支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢及培養(yǎng)結(jié)果分析

張碧志，余澤明，曾躍芬，郭艷瓊，李紅賓

（1.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科，云南 昆明 650031；2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸科，云南 昆明 650031）

肺部真菌感染是指真菌侵入肺臟，所致肺臟組織的感染，起病隱匿、無(wú)特異性臨床表現(xiàn)及體征，漏診率高，預(yù)后差，死亡率高。目前臨床上對(duì)于肺部真菌感染診斷主要通過(guò)臨床表現(xiàn)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查，如痰涂片真菌鏡檢［1］、G 試驗(yàn)［2］、GM 試驗(yàn)［3］及胸部CT 檢查綜合考慮，仍然難以能及時(shí)、準(zhǔn)確診斷肺部真菌感染，故臨床上肺部真菌感染多為經(jīng)驗(yàn)性診斷［4-5］。故如何改良、完善現(xiàn)有的肺深部真菌感染的診斷手段和開(kāi)發(fā)新方法，提高肺部真菌感染的檢出率，仍是臨床工作者面臨的挑戰(zhàn)［6］。支氣管纖維鏡是一種可以從呼吸道和肺泡中獲得肺泡上皮內(nèi)液體的檢查方法，該項(xiàng)檢查目前主要應(yīng)用于診斷肺部感染，尤其是免疫受損宿主中由機(jī)會(huì)性微生物引起的肺部感染［7］。目前支氣管肺泡灌洗液直接進(jìn)行真菌鏡檢與培養(yǎng)鮮有報(bào)道，故我們使用該方法并結(jié)合患者影像學(xué)診斷做了分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2020 年10 月至2021 年7 月支氣管肺泡灌洗室行經(jīng)支氣管鏡肺泡灌洗患者。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ① 行經(jīng)支氣管肺泡灌洗液檢查明確診斷患者；② 患者及其家屬知情、同意本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 嚴(yán)重心腦血管疾病患者；② 肝腎嚴(yán)重病變患者；③ 拒絕本研究檢查患者。

1.3 研究方法 對(duì)256 例患者的支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行真菌鏡檢及培養(yǎng)，分析患者臨床資料及檢查結(jié)果。

1.4 真菌鏡檢、培養(yǎng)及鑒定 支氣管肺泡灌洗液2ml置于凍存管中靜置2h，沉淀，棄上清液，使用無(wú)菌吸液器吸取1ml 液體至沙保氏培養(yǎng)基，置于35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，14d 無(wú)真菌生長(zhǎng)判定為真菌培養(yǎng)陰性。管底吸取10ul 支氣管肺泡灌洗液于載玻片上，加入真菌熒光染液進(jìn)行真菌直接鏡檢。酵母菌用科馬嘉顯色進(jìn)行鑒定，絲狀真菌依據(jù)顯微鏡下形態(tài)學(xué)和生化特征鑒定［8］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用（n，%）表示。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 2020 年10 月至2021 年7 月昆明醫(yī)科大學(xué)支氣管灌洗室行經(jīng)支氣管肺泡灌洗256 例患者，培養(yǎng)陽(yáng)性20 例（7.81%），其中男性患者13 例（65%），女性7 例（35%），最小年齡18 歲，最大年齡73 歲，平均年齡（72.21±22.42）歲。

2.2 真菌鑒定結(jié)果 18 例培養(yǎng)出酵母菌，鑒定出白色念珠菌6 例（33.33%，6/18），光滑念珠菌2 例（11.11%，2/18），克柔1 例（0.55%，1/18），其他念珠菌1 例（0.55%，1/18），2 種及以上念珠菌并存8 例，白色念珠菌與其他種類念珠菌共存7 例（38.89%，7/18），其次克柔與其他念珠菌共存1 例（0.55%，7/18）。絲狀真菌2 例，均為黑曲霉，詳見(jiàn)表1。

表1 支氣管肺泡灌洗液培養(yǎng)深部真菌病原菌

2.3 真菌檢查結(jié)果與影像學(xué)診斷相關(guān)分析 通過(guò)統(tǒng)計(jì)患者影像學(xué)診斷及其支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢及培養(yǎng)進(jìn)行分析，真菌鏡檢結(jié)果找到菌絲19 例（7.42%，10/256），肺部陰影5 例，肺部結(jié)節(jié)8 例，肺占位病變4 例，咯血1 例，空洞病變1 例。大量孢子4 例（1.56%，4/256），肺部陰影2 例，肺部結(jié)節(jié)1 例，肺占位病變1 例。少量孢子16 例（6.25%，16/256），肺部陰影8 例，肺部結(jié)節(jié)3 例，咯血1例，肺不張1 例，胸腔積液2 例，肺部腫瘤1 例。肺部陰影患者真菌鏡檢和培養(yǎng)陽(yáng)性最高（38.46%），其次是肺部結(jié)節(jié)和肺占位性病變，分別是30.77%、12.82%，詳見(jiàn)表2。

表2 支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢與影像學(xué)診斷分析

3 討論

肺部真菌感染是指真菌侵入肺臟所致感染，由于無(wú)特殊癥狀和體征，診斷相對(duì)困難，肺部穿刺活檢找到真菌是診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但該項(xiàng)檢查對(duì)患者具有一定創(chuàng)傷，因此不常用。支氣管纖維鏡檢是近年呼吸系統(tǒng)疾病診斷應(yīng)用較普遍的檢查方法，相較于肺穿刺活檢術(shù)創(chuàng)傷性小。本次實(shí)驗(yàn)共收集256 例患者的支氣管肺泡灌洗液，真菌鏡檢找到菌絲19 例（7.42%，19/256），大量孢子4 例（1.56%，4/256）、少量孢子16 例（6.25%，16/256）；真菌培養(yǎng)陽(yáng)性20 例，其中酵母菌18 例，鑒定白念珠菌為6 例（33.33%，6/18），光滑念珠菌為2 例（11.11%，2/18），克柔念珠菌1 例（0.55%，1/18），其他念珠菌1 例（0.55%，1/18），2 種及以上念珠菌并存8 例（白念珠菌與其他種類念珠菌共存7 例（38.89%，7/18），其次克柔念珠菌與其他念珠菌共存1 例），另有絲狀真菌2例，均為黑曲霉。真菌檢查結(jié)果與臨床診斷相關(guān)分析結(jié)果顯示，肺部陰影患者真菌鏡檢和培養(yǎng)陽(yáng)性最高，占38.46%，其次是肺部結(jié)節(jié)和肺部占位性病變，分別占30.77%、12.82%。支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢與培養(yǎng)陽(yáng)性率不高，主要見(jiàn)于肺部陰影及肺部結(jié)節(jié)患者。有文獻(xiàn)指出，支氣管肺泡灌洗液在某種情況認(rèn)為是液體式的肺部活檢［9］，本研究中，對(duì)支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行直接真菌鏡檢及培養(yǎng)陽(yáng)性率低下，其可能因素首先考慮人群中肺部真菌感染發(fā)生率并不高，其次本研究標(biāo)本僅為全部支氣管肺泡灌洗液中的極少部分，極大降低真菌鏡檢及培養(yǎng)的陽(yáng)性率，另外，該項(xiàng)檢查并非診斷肺部真菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，綜上原因可能導(dǎo)致本研究結(jié)果的陽(yáng)性率低下。本研究結(jié)果表明，支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢與培養(yǎng)陽(yáng)性率較低，對(duì)于侵襲性肺部真菌感染的敏感性和特異性相較于其他臨床實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)特殊優(yōu)勢(shì)。