骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)與多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)在多發(fā)性骨髓瘤檢測中的應(yīng)用*

何 麗，劉蓮芳，周 謙，周勤峰△

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬張家港醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.腫瘤科，江蘇張家港 215600

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是以骨髓中惡性漿細(xì)胞異常增生和聚集為特征的一種惡性腫瘤，同時(shí)伴隨廣泛的浸潤，浸潤范圍包括淋巴結(jié)、骨質(zhì)、肝脾、神經(jīng)系統(tǒng)等[1]。MM好發(fā)于中老年人群，隨著年齡的增長發(fā)病率逐漸升高[2]。臨床表現(xiàn)主要為貧血、高鈣血癥、腎功能不全、溶骨性損傷等[3]。由于MM的臨床表現(xiàn)多樣化，在臨床工作中容易將其首發(fā)癥狀診斷為相應(yīng)的常見病，因此誤診和漏診率比較高[4-5]。本研究通過回顧性分析本院近年來已經(jīng)確診的36例MM患者骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)與多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢查結(jié)果，分析其相關(guān)性，以加強(qiáng)臨床醫(yī)生對(duì)MM診斷的認(rèn)識(shí)，提高M(jìn)M的檢出率。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年10月至2021年5月于本院就診的MM患者36例為研究對(duì)象，其中初診患者19例(新發(fā)組)，復(fù)查患者17例(復(fù)診組)；36例患者中男20例、女16例，年齡36～83歲，患者均符合《血液學(xué)診斷與療效標(biāo)準(zhǔn)》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。根據(jù)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測出漿細(xì)胞比例的結(jié)果將36例MM患者分成以下3組：A組漿細(xì)胞比例≥30%；B組漿細(xì)胞比例在10%～<30%；C組漿細(xì)胞比例<10%。

1.2儀器與試劑 流式細(xì)胞儀為BD FACS Calibur，檢測抗體為CD19、CD56、CD117、CD138、CD81、CD27、CD38、CD45、胞質(zhì)cLambda、胞質(zhì)cKappa的混合抗體，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測主要通過劉氏染液染色觀察。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 經(jīng)患者知情同意，按常規(guī)方法行骨髓穿刺術(shù)，取0.2 mL骨髓液進(jìn)行推片以備骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測；此外，另取2 mL骨髓液置于肝素鋰抗凝管做多參數(shù)流式細(xì)胞學(xué)檢測，所有標(biāo)本在6 h內(nèi)完成上機(jī)檢測。

1.3.2骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查 待骨髓推片自然干燥后，行劉氏染色5 min，用流水沖洗、晾干。顯微鏡下鏡檢并按細(xì)胞的種類、發(fā)育階段分類計(jì)數(shù)200～500個(gè)有核細(xì)胞，計(jì)算出各類細(xì)胞的百分率，包括粒系、紅系、淋巴細(xì)胞系、單核細(xì)胞系、漿細(xì)胞及組織網(wǎng)狀細(xì)胞等。其中以漿細(xì)胞≥10%并伴有形態(tài)異常為MM的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.3多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)分析 按說明書提供的多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞表面抗原及胞內(nèi)抗原方法進(jìn)行標(biāo)記，在試管中加入50 μL骨髓抗凝血和相關(guān)熒光標(biāo)記抗體各2 μL，渦旋混勻后避光孵育15 min，加入氯化銨溶血?jiǎng)瑴u旋混勻后再避光放置10 min。洗滌、離心去除上清液，加入生理鹽水重懸并通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，分析骨髓細(xì)胞抗原表達(dá)熒光強(qiáng)度及熒光陽性細(xì)胞百分率，其中陽性定義為細(xì)胞膜抗原表達(dá)超過20%。

2 結(jié) 果

2.1兩種方法檢測漿細(xì)胞比例的相關(guān)性分析 36例患者中，A組15例，占41.67%；B組6例，占16.67%；C組15例，占41.67%。兩種方法檢測漿細(xì)胞比例的結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.786，P<0.05)；此外，兩種檢測方法檢測漿細(xì)胞比例的結(jié)果在A組、B組中不相關(guān)(r=0.425、0.033，P>0.05)，但在C組中呈正相關(guān)(r=0.734，P<0.05)。

2.2兩種方法檢測MM患者的漿細(xì)胞比例的結(jié)果比較 骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測漿細(xì)胞比例為(25.72±8.33)%，多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測漿細(xì)胞比例為(11.48±3.29)%，結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；此外，兩種檢測方法檢測漿細(xì)胞比例在A組、C組中比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但在B組中比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩種方法檢測漿細(xì)胞比例的結(jié)果比較

2.3兩種方法檢測漿細(xì)胞比例對(duì)診斷MM患者的敏感性比較 A、B、C這3組中多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測漿細(xì)胞比例≥10%的例數(shù)分別有12例、3例、0例，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測漿細(xì)胞比例≥10%的例數(shù)分別有15例、6例、0例；36例MM患者中，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測漿細(xì)胞比例≥10%的總例數(shù)有21例，敏感性為58.33%；多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測漿細(xì)胞比例≥10%的總例數(shù)有15例，敏感性為41.67%。見表2。

表2 兩種方法檢測漿細(xì)胞比例對(duì)診斷MM的敏感性比較(%)

2.4兩種方法在新發(fā)組和復(fù)診組中的敏感性比較 結(jié)果顯示，兩種方法在新發(fā)組和復(fù)診組中的敏感性比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.833、0.825)，見表3、4。

表3 骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)在新發(fā)組和復(fù)診組中的敏感性比較(n)

表4 多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)在新發(fā)組和復(fù)診組中的 敏感性比較(n)

2.5多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測cKappa、cLambda的情況統(tǒng)計(jì) A、B、C這3組中多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測cKappa/cLambda的陽性例數(shù)共有33例，A、B、C組中陽性例數(shù)分別有15例、6例、12例。

3 討 論

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查在血液系統(tǒng)疾病臨床診斷中有重要作用，它能夠清晰地顯示MM細(xì)胞的形態(tài)特征，尤其是單克隆漿細(xì)胞，可作為MM的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[7]。MM中單克隆漿細(xì)胞比例一般≥10%且形態(tài)異常，胞體體積較大，常成堆出現(xiàn)。盡管如此，但由于漿細(xì)胞在骨髓中為灶性分布，導(dǎo)致臨床上不同部位穿刺的腫瘤細(xì)胞差異較大，部分分化良好的漿細(xì)胞與正常漿細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上非常難區(qū)分[8]，因此早期診斷MM比較困難。若該病未得到有效治療，病情發(fā)展至晚期，會(huì)導(dǎo)致療效不佳或患者失去治療機(jī)會(huì)[9]。

近年來，隨著對(duì)MM研究的不斷深入、診斷方法及治療要求的不斷提高和完善，MM的診斷模式已從單純的骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)逐步擴(kuò)展為與細(xì)胞生物學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)相結(jié)合[10]。例如多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)為MM的精確診斷、治療及預(yù)后判斷提供了越來越多試驗(yàn)依據(jù)。尤其是多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)能夠客觀、快捷、準(zhǔn)確地定量檢測單個(gè)細(xì)胞的膜上或者胞內(nèi)表達(dá)的多種抗原成分，提高了MM檢測的靈敏度，逐漸成為MM診斷的常規(guī)方法[11-12]。本研究結(jié)果顯示，36例MM患者中，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測漿細(xì)胞比例的與多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測漿細(xì)胞比例呈正相關(guān)(r=0.786，P<0.05)，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測漿細(xì)胞比例的結(jié)果較多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)高(P<0.05)，與相關(guān)研究結(jié)果一致[13]。此外，兩種方法檢測漿細(xì)胞比例結(jié)果在A組、C組中比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但在B組中比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。以上結(jié)果說明骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)在檢測漿細(xì)胞的“量”上有明顯優(yōu)勢，造成多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測的漿細(xì)胞比例要比骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)比例少的原因可能為多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測漿細(xì)胞易被破壞。此外，在骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)與多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測漿細(xì)胞比例對(duì)診斷MM的敏感性分析中比較發(fā)現(xiàn)，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)在檢測漿細(xì)胞比例敏感性方面較多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)高。進(jìn)一步以新發(fā)及復(fù)診患者分層，比較在新發(fā)組和復(fù)診組中兩種檢測方法的敏感性，結(jié)果顯示骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)和多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)在新發(fā)組和復(fù)診組中敏感性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明復(fù)診治療患者并不影響兩種檢測方法診斷MM的敏感性。

cKappa輕鏈、cLambda輕鏈為MM中異常漿細(xì)胞的標(biāo)志特征之一[14]。本研究結(jié)果顯示，A組、B組、C組這3組中采用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測到的cKappa/cLambda陽性例數(shù)分別有15例、6例、12例，結(jié)果表明在漿細(xì)胞比例<10%時(shí)多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)MM的診斷有提示作用，可以敏感地檢測出異常漿細(xì)胞。

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)一直以來在MM漿細(xì)胞比例檢測方面存在著不可替代的作用，但由于其局限性，多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用可以提高M(jìn)M異常漿細(xì)胞的檢測率，從而減少漏診率。此外，多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)可通過對(duì)標(biāo)本進(jìn)行多參數(shù)分析，應(yīng)用范圍更大，可同時(shí)檢測到異常漿細(xì)胞表面和胞內(nèi)多個(gè)抗原，為判斷疾病進(jìn)展、靶向治療及預(yù)后監(jiān)測等提供有力依據(jù)[15-16]。因此，有條件的實(shí)驗(yàn)室，可聯(lián)合兩種檢驗(yàn)方法進(jìn)行MM的檢測，從而提高M(jìn)M的檢出率。