉桂醛可有效抑制飼料中青霉和黑曲霉菌的生長(zhǎng)；魏娟[21]研究表明肉桂醛可顯著抑制接骨木鐮刀菌（Fusarium sambucinum）的孢子萌發(fā)及菌落生長(zhǎng)（P＜0.05），MIC 為3 mmol/L；Yin 等[22]研究表明肉桂醛可通過(guò)破壞細(xì)胞膜與影響蛋白質(zhì)代謝的方式來(lái)抑制嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）的生長(zhǎng)；謝小梅等[23]研究表明，肉桂醛具有良好的抗曲霉菌活性，對(duì)黃曲霉、煙曲霉的MIC分別為0.10、0.05 μg/mL。但是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)肉桂精油的其他組分研究較少，認(rèn)為精油的抑菌活性不是單一組分所能達(dá)到的，而可能是多種組分相互作用的結(jié)果[24]。李秀竹等[25]探究了反式肉桂酸、反式鄰甲氧基肉桂醛、反式肉桂醛對(duì)膠孢炭疽菌的抑菌活性，結(jié)果表明這3種物質(zhì)均可在一定程度上延緩病菌孢子的萌發(fā)；牛彪等[26]發(fā)現(xiàn)肉桂精油對(duì)5種常見(jiàn)致病菌均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制效果，主要的抗菌組分為肉桂醛、2'-甲氧基肉桂醛、香豆素、乙酸桂酯、苯丙醛、苯甲醛。在本試驗(yàn)中，肉桂精油及其組分對(duì)各種真菌均有較強(qiáng)的抑菌活性，被抑制的真菌中既有曲霉屬菌，也有鐮刀菌、籃狀菌和枝孢菌，可以推斷肉桂精油及其組分對(duì)飼料真菌均具有廣譜抑菌活性。其中，肉桂醛表現(xiàn)出了強(qiáng)于肉桂精油的抑菌效果，其真菌抑菌圈直徑均在50 mm 以上，等級(jí)劃分屬極度敏感，可見(jiàn)肉桂醛確為肉桂精油的主要抑菌活性組分。除肉桂醛外，其他組分也表現(xiàn)出了一定的抑菌活性，鄰甲氧基肉桂醛對(duì)煙曲霉、枝狀枝孢菌、艾米斯托克籃狀菌、輪狀鐮刀菌表現(xiàn)出了強(qiáng)抑菌效果，與肉桂精油、肉桂醛的抑菌效果差異不顯著，且由于鄰甲氧基肉桂醛為固體形態(tài)，因此在參試過(guò)程中其濃度與對(duì)照山梨酸鉀、雙乙酸鈉一致（250 mg/mL），由此可以認(rèn)為鄰甲氧基肉桂醛亦為肉桂精油的主要活性組分，而苯甲醛與乙酸桂酯對(duì)真菌的抑菌活性均較弱。

肉桂精油及其組分的抑菌活性均顯著優(yōu)于對(duì)照飼料防霉劑雙乙酸鈉和山梨酸鉀，可見(jiàn)肉桂精油及其組分均可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為飼料防霉劑使用，其抑菌活性總趨勢(shì)為：肉桂醛＞肉桂精油＞鄰甲氧基肉桂醛＞乙酸桂酯＞苯甲醛。從本試驗(yàn)的抑菌結(jié)果可以看出：肉桂精油中抑菌活性組分不僅只有肉桂醛，鄰甲氧基肉桂醛、乙酸桂酯、苯甲醛均表現(xiàn)出了一定程度的抑菌活性，可見(jiàn)，肉桂精油的抑菌活性是肉桂醛與多種抑菌活性組分共同作用的結(jié)果。

4 結(jié)論

從飼料中分離鑒定分離率較高的7 種常見(jiàn)真菌（A～G）分別為：孔曲霉、黃曲霉、黑曲霉、煙曲霉、枝狀枝孢菌、艾米斯托克籃狀菌、輪狀鐮刀菌。

肉桂精油及其組分對(duì)飼料中常見(jiàn)真菌均具有廣譜抑菌活性，其抑菌活性：肉桂醛＞肉桂精油＞鄰甲氧基肉桂醛＞乙酸桂酯＞苯甲醛，其中肉桂醛、鄰甲氧基肉桂醛的抑菌效果最好。