• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      高效液相色譜-一測多評法同時測定金佛止痛丸中8 種成分含量*

      2022-08-09 04:50:54李俊霞劉松游秋霞
      中國藥業(yè) 2022年15期
      關(guān)鍵詞:紫堇乙素延胡索

      李俊霞,劉松,游秋霞

      (遂成藥業(yè)股份有限公司,河南 鄭州 451100)

      金佛止痛丸由醋延胡索、白芍、郁金、姜黃、三七、佛手、甘草7 味中藥材加工而成,主要用于治療氣血瘀滯所致胃脘疼痛和痛經(jīng),以及消化性潰瘍、慢性胃炎引起的疼痛[1]。中藥制劑通常由多味中藥材按中醫(yī)理論君、臣、佐、使配伍而成,所含成分復(fù)雜,同時生產(chǎn)制劑所用中藥材因產(chǎn)地、采收季節(jié)等的不同而導(dǎo)致質(zhì)量差異較大,其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]和文獻(xiàn)[2 -5]僅對其所含芍藥苷、延胡索乙素等成分進(jìn)行了定量研究,難以全面反映金佛止痛丸的整體質(zhì)量,多指標(biāo)成分質(zhì)量控制模式已廣泛應(yīng)用于中藥及中藥制劑,尤其是中成藥復(fù)方制劑。一測多評(QAMS)法[6-7]實(shí)現(xiàn)了對多個成分的同時測定,解決了個別對照品分離難度大、單體不穩(wěn)定、難以供應(yīng)或價格昂貴等弊端,得到了廣泛認(rèn)可。本研究中采用高效液相色譜-一測多評(HPLC -QAMS)法,以去甲氧基姜黃素為內(nèi)參物,對金佛止痛丸君藥醋延胡索主要藥效成分延胡索乙素、去氫紫堇堿和紫堇堿,臣藥白芍代表性成分氧化芍藥苷和芍藥苷,以及佐藥郁金、姜黃共有活性成分雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素的含量進(jìn)行同時測定,為全面評價金佛止痛丸的整體質(zhì)量提供參考?,F(xiàn)報道如下。

      1 儀器與試藥

      1.1 儀器

      UltiMate 3000 型高效液相色譜儀(美國Thermo Fisher Scientific 公司);Agilent 1260 型高效液相色譜儀(美國Agilent 公司);色譜柱為Ultimate AQ-C18柱(月旭科技上海股份有限公司);Kromasil C18柱(瑞典Kromasil公司);Symmetry C18柱(美國Waters公司);BP211D型電子天平(德國Sartorius 公司,精密為0.01 mg)。

      1.2 試藥

      芍藥苷對照品(批號110736 -201943,CAS 號23180 -57 -6,含量95.1%),雙去甲氧基姜黃素對照品(批號112004 -201501,CAS 號33171 -05 -0,含量95.0%),去甲氧基姜黃素對照品(批號112003 -201501,CAS 號22608-11-3,含量98.5%),姜黃素對照品(批號110823 -201706,CAS 號458 -37 -7,含量98.7%),延胡索乙素對照品(批號110726 -201819,CAS 號2934-97-6,含量99.8%),均購于中國食品藥品檢定研究院;氧化芍藥苷對照品(批號18031641,CAS號39011 -91 -1,含量98.8%),紫堇堿對照品(批號17110821,CAS 號518-69-4,含量99.6%),均購于上海同田生物技術(shù)有限公司;去氫紫堇堿對照品(成都普瑞法科技開發(fā)有限公司,批號PRF8062141,CAS 號30045-16-0,含量97.8%);乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純;金佛止痛丸(廣州白云山中一藥業(yè)有限公司,批號分別為R01008,R01006,R01005,規(guī)格為每袋5 g)。

      2 方法與結(jié)果

      2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

      色譜柱:Ultimate AQ -C18柱(250 mm × 4.6 mm,5μm);流動相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗 脫(0~12.0 min 時16.0%A,12.0~23.0 min 時16.0%A →38.0%A,23.0~41.0 min 時38.0%A →55.0%A,41.0~60.0 min 時55.0%A → 78.0%A,60.0~70.0min時78.0%A→16.0%A);流速:1.0mL/min;檢測波長:230 nm(0~23.0 min時檢測氧化芍藥苷和芍藥苷)[8-10],420 nm(23.0~41.0 min 時檢測雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素)[11-15],280 nm(41.0~70.0 min 時檢測延胡索乙素、去氫紫堇堿和紫堇堿)[16-18];柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10μL。

      混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液在此色譜條件下的色譜圖見圖1。可見,金佛止痛丸中待測8 種成分色譜峰均可達(dá)到有效分離,分離度均大于1.5,理論板數(shù)均大于4 500,且陰性對照品溶液對金佛止痛丸中8種化學(xué)成分的同時測定無干擾。

      2.2 溶液制備

      混合對照品貯備液:分別取8 種對照品各適量,精密稱定,用稀乙醇制成質(zhì)量濃度分別為0.526,5.172,0.398,0.316,1.132,0.274,0.192,0.118 mg/mL 的混合對照品貯備液。

      混合對照品溶液:精密量取混合對照品貯備液2.5 mL,用稀乙醇制成含氧化芍藥苷26.3 μg/ mL、芍藥苷258.6 μg/ mL、雙去甲氧基姜黃素19.9 μg/ mL、去甲氧基姜黃素15.8μg/mL、姜黃素56.6μg/mL、延胡索乙素13.7 μg/ mL、去氫紫堇堿9.6 μg/ mL、紫堇堿5.9μg/mL的混合對照品溶液。

      供試品溶液:取金佛止痛丸樣品,研細(xì),取1.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入稀乙醇25 mL,稱定質(zhì)量,加熱回流提取45 min,放冷,用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,即得供試品溶液。

      陰性對照品溶液:按2020 年版《中國藥典(一部)》中金佛止痛丸的工藝處方分別制備不含醋延胡索、不含白芍、不含郁金和姜黃的3 種陰性樣品,按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

      2.3 方法學(xué)考察

      線性關(guān)系考察:分別精密量取2.2項(xiàng)下混合對照品貯備液0.1,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mL,各置20 mL容量瓶中,用稀乙醇定容,搖勻,制成標(biāo)記為Ⅰ~Ⅵ的系列混合對照品溶液,按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,以8 種待測成分的質(zhì)量濃度(X,μg/ mL)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

      精密度試驗(yàn):取2.2 項(xiàng)下供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣測定6次,記錄色譜圖,并計算峰面積。結(jié)果見表1,表明儀器精密度良好。

      重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號為R01008)樣品6份,按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液,依法進(jìn)樣測定,記錄色譜圖及峰面積,按外標(biāo)法計算含量及RSD值。結(jié)果見表1,表明方法重復(fù)性良好。

      穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一批(批號為R01008)樣品,按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別于0,3,6,12,18,24 h時進(jìn)樣測定,記錄色譜圖,并計算峰面積的RSD值。結(jié)果見表1,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

      加樣回收試驗(yàn):取已知8種化學(xué)成分含量的樣品9份,每份0.5 g,精密稱定,分別精密加入混合對照品溶液(分別含氧化芍藥苷0.372 mg/mL、芍藥苷3.796 mg/mL、雙去甲氧基姜黃素0.308 mg/ mL、去甲氧基姜黃素0.226 mg/ mL、姜黃素0.674 mg/ mL、延胡索乙素0.188 mg/ mL、去氫紫堇堿0.152 mg/ mL、紫堇堿0.094 mg/mL)0.5,1.0,1.5 mL,各3份,按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積,并計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

      表1 金佛止痛丸中8種成分含量測定方法學(xué)考察結(jié)果Tab.1 Results of content determination methodology of eight components in Jinfo Zhitong Pills

      2.4 相對校正因子(RCF)測定

      取線性關(guān)系考察項(xiàng)下系列混合對照品溶液Ⅰ~Ⅵ進(jìn)樣測定,記錄色譜圖及峰面積,以去甲氧基姜黃素為內(nèi)參物,按如下公式計算RCF。

      式1)中,Ak為內(nèi)參物峰面積,Ws為其他成分質(zhì)量濃度,As為其他成分峰面積,Wk為內(nèi)參物質(zhì)量濃度。計算得其他7種成分的RCF,結(jié)果見表2。

      表2 以去甲氧基姜黃素為內(nèi)參物的7種成分的相對校正因子Tab.2 RCFs of seven components with demethoxycurcumin as the reference substance

      2.5 RCF 耐用性考察

      色譜儀和色譜柱:精密吸取2.2項(xiàng)下混合對照品溶液適量,依法進(jìn)樣測定,記錄8 種成分的峰面積,考察UltiMate 3000 型、Agilent 1260 型高效液相色譜儀和Ultimate AQ -C18柱、Kromasil C18柱、Waters Symmetry C18柱對RCF的影響。結(jié)果在此色譜儀和色譜柱條件下,氧化芍藥苷、芍藥苷、雙去甲氧基姜黃素、姜黃素、延胡索乙素、去氫紫堇堿、紫堇堿的平均RCF分別為0.853 3,1.185 7,0.761 7,0.622 9,1.172 8,1.093 3,1.811 7,RSD分別為1.12%,1.21%,0.81%,1.44%,1.71%,1.32%,1.46%(n=6)。

      柱溫:精密吸取2.2 項(xiàng)下混合對照品溶液適量,依法進(jìn)樣測定,記錄8 種成分的峰面積,考察不同柱溫(25,28,30,32,35 ℃)對RCF 的影響。結(jié)果在此柱溫條件下,氧化芍藥苷、芍藥苷、雙去甲氧基姜黃素、姜黃素、延胡索乙素、去氫紫堇堿、紫堇堿的平均RCF 分別為0.852 7,1.183 8,0.760 3,0.616 2,1.169 0,1.095 8,1.808 7,RSD分別為1.46%,1.19%,0.99%,1.20%,1.81%,1.37%,1.89%(n=5)。

      流速:精密吸取2.2 項(xiàng)下混合對照品溶液適量,依法進(jìn)樣測定,記錄8 種成分的峰面積,考察不同流速(0.8,0.9,1.0,1.1,1.2 mL/ min)對RCF 的影響。結(jié)果在此流速下,氧化芍藥苷、芍藥苷、雙去甲氧基姜黃素、姜黃素、延胡索乙素、去氫紫堇堿、紫堇堿的平均RCF分 別0.852 3,1.184 7,0.758 4,0.617 2,1.175 1,1.094 2,1.805 3,RSD分別為1.20%,0.93%,1.23%,1.55%,1.64%,1.19%,1.34%(n=5)。

      2.6 待測組分色譜峰的定位

      以內(nèi)參物去甲氧基姜黃素色譜峰為基準(zhǔn)峰,考察在UltiMate 3000 型、Agilent 1260 型高效液相色譜儀和Ultimate AQ -C18柱、Kromasil C18柱、Waters Symmetry C18柱條件下,氧化芍藥苷、芍藥苷、雙去甲氧基姜黃素、姜黃素、延胡索乙素、去氫紫堇堿、紫堇堿色譜峰與去甲氧基姜黃素色譜峰的相對保留時間,并采用相對保留時間值法對色譜峰進(jìn)行定位。結(jié)果見表3。

      表3 不同色譜儀和不同色譜柱對相對保留時間的影響Tab.3 Effects of different chromatographs and chromatographic columns on the relative retention time

      2.7 QAMS 法與外標(biāo)(ESM)法測定結(jié)果比較

      取3 批(批號分別為R01008,R01006,R01005)樣品,按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液,依法進(jìn)樣測定,記錄氧化芍藥苷、芍藥苷、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素、延胡索乙素、去氫紫堇堿、紫堇堿的峰面積,分別以ESM 法和QAMS 法計算各成分含量,采用SPSS 26.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對2 種方法所得結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果見表4。

      表4 金佛止痛丸中8種成分一測多評法和外標(biāo)法含量測定結(jié)果比較(n=3)Tab.4 Comparison of the content determination of eight compo?nents in Jinfo Zhitong Pills by the QAMS and the ESM(n=3)

      3 討論

      3.1 定量測定化學(xué)成分及內(nèi)參物的選擇

      金佛止痛丸由醋延胡索、白芍、郁金、姜黃、三七、佛手、甘草7 味中藥材制成。方中,醋延胡索行氣止痛,為君藥;白芍柔肝和胃、養(yǎng)血調(diào)經(jīng),三七祛瘀生新,共為臣藥;佛手疏肝理氣、和胃止痛,郁金行氣解郁、活血止痛,姜黃破血行氣、通經(jīng)止痛,共為佐藥;甘草補(bǔ)脾益氣、緩急止痛、調(diào)和諸藥,為使藥。諸藥合用,共奏行氣止痛、舒肝和胃、祛瘀生新之功效。中藥制劑在中醫(yī)理論指導(dǎo)下遵循以君藥所含成分為主,兼顧臣藥、佐藥、使藥所含成分[19-20]。本研究中選取方中君藥醋延胡索所含主要藥效成分延胡索乙素、去氫紫堇堿和紫堇堿,臣藥白芍所含代表性成分氧化芍藥苷和芍藥苷,以及佐藥郁金、姜黃共有活性成分雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素為定量研究指標(biāo)成分,同時選取性質(zhì)穩(wěn)定、對照品易得、檢測中出峰時間居中、含量較高的去甲氧基姜黃素為內(nèi)參物,以全面評價金佛止痛丸的整體質(zhì)量。

      3.2 色譜條件選擇

      試驗(yàn)中以水為流動相水相,以金佛止痛丸中定量測定成分氧化芍藥苷、芍藥苷、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、姜黃素、延胡索乙素、去氫紫堇堿和紫堇堿的分離效果為主要指標(biāo),對有機(jī)相(甲醇、乙腈)進(jìn)行考察,結(jié)果乙腈優(yōu)于甲醇。遂以乙腈為有機(jī)相,對水相(0.1%冰醋酸溶液[11-12,16,18]、0.1%磷酸溶液[8-10,13,15,17]、0.1%甲酸溶液)進(jìn)行考察,結(jié)果乙腈-0.1%磷酸水溶液流動相體系對金佛止痛丸中8 種成分的分離效果最佳,色譜圖基線較平穩(wěn)。最終確定按2.1項(xiàng)下的流動相程序?qū)鸱鹬雇赐柚?種成分的含量進(jìn)行同時測定。

      3.3 供試品溶液制備方法選擇

      試驗(yàn)中以金佛止痛丸中8 種成分的綜合提取率為考察指標(biāo),分別對提取溶劑(甲醇[11-12]、95%乙醇[15]、75%乙醇[13,16]、稀乙醇[8-10])和提取方法(加熱回流[8,11,13,17]、超聲[9-10,15-16])進(jìn)行考察,結(jié)果以稀乙醇為提取溶劑,加熱回流提取45 min時,8 種目標(biāo)成分的綜合提取率最佳。故選擇稀乙醇加熱回流提取45 min作為供試品處理方法。

      3.4 方法評價

      本研究中采用HPLC-QAMS法同時測定金佛止痛丸中8種成分的含量,建立了金佛止痛丸的多指標(biāo)質(zhì)量分析方法,有效地降低了檢驗(yàn)成本,且操作便捷、結(jié)果準(zhǔn)確,可用于金佛止痛丸的多指標(biāo)質(zhì)量控制。

      猜你喜歡
      紫堇乙素延胡索
      午后
      燈盞乙素在抑制冠脈搭橋術(shù)后靜脈橋再狹窄中的應(yīng)用
      燈盞乙素對OX-LDL損傷的RAW264.7細(xì)胞中PKC和TNF-α表達(dá)的影響
      紫堇,小野花也有春天
      延胡索化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展
      花季少女的困擾
      鎘污染對延胡索生長和鎘積累的影響
      五味子乙素對MDR1介導(dǎo)的人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS/ADR所致多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)研究
      HPLC法測定三香健脾膠囊中延胡索乙素的含量
      不同炮制方法對延胡索有效成份影響研究
      海盐县| 丹巴县| 衡水市| 石柱| 景德镇市| 广平县| 延安市| 嘉兴市| 合阳县| 同江市| 定远县| 云安县| 邯郸县| 长兴县| 平泉县| 三穗县| 太和县| 东光县| 根河市| 广饶县| 琼结县| 海阳市| 游戏| 乐山市| 丰原市| 八宿县| 方城县| 建昌县| 林周县| 陕西省| 凤凰县| 株洲县| 普宁市| 水富县| 新余市| 凌海市| 邢台县| 恩施市| 牟定县| 华池县| 白山市|