基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接探討瓜蔞-薤白治療冠心病的作用機(jī)制

李 昕 蒙秀東 史麗萍

(天津中醫(yī)藥大學(xué),天津,301617)

冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)是由于冠狀動脈粥樣樣硬化使管腔狹窄或阻塞,導(dǎo)致心肌缺血,缺氧或壞死而引發(fā)的心臟疾病[1],世界衛(wèi)生組織將其分為隱匿型冠心病、心絞痛、心肌梗死、慢性心肌病和猝死5種臨床類型。據(jù)報(bào)告,2017年全球CHD患病人數(shù)估計(jì)為1.1億,因CHD病死人數(shù)估計(jì)為892萬,是全球第一位的死亡原因,在我國,心血管病患病率及病死率仍處于上升階段,據(jù)推算2018年CHD患病人數(shù)為1 100萬,而心血管死亡率居首位,高于腫瘤及其他疾病,占居民死亡構(gòu)成的40%以上[2],中國心血管病負(fù)擔(dān)日漸加重,已成為了重大的公共衛(wèi)生問題。

CHD在中醫(yī)屬于“胸痹,心痛”的范疇,其病理過程從動脈粥樣硬化和血脂升高到心肌缺血和血液流變學(xué)改變可以看為由“痰”至“瘀(毒)”的過程,目前對于CHD的中藥治療也以豁痰去瘀為主?！督饏T要略·胸痹心痛短氣病脈證治第九》提出“陽微陰弦”為胸痹的基本病機(jī),書中列出治療方前3位:瓜蔞薤白白酒湯、瓜蔞薤白半夏湯和枳實(shí)薤白桂枝湯分別用于治療胸痹主證、重證和實(shí)證,三方中均含有“瓜蔞-薤白”藥對,有研究發(fā)現(xiàn)瓜蔞、薤白合用對于清除氧自由基、減輕氧化反應(yīng)而抑制P38、Jun激酶、胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2蛋白磷酸化以減輕缺血損傷以保護(hù)心肌,降低紅細(xì)胞壓積、血液黏度和抑制血小板聚集以及降低血脂具有明顯作用[3-5],但仍缺乏藥物治療CHD特征起效成分及治療靶點(diǎn)研究,本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法,對瓜蔞-薤白治療CHD的潛在起效成分、作用靶點(diǎn)及通路進(jìn)行探索。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于系統(tǒng)生物學(xué)理論,配合計(jì)算機(jī)技術(shù)進(jìn)步的基礎(chǔ)提出的新策略,以“疾病-表型-基因-藥物”多層次網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)地闡釋復(fù)雜的藥物協(xié)同作用于人體的機(jī)制,其在整體條件下開展研究,重視機(jī)體及網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的整體反應(yīng)與中醫(yī)整體觀念不謀而合。因此,本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法,對瓜蔞—薤白治療冠心病的機(jī)制進(jìn)行探索,為進(jìn)一步的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 “瓜蔞-薤白”藥對活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選 使用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP.https://tcmspw.com/tcmsp.php)和中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具(BATMAN-TCM,http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/index.php/Home/Index/index)對瓜蔞-薤白藥對的活性成分及作用靶點(diǎn)進(jìn)行篩選[6-7],將“Herb name”設(shè)置為檢索類別,關(guān)鍵詞為“GuaLou”和“XieBai”,將口服生物利用度(Oral Bioavailability,OB)≥30%、類藥性(Drug Likeness,DL)≥0.18作為條件對活性成分進(jìn)行篩選。然后對滿足條件的活性成分在線獲取其作用靶點(diǎn)。

1.2 冠心病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選 使用GeneCards數(shù)據(jù)庫(https://www.genecards.org/)在線獲取冠心病相關(guān)靶點(diǎn),檢索詞為“Coronary Heart Disease”,將滿足條件的蛋白名以及1.1獲得的藥物活性成分的作用靶點(diǎn)使用Uniprot數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)對靶點(diǎn)名稱進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。

1.3 藥物-活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將1.1得到的藥物、活性成分和作用靶點(diǎn)三者之間的關(guān)系利用Cytoscape 3.8.0軟件[8]繪制成“藥物-活性成分-作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 交集基因蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-protein Interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將1.1得到的瓜蔞-薤白作用靶點(diǎn)與1.2得到的CHD相關(guān)靶點(diǎn)映射,其中交集部分視為瓜蔞-薤白治療冠心病的潛在作用靶點(diǎn),并使用在線繪畫工具繪制韋恩圖(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)。將瓜蔞-薤白與冠心病的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/cgi/input.pl)在線構(gòu)建PPI并把網(wǎng)絡(luò)圖導(dǎo)入Cytoscape軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)圖的繪制[9]。將瓜蔞-薤白治療冠心病潛在的116個靶點(diǎn)導(dǎo)入搜索鄰近基因的重復(fù)實(shí)例的工具(Search Tool for Recurring Instances of Neighbouring Genes，STRING)數(shù)據(jù)庫,在線獲取PPI網(wǎng)絡(luò)圖,將PPI網(wǎng)絡(luò)圖導(dǎo)出至Cytoscape 3.8.0軟件的Tools-Analyze network進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觥?/p>

1.5 交集基因的富集分析 利用Cytoscape的插件ClueGO[10]對交集靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體(Gene Ontology,GO)富集分析和京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析及可視化處理,將瓜蔞-薤白治療冠心病的潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行在線GO富集分析和KEGG富集分析,將GO和KEGG富集分析結(jié)果以P值從小到大作為排序依據(jù)使用R語言ggplot2進(jìn)行繪圖分析,其中GO富集分析結(jié)果包括生物過程(Biological Process,BP)、細(xì)胞組分(Cellular Component,CC)、分子功能(Molecular Function,MF)。使用Cytoscape插件ClueGO對潛在作用靶點(diǎn)在GO和KEGG通路中的相互作用進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治黾翱梢暬幚?將Clue GO插件中參數(shù)設(shè)置為Kappa Score和P-value分別設(shè)置為0.6和0.000 1,物種設(shè)置為Homo Sapiens。

1.6 活性成分-靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 使用Cytoscape軟件將1.5得到的分?jǐn)?shù)較高的KEGG通路和1.1收集到的藥物活性成分及藥物-疾病共有作用靶點(diǎn)繪制成“活性成分-作用靶點(diǎn)-KEGG通路”網(wǎng)絡(luò)圖。以P值作為排序依據(jù)對潛在作用靶點(diǎn)的KEGG通路進(jìn)行排名,將P值最低的前20條KEGG通路作為瓜蔞-薤白治療冠心病的核心通路,再將20條KEGG通路及其靶點(diǎn)與之前的藥物-活性成分網(wǎng)絡(luò)匯合,得到以下活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖,使用Cytoscape的Tools-Analyze network工具對網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治觥?/p>

1.7 分子對接驗(yàn)證核心活性成分和作用靶點(diǎn) 將“活性成分-作用靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路”網(wǎng)絡(luò)中度值較大的活性化合物及作用靶點(diǎn)作為受體和配體進(jìn)行分子對接驗(yàn)證。其中配體的三維結(jié)構(gòu)來自PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/),核心靶點(diǎn)的三維結(jié)構(gòu)來自PDB數(shù)據(jù)庫(http://www1.rcsb.org/)[11],然后運(yùn)用AutoDock Vina進(jìn)行分子對接,對接活性口袋包含該靶點(diǎn)所有分子,對接結(jié)果以最小結(jié)合能視為最可能的作用位點(diǎn),最后用PyMol對分子對接結(jié)果進(jìn)行可視化處理。利用Autodock對活性成分-網(wǎng)絡(luò)-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)中度值最高的5中活性成分(Quercetin、Beta-sitosterol、Naringenin、Hydroxygenkwanin、Hesperetin)與6個核心作用靶點(diǎn)(PIK3CG、MAPK3、PTGS2、MAPK3、TNF、AKT1)進(jìn)行分子對接,其中活性成分為配體,作用靶點(diǎn)為受體。對接時選擇結(jié)合能最低的作為配體與受體結(jié)合最穩(wěn)定的參考依據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 瓜蔞-薤白藥對活性成分及靶點(diǎn) 篩選出符合條件的活性成分瓜蔞11種,薤白11種,共計(jì)22種活性成分,2種藥物無重復(fù)活性成分,具體活性成分名稱及參數(shù)見表1。剔除重復(fù)部分共得到201個作用靶點(diǎn),藥物-活性成分-作用靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)圖見圖1。

表1 藥物活性成分帶代謝參數(shù)

續(xù)表1 藥物活性成分帶代謝參數(shù)

圖1 “瓜蔞-薤白”活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.2 瓜蔞-薤白治療冠心病的潛在靶點(diǎn) 在GeneCards數(shù)據(jù)庫中獲得CHD相關(guān)靶點(diǎn)2 182個,其中與瓜蔞-薤白藥對作用靶點(diǎn)交集的靶點(diǎn)有116個,交集的116個是瓜蔞-薤白治療冠心病的潛在作用靶點(diǎn)。

圖2 “瓜蔞-薤白”靶點(diǎn)與冠心病靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 潛在作用靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 由116個點(diǎn)構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)中,共計(jì)3 842條邊,網(wǎng)絡(luò)中度(Degree)平均值為66.24,Closeness Centrality為0.573 6,Betweenness Centrality為0.006 825,Average Shortest Path Length為1.778,在核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中,度平均值為128.15,Closeness Centrality為0.693 07,Betweenness Centrality為0.019 22,Average Shortest Path Length為1.448 5,核心網(wǎng)絡(luò)中,以TNF、AKT1、MAPK3、IL6、TP53、VEGFA、EGFA為度值最高的靶點(diǎn)。見圖3。

圖3 “瓜蔞-薤白”與冠心病共有靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

2.4 GO富集分析及KEGG富集分析 GO富集分析CC、MF、BP和KEGG通路4者P值最低的前20位結(jié)果見圖4。CC以細(xì)胞外空間(Extracellular space)、膜小凹(Caveola)和細(xì)胞外區(qū)域(Extracellular region)為主,MF以酶結(jié)合(Enzyme binding)、類固醇激素受體活性(Steroid hormone receptor activity)和蛋白同二聚體活性(Protein homodimerization activity)為主,BP以對缺氧的反應(yīng)(Response to hypoxia)、對藥物的反應(yīng)(Response to drug)、聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控(Positive regulation of transcription from RNA polymerase Ⅱ promoter RNA)和衰老(Aging)為主,KEGG通路以缺氧誘導(dǎo)因子-1信號通路(HIF-1 signaling pathway)、腫瘤壞死因子信號通路(TNF signaling pathway)和癌癥通路(Pathways in cancer)為主。

圖4 “瓜蔞-薤白”與CHD共有活性成分GO及KEGG富集分析結(jié)果氣泡圖

在CC方面,與管徑調(diào)節(jié)(Regulation of tube diameter 8.42%)、活性氧生物合成過程(Reactive oxygen species biosynthetic process 8.42%)和調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞增殖(Regulation of smooth muscle cell proliferation 6.32%)等相關(guān);在MF方面,與氧化還原酶活性,作用于成對的供體上,并結(jié)合或還原分子氧(Oxidoreductase acticity,acting on paired donors,with incorporation or reduction of molecular oxygen 17.33%)、半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性參與凋亡過程(Cysteine-type endopeptidase activity involved in apoptotic process 14.67%)和蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的調(diào)節(jié)(Regulation of protein serine/threonine kinase activity 13.33%)相關(guān);在BP方面,與miRNA對基因沉默的負(fù)調(diào)控(Negative regulation of gene silencing by miRNA12.73%)、脂質(zhì)定位的負(fù)調(diào)控(Negative regulation of lipid localization 9.09%)和巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞分化(Macrophage derived foam cell differentiation 7.27%)等相關(guān);在KEGG信號通路方面,與糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complication 55.56%)、乙型肝炎(Hepatitis B 9.4%)和肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma 8.55%)等相關(guān)。見圖5。

圖5 “瓜蔞-薤白”與CHD共有活性成分GO及KEGG網(wǎng)絡(luò)及餅狀圖

2.5 活性成分-靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò) 網(wǎng)絡(luò)中度值最高的靶點(diǎn)是PIK3CG、MAPK1、PTGS2、MAPK3、TNF、AKT1等,度值最高的活性成分有薤白中的槲皮素Quercetin、柚皮素Naringenin、β-谷甾醇Beta-sitosterol、及瓜蔞中的羥基蕪花素Hydroxygenkwanin、香葉木素Diosmetin。見圖6。

圖6 活性成分-作用靶點(diǎn)-核心通路網(wǎng)絡(luò)

2.6 分子對接分析 結(jié)果表明5個活性成分與6個核心靶點(diǎn)結(jié)合能均<-6 kcal/mol(1 cal=4.184 J)。見表2。選取部分活性成分與作用靶點(diǎn)的最低結(jié)合能結(jié)合狀態(tài)進(jìn)行展示。見圖7。

表2 核心活性成分與核心作用靶點(diǎn)結(jié)合能(kcal/mol)

圖7 瓜蔞-薤白核心活性成分與CHD關(guān)鍵靶點(diǎn)的部分分子對接示意圖

3 討論

冠心病是最常見的心血管疾病之一,屬于中醫(yī)“胸痹、心痛”的范疇,《金匱要略》提出胸痹的基本病機(jī)是“陽微陰弦”,現(xiàn)代研究也證實(shí)“胸陽不宣”作為胸痹的基本病機(jī)貫穿疾病的整個病程之中,而瓜蔞-薤白辛溫通陽,為治療胸痹心痛常用方的核心藥組[12],臨床驗(yàn)之有效。現(xiàn)代藥理學(xué)表明:瓜蔞主要化學(xué)成分為脂肪酸、甾醇、三萜及其苷類等,具有保護(hù)心肌、改善心肌缺血[13],抗血栓形成,抗心肌纖維化,抗氧化、抗炎、抑制同型半胱氨酸誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化和免疫調(diào)節(jié)作用[14-17];薤白主要化學(xué)成分為主要化學(xué)成分包括甾體皂苷類化合物、含硫化合物、含氮化合物、脂肪酸類化合物、聚酰胺類化合物等,具有降血脂,抗動脈粥樣硬化,抑制腫瘤,消炎,抗氧化和抑菌等多種藥理作用[18-19]。但由于中藥具有多成分多靶點(diǎn)的藥理作用特點(diǎn),且瓜蔞-薤白治療冠心病的具體作用機(jī)制仍不明確,本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接技術(shù)對其進(jìn)行探討。

本研究初步篩選出22種活性成分和201個作用靶點(diǎn),其中槲皮素(Quercetin)在網(wǎng)絡(luò)中度值最高,屬于黃酮類的化合物,有研究表明槲皮素可以通過抑制基質(zhì)細(xì)胞源性因子-1與C-X-C趨化因子受體4的表達(dá)途徑抑制載脂蛋白E-/-小鼠動脈粥樣硬化形成[20]、減輕氧化應(yīng)激損傷保護(hù)同型半胱氨酸誘導(dǎo)的心細(xì)胞凋亡[21]、抑制活性氧介導(dǎo)的MAPK信號通路抗心肌纖維化,具有心血管保護(hù)作用[22]。脂代謝異常、氧化反應(yīng)和炎癥反應(yīng)貫穿冠心病的全過程。柚皮素(Naringenin)屬于類黃酮多酚,在血脂異常,胰島素抵抗,肝脂肪變性,肥胖和動脈粥樣硬化的治療中具有重要作用[23-24],也可以作為脂蛋白代謝和動脈粥樣硬化的調(diào)節(jié)劑。動物研究表明柚皮素可有效抑制代謝綜合征小鼠模型中培養(yǎng)的肝細(xì)胞中載脂蛋白B100脂蛋白的組裝和分泌,并改善血脂異常和胰島素抵抗,降低動脈粥樣硬化進(jìn)展[23]。β-谷甾醇(Beta-sitosterol)屬于萜類化合物,具有抗氧化、血管生成、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物作用[24-25]，可以通過將刺激肝臟脂肪酸氧化以減少血漿中膽固醇的含量，從而阻止膽固醇的吸收，被推薦用于預(yù)防不同心血管疾病及高脂血癥。。羥基蕪花素(Hydroxygenkwanin)屬于天然類黃酮,具有抗癌作用[26],用于治療水腫,腹水,咳嗽,哮喘和癌癥,研究發(fā)現(xiàn)羥基蕪花素與炎癥及2型糖尿病相關(guān),通過磷酸化并誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2蛋白降解,從而引起T細(xì)胞中白細(xì)胞介素-6產(chǎn)生負(fù)反饋,2型糖尿病患者的T細(xì)胞中HGK(組氨酸-甘氨酸-賴氨酸)水平下降而白細(xì)胞介素-6水平上升[27]。香葉木素(Diosmetin)的藥理作用也體現(xiàn)在抗癌、抗菌、抗氧化和抗炎等方面[28]。

在瓜蔞-薤白藥對治療CHD的PPI網(wǎng)絡(luò)中有116個節(jié)點(diǎn)和3 842條邊,網(wǎng)絡(luò)中TNF、AKT1、MAPK3、IL6和TP53等靶點(diǎn)處于重要地位,可能是瓜蔞-薤白治療CHD的潛在作用靶點(diǎn)。AKT家族是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,在調(diào)節(jié)生長、增殖、代謝等其他細(xì)胞活動中起關(guān)鍵作用,AKT1是唯一在心臟和大腦中都富集的AKT亞型,在心臟中,IGF-1/AKT軸參與控制心肌細(xì)胞大小,收縮功能和Ca2+研究發(fā)現(xiàn)AKT1可能通過上調(diào)受磷蛋白磷酸化改善心臟收縮[29-30],AKT激活還增加Thr17位點(diǎn)的PLN磷酸化,在介導(dǎo)正性肌力中起作用[31];此外,內(nèi)皮細(xì)胞中的AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在調(diào)節(jié)血管穩(wěn)態(tài)和血管生成中也發(fā)揮著重要作用[32]。GO富集分析結(jié)果顯示,瓜蔞-薤白治療CHD的生物學(xué)過程主要集中在與miRNA對基因沉默的負(fù)調(diào)控(12.73%)、脂質(zhì)定位的負(fù)調(diào)控(9.09%)和巨噬細(xì)胞衍生的泡沫細(xì)胞分化(7.27%)等相關(guān)。

KEGG通路富集結(jié)果發(fā)現(xiàn),瓜蔞-薤白可能通過調(diào)節(jié)TNF信號通路、HIF-1信號通路來改善冠心病,對KEGG進(jìn)行富集分析則顯示作用靶點(diǎn)中占比55.56%的部分與AGE-RAGE信號存在聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn),晚期糖基化終末產(chǎn)物-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體信號通路通過影響動脈硬度、動脈粥樣硬化、線粒體功能、氧化應(yīng)激、鈣穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞骨架功能來調(diào)節(jié)心血管疾病的發(fā)病機(jī)制。晚期糖基化終末產(chǎn)物-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體相關(guān)的氧化穩(wěn)態(tài)失調(diào)可能增強(qiáng)人體對氧化、炎癥組織損傷的敏感性,增加了活性氧和炎癥介質(zhì)的生成,從而引起氧化應(yīng)激,長期可能出現(xiàn)心血管和代謝改變[33]。此外晚期糖基化終末產(chǎn)物-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體軸還參與高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、心房顫動的發(fā)病,以及激活了核因子κB引發(fā)主動脈瘤等與冠心病諸多高危因素密切相關(guān)[34-36]。晚期糖基化終末產(chǎn)物與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體之間的相互作用可以增加氧自由基和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生從而參與心臟代謝疾病,瓜蔞-薤白治療冠心病可能與抗氧化和抗炎相關(guān)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證活性成分-作用靶點(diǎn)-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)結(jié)果的可靠性,我們利用分子對接驗(yàn)證了活性成分與作用靶點(diǎn)結(jié)合能,結(jié)果表明5個關(guān)鍵活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)PIK3CG、MAPK1、PTGS2、MAPK3、TNF和AKT1之間結(jié)合能均小于-6 kcal/mol,表明他們之間具有較好的結(jié)合活性。其中β-谷甾醇與PIK3CG,槲皮素、β-谷甾醇、柚皮素、羥基蕪花素與PTGS2結(jié)合能均低于-9 kcal/mol,表明這部分活性成分與其對應(yīng)靶點(diǎn)具有強(qiáng)的結(jié)合活性。

本研究以《金匱要略》治療胸痹的經(jīng)典名方中共有藥味“瓜蔞-薤白”為研究對象,通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接的方法,發(fā)現(xiàn)瓜蔞-薤白可以影響心血管活性氧代謝過程、炎癥反應(yīng)等過程,其作用機(jī)制可能與AGE/RAGE、HIF-1、TNF信號通路等通路有關(guān),且發(fā)現(xiàn)槲皮素、β-谷甾醇、香葉木素、柚皮素、羥基蕪花素活性成分作用于PIK3CG、MAPK1、PTGS2、MAPK3、TNF和AKT1等關(guān)鍵靶點(diǎn)。體現(xiàn)了中醫(yī)的多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn),為后續(xù)深入研究“瓜蔞-薤白”治療CHD奠定了基礎(chǔ)。