嬰幼兒化妝品中游離甲醛的檢測(cè)方法適用性研究

＊徐勤科 李莉 劉婷媛 魏學(xué)冰 郭朝暉 孫鶯

（甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院 甘肅 730000）

引言

甲醛是一種由氫、氧和碳元素構(gòu)成的有機(jī)化合物。甲醛在我們呼吸的空氣中自然存在，甚至是我們?nèi)梭w代謝的一部分。動(dòng)植物也會(huì)產(chǎn)生甲醛。某些蔬菜在烹調(diào)過(guò)程中會(huì)以副產(chǎn)品的形式釋放甲醛。因此，甲醛并非我們想象中那么可怕，因?yàn)槲覀兊纳眢w每天都在不停的代謝微量的甲醛。但是甲醛濃度過(guò)大時(shí)候的潛在危害也非常嚴(yán)重的，特別是新房剛裝修的人們，談醛色變一直是普遍的現(xiàn)狀[1]。甲醛的主要危害表現(xiàn)為對(duì)皮膚粘膜的刺激作用。甲醛在室內(nèi)達(dá)到一定濃度時(shí)，人就有不適感。大于0.08mg/m3的甲醛質(zhì)量濃度可引起眼紅、眼癢、咽喉不適或疼痛、聲音嘶啞、噴嚏、胸悶、氣喘、皮炎等。新裝修的房間甲醛含量較高，是眾多疾病的主要原因。但是，甲醛除了是造成室內(nèi)空氣污染的元兇之外，還被廣泛應(yīng)用于各個(gè)行業(yè)，例如，化妝品[2-4]。

而對(duì)于女性最關(guān)注的化妝品中是否含有甲醛這一問題，其實(shí)化妝品中檢測(cè)到的甲醛是部分防腐劑和原料帶進(jìn)來(lái)的，并不是人為添加的，而是在生產(chǎn)過(guò)程中，為保證產(chǎn)品的溫和質(zhì)地，并避免細(xì)菌繁殖而采用的生產(chǎn)過(guò)程的副產(chǎn)物?；瘖y品產(chǎn)品成份是否對(duì)人體有害，關(guān)鍵取決于量，而對(duì)于護(hù)理品，甲醛的質(zhì)量分?jǐn)?shù)不超過(guò)0.05%是安全的。美國(guó)食品藥品管理局（FDA）2010調(diào)查結(jié)果顯示，化妝品中使用甲醛的比例高達(dá)25%。其主要通過(guò)在化妝品體系中緩慢釋放少量的游離甲醛起到殺滅微生物的作用。因此，中國(guó)對(duì)化妝品等其他產(chǎn)品中甲醛的最大使用含量有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。甲醛和多聚甲醛在化妝品中的最大允許使用含量為0.2%（以游離甲醛計(jì)），并規(guī)定禁用于噴霧化妝品[5-8]。

目前國(guó)家對(duì)釋放甲醛類防腐劑沒有禁用，只是對(duì)防腐劑有個(gè)限量的規(guī)定。衛(wèi)生部在2015年發(fā)布的《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（以下簡(jiǎn)稱“規(guī)范”），化妝品中禁止使用二噁烷，而甲醛則屬于被限制使用的成分[5]?；瘖y品中被允許的最大使用量有0.2%，除此之外，像一些指甲硬化劑中甲醛的最大允許使用濃度為5%。而嬰幼兒專用的產(chǎn)品中則并沒有作特殊的規(guī)定[9-11]。所以嬰幼兒化妝品中甲醛的檢測(cè)方法研究勢(shì)在必行。

1.材料和方法

(1)試劑與儀器

Waters 2695高效液相色譜儀、Waters柱后衍生儀；C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm，資生堂ADME）；Milli-Q IQ 7000超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）；渦旋振蕩器（艾卡公司）；電子天平（瑞士梅特勒公司）。

甲醛標(biāo)準(zhǔn)水溶液（SIGMA-ALORICH、CAS：50-00-0、d=1.09g/mL）。

乙酸銨（色譜純）、冰乙酸（分析純）、乙酰丙酮（分析純）、二氯甲烷（分析純）、磷酸（分析純）、微孔濾膜（0.45μm，水相型）；實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)水。

(2)方法

①標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制

精密量取甲醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)水溶液適量，用0.2%磷酸水溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）稀釋成1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。臨用現(xiàn)制。

②供試品溶液制備

稱取樣品0.2g（精確到0.001g）于10mL具塞比色管中，加0.2%磷酸水溶液至10mL刻度，渦旋處理1min，5000rpm離心5min，取上清液過(guò)0.45μm微孔濾膜（水相）過(guò)濾。濾液作為待測(cè)溶液，并盡快測(cè)定。

③色譜條件

色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm×5μm）；柱溫：25℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量10μL。流動(dòng)相為0.2%磷酸溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)：420nm。柱后衍生溶液（稱取62.5g乙酸銨，置于流動(dòng)相存儲(chǔ)瓶中，加入5mL乙酰丙酮、7.5mL乙酸，用水定容至1000mL，超聲溶解混勻即可），柱后衍生溶液流速：0.5mL/min；衍生溫度：100℃。

④樣品測(cè)定

調(diào)節(jié)儀器，平衡大約30min至最佳工作狀態(tài)，設(shè)定方法時(shí)間10min，依次由低到高進(jìn)樣已配制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，以其峰面積對(duì)進(jìn)樣濃度進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，然后進(jìn)6針空白溶液清洗管路，消除管道殘留，再依次進(jìn)樣。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(1)特異性的檢查

分別選取已配制好的標(biāo)準(zhǔn)品甲醛水溶液高、中、低濃度進(jìn)樣，記錄對(duì)照品峰的出峰時(shí)間在3.771～3.784min。表明該方法出峰時(shí)間較穩(wěn)定，特異性良好，見圖1。

圖1 甲醛不同濃度色譜圖

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

建立儀器方法，平衡儀器至基線平穩(wěn)，精密吸取已配制好的甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各10μL，濃度由低到高分別進(jìn)樣檢測(cè)，以甲醛系列濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo),繪制甲醛標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為Y=89669X-32011，相關(guān)系數(shù)為0.9997，見圖2。

圖2 甲醛溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

(3)方法檢出限

取標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液最低濃度點(diǎn)0.4mL（濃度為1.0 μg/mL）至含有0.2g樣品的比色管中，按供試品溶液制備方法制備，然后稀釋25倍進(jìn)樣，查看信噪比，計(jì)算檢出濃度。測(cè)得信噪比為3.2，利用檢出限計(jì)算方法得出方法檢出限結(jié)果為0.0003%，低于標(biāo)準(zhǔn)檢出限，所以符合規(guī)范要求。

(4)加標(biāo)回收率

為驗(yàn)證該方法的準(zhǔn)確性和可靠性，進(jìn)行了樣品加標(biāo)測(cè)定。加標(biāo)分為高、低兩種濃度添加，在稱取的樣品中添加高低兩種濃度的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，依次注入色譜儀，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次并記錄被測(cè)物質(zhì)的峰面積，計(jì)算其回收率。得到回收率在96.1%～99.6%之間，回收率符合規(guī)范中通用要求的80.0%～120.0%。該實(shí)驗(yàn)表明本實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確可靠。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 方法加標(biāo)回收率

(5)方法重現(xiàn)性

為驗(yàn)證此方法的準(zhǔn)確性，對(duì)甲醛標(biāo)準(zhǔn)曲線第二濃度點(diǎn)（濃度為2.0μg/mL）連續(xù)測(cè)定7次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.5%，符合規(guī)范要求。表明本實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確性較好。結(jié)果見表2。

表2 方法重現(xiàn)性

(6)精密度

精密度分為日內(nèi)精密度和日間精密度，分別取標(biāo)準(zhǔn)曲線第二濃度點(diǎn)和第五濃度點(diǎn)在0h、24h、48h連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄被測(cè)物質(zhì)峰面積，計(jì)算其RSD值。得到日內(nèi)精密度和日間精密度均小于0.5%，而平均精密度小于5%。表明該方法準(zhǔn)確、可靠，符合規(guī)范要求，見表3。

表3 精密度

(7)穩(wěn)定性

取標(biāo)準(zhǔn)曲線第二濃度點(diǎn)分別在0h、3h、6h、8h、12h、18h、24h、48h分別進(jìn)樣，考察甲醛組分峰面積穩(wěn)定性，計(jì)算得到甲醛峰面積RSD為1.1%。表明該方法在檢測(cè)嬰幼兒類化妝品的甲醛的含量時(shí)，在48h內(nèi)檢測(cè)都是穩(wěn)定的，符合規(guī)范要求，見表4。

表4 穩(wěn)定性

3.討論

本研究建立了柱后衍生—高效液相色譜法測(cè)定嬰幼兒化妝品中游離甲醛的測(cè)定方法，依次開展了該方法特異性實(shí)驗(yàn)、線性實(shí)驗(yàn)、檢出限實(shí)驗(yàn)、樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)、重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)、日間精密度實(shí)驗(yàn)、日內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，從而確定該方法對(duì)檢驗(yàn)嬰幼兒化妝品中游離甲醛含量的適用性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出該方法特異性良好、線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.995，檢出限低至0.0003%，回收率大于96.1%，重現(xiàn)性連續(xù)7次進(jìn)樣RSD為0.5%，日內(nèi)精密度和日間精密度RSD均小于0.5%，供試品溶液在48h內(nèi)測(cè)定其RSD為1.1%，相對(duì)穩(wěn)定，符合規(guī)范方法建立的各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)。所以該方法對(duì)嬰幼兒類化妝品中游離甲醛的測(cè)定適用性極高。本研究可以對(duì)嬰幼兒類化妝品中甲醛的含量進(jìn)行控制，對(duì)市場(chǎng)上嬰幼兒類化妝品質(zhì)量保障具有十分重要的意義，可為嬰幼兒類化妝品的用妝安全提供技術(shù)支撐。