陳 萍,譚書明
(1.黔南州檢驗(yàn)檢測(cè)院,貴州黔南 558000;2.貴州大學(xué) 釀酒與食品工程學(xué)院,貴州貴陽(yáng) 550025)
近年來(lái)高血脂人群越來(lái)越趨于年輕化,2020年發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示中國(guó)居民超重肥胖的形勢(shì)嚴(yán)峻,成年居民超重率和肥胖率分別為34.3%和16.4%;6~ 17歲兒童青少年超重率和肥胖率分別為11.1%和7.9%;6歲以下兒童超重率和肥胖率分別為6.8%和3.6%[1]。中國(guó)18歲及以上居民男性和女性的平均體重分別為69.6 kg和59 kg,與2015年發(fā)布結(jié)果相比分別增加3.4 kg和1.7 kg。城鄉(xiāng)各年齡組居民超重肥胖率繼續(xù)上升。超重肥胖也是心腦血管疾病、糖尿病和多種癌癥等慢性病的重要危險(xiǎn)因素,會(huì)加大高血壓、糖尿病、高膽固醇血癥的患病率。而高血脂正是高血壓、高膽固醇血癥、心腦血管疾病的重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一,加大天然、無(wú)毒害降血脂食品的研究力度是非常迫切的[2]。
蜂膠是一種棕褐色或帶有青綠色的固體膠狀物質(zhì),味微苦,溫度低于15 ℃時(shí)質(zhì)地易粉碎,也是一種藥食同源的材料,其含有的多種活性成分可有效緩解高血脂癥狀。蜂膠中的總黃酮類物質(zhì)可有效改善脂質(zhì)代謝紊亂,具有極好的降血脂功效[3],蜂膠水溶液可有效緩解高血脂癥狀[4-5],能有效抑制腸道對(duì)膽固醇的吸收、促進(jìn)膽固醇降解和排泄,最終起到降血脂作用。李心怡等[6]研究發(fā)現(xiàn)蜂膠降脂方能降低高脂血癥模型斑馬魚的血脂水平,以降低TG為主。黃曉其等[7]研究發(fā)現(xiàn)蜂膠的顯著降血脂作用,其作用機(jī)制與改善肝臟脂質(zhì)代謝紊亂、調(diào)控脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)。
蜂膠:購(gòu)于貴州合力超市;辛伐他汀片:貴州天安藥業(yè)股份有限公司;膽固醇:河南青羊生物科技有限公司;膽酸鹽:河北格貝達(dá)生物科技有限公司;蛋黃粉:亳州市紅日蛋制品有限責(zé)任公司;總膽固醇(Total Cholesterol,TC)測(cè)定試劑盒、甘油三酯(Triglyceride,TG)測(cè)定試劑盒、高密度脂蛋白膽固 醇(High-density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)測(cè)定試劑盒:南京建成科技有限公司;小鼠飼料:騰鑫科技有限公司。
Haier立式超低溫保存箱:青島海爾特種電器有限公司;電子分析天平 FA22048 型,奧豪斯儀器(上海)有限公司;循環(huán)水式多用真空泵 SHB-Ⅲ型,鄭州世紀(jì)雙科實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;光吸收酶標(biāo)儀Spectra Max 190:美谷分子儀器(上海)有限 公司。
1.3.1 高脂飼料的配方
78.8%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%豬油、10%蛋黃粉及0.2%膽酸鹽[8]。
1.3.2 高脂血癥模型建立
SPF級(jí)的KM小鼠40只,3周齡,體重18~22 g,雌雄各半,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,按體重隨機(jī)分組,每組10只。空白組普通飼料喂養(yǎng),模型組用高脂飼料喂養(yǎng)造模,均飲自來(lái)水,不限飲食,正常光照,每周稱重一次,飼養(yǎng)30 d,造模成功。
1.3.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥
將造模成功的小鼠隨機(jī)分為3組,分別為高脂模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、蜂膠組,分別每組平行10只。每組每日灌胃具體情況如表1所示,每日灌胃劑量按人60 mL/60 kg bw進(jìn)行計(jì)算,則小鼠灌胃劑量為0.12 mL/10 g bw[9]。
表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組灌胃表
1.3.4 小鼠體重和采食量測(cè)定
造模成功的小鼠重新分組后,紀(jì)錄各組小鼠每天的采食量,每周測(cè)一次各組小鼠的體重,計(jì)算每周各組小鼠的飼料效率。
1.3.5 血清及肝臟總膽固醇(TC)、總甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)的測(cè)定
總膽固醇(TC)、總甘油三酯(TG)是衡量機(jī)體內(nèi)膽固醇代謝的重要指標(biāo)。高密度脂蛋白(HDL-C)是將肝臟外組織的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟的主要形式。小鼠灌胃第28 d禁食不禁水,12 h后摘眼球取血,靜置2 h后于4 ℃,3000 r/min離心10 min取上清液存放在-20 ℃待分析;脫頸處死后剖取小鼠肝臟清洗稱重,后取相同部位肝臟制備10%肝臟勻漿[10]。使用TC、TG、HDL-C測(cè)定試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
在高脂小鼠飼養(yǎng)過(guò)程中,小鼠無(wú)異常死亡情況。第1周開始喂養(yǎng)高脂飼料后,空白組的小鼠體重就遠(yuǎn)低于喂養(yǎng)高脂飼料的小鼠,4周后小鼠高血脂癥造模成功,高脂模型組的體重較空白組增長(zhǎng)了28.4%,顯著高于空白組,如圖1所示。
圖1 小鼠建模4周模型組與空白組對(duì)比圖
由表2可知,高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠與空白對(duì)照組小鼠相比,其體重增加量及小鼠采食量顯著提高。經(jīng)過(guò)4周的飼養(yǎng)后,各給藥組的小鼠采食量較高脂模型組小鼠均有不同程度的降低,說(shuō)明不同的刺梨口服液對(duì)小鼠的食欲有一定的影響,可在一定程度上緩解高血脂癥狀況。
表2 蜂膠提取液對(duì)體重增加量、小鼠采食量、飼料效率的影響 (單位:g)
由表3可知,高脂模型組的TC水平與空白組無(wú)顯著性差異(P>0.05),但與陽(yáng)性對(duì)照組、蜂膠提取液組存在顯著性差異(P<0.05),其TC水平較高脂模型組分別下降了43.04%、36.7%;高脂模型組與空白組的TG水平存在顯著性差異(P<0.05),蜂膠提取液組、陽(yáng)性對(duì)照組與高脂模型組相比均有不同程度的降低,刺梨蜂膠組較高脂模型組降低了37.34%(P<0.05);高脂模型組的HDL-C水平與空白組無(wú)顯著性差異(P>0.05),各給藥組之間的HDL-C水平差異不顯著(P>0.05)。
表3 蜂膠提取液對(duì)小鼠血清TC、TG、HDL-C的影響(單位:mmol/L)
由表4可知,蜂膠提取液組的TC水平與高脂模型組差異不顯著(P>0.05),蜂膠提取液組的肝臟TG、HDL-C水平與高脂模型組差異不顯著(P>0.05),說(shuō)明蜂膠提取液對(duì)高血脂癥小鼠肝臟的TC、TG、HDL-C水平影響不明顯。
表4 蜂膠提取液對(duì)小鼠肝臟TC、TG、HDL-C的影響(單位:mmol/L)
通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)蜂膠提取液的輔助降血脂功效進(jìn)行評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn),蜂膠提取液可降低小鼠血清中的TC、TG,能夠達(dá)到輔助降血脂的目的,但是對(duì)降低小鼠血清中的HDL-C,小鼠肝臟中的TC、TG、HDL-C效果不顯著。該研究為后續(xù)研究脂代謝通路及研發(fā)降血脂食品奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。