奧拉西坦聯(lián)合石菖蒲對(duì)AD大鼠氧化應(yīng)激能力及空間學(xué)習(xí)記憶功能的影響

田小海 常亮 王莘

(1長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部，吉林 長(zhǎng)春 130000；2吉林農(nóng)業(yè)大學(xué))

奧拉西坦是吡咯烷酮衍生物，即是一種新型的y-氨基丁酸環(huán)化衍生物，其有效成分不僅能調(diào)節(jié)腦組織氧代謝、能量代謝，還能通過保護(hù)、修復(fù)及激活神經(jīng)元細(xì)胞，發(fā)揮其腦組織抗氧化等保護(hù)功能，臨床常用于治療神經(jīng)功能損傷、空間記憶功能缺失及障礙〔1～4〕。石菖蒲是多年生天南星科草本植物，其性溫、味辛苦、歸心胃經(jīng)，主要化學(xué)成分有多種如苯丙素類、木脂素類、氨基酸類等，在阿爾茨海默癥治療中主要作用是抗氧化應(yīng)激、鎮(zhèn)靜、抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡、抗炎癥反應(yīng)及改善空間學(xué)習(xí)記憶功能等〔5～9〕。 本文擬分析奧拉西坦聯(lián)合石菖蒲對(duì)AD大鼠氧化應(yīng)激能力及空間學(xué)習(xí)記憶功能的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與造模 75只Wistar雄性SPF級(jí)大鼠，體重(228±22)g，由長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組10只，實(shí)驗(yàn)組65只。造模的65只Wistar大鼠(實(shí)驗(yàn)組)均腹腔注射D-半乳糖(100 mg/kg)6 w，通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)篩選出50只造模成功的大鼠，分為模型組、奧拉西坦組、奧拉西坦+低劑量石菖蒲組、奧拉西坦+中劑量石菖蒲組和奧拉西坦+高劑量石菖蒲組各10只。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑與檢測(cè)設(shè)備 中藥石菖蒲購(gòu)買后自制成細(xì)粉使用(毫州市佰林堂藥業(yè)有限公司)；奧拉西坦膠囊購(gòu)于石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司-國(guó)藥準(zhǔn)字H20031033；D-半乳糖購(gòu)自長(zhǎng)春市南關(guān)區(qū)金萊博生物實(shí)驗(yàn)服務(wù)部(美國(guó)，Invitrogen)；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程公司。Morris水迷宮(上海，XR-XM101-Z)和Biotek Epoch酶標(biāo)儀(山東，JD-SY96A)。

1.3給藥方法、藥物配制和劑量 給藥方式：灌胃，每天上午1次，連續(xù)灌胃5 w。配制奧拉西坦(20 ml，160 mg/ml)、奧拉西坦+低劑量石菖蒲(20 ml，奧拉西坦160 mg+2 g石菖蒲/ml)、奧拉西坦+中劑量石菖蒲(20 ml，奧拉西坦160 mg/ml+4 g石菖蒲/ml)和奧拉西坦+高劑量石菖蒲(20 ml，奧拉西坦160 mg/ml+8 g石菖蒲/ml)，現(xiàn)用現(xiàn)配。對(duì)照組、模型組分別給予5 ml/kg生理鹽水，各實(shí)驗(yàn)組給予等劑量相關(guān)藥物。

1.4Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 造模6 w(治療前)和給藥4 w(治療后)均進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試，記錄大鼠逃避潛伏期、總路程、經(jīng)過平臺(tái)象限次數(shù)及目標(biāo)象限游泳時(shí)間占總時(shí)間比，檢測(cè)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能。Morris水迷宮測(cè)試共7 d，其中1～6 d是定位航行試驗(yàn)記錄大鼠逃避潛伏期，第7天是空間探索實(shí)驗(yàn)，撤掉平臺(tái)記錄第1次穿越目標(biāo)區(qū)域時(shí)間、穿越目標(biāo)區(qū)域次數(shù)、穿越中心區(qū)域及中環(huán)區(qū)域的百分比。

1.5檢測(cè)各組血清和腦組織中SOD和MDA含量 Morris水迷宮測(cè)試結(jié)束第2天采集血清和腦組織海馬區(qū)待檢測(cè)，采用生物化學(xué)方法嚴(yán)格遵守試劑盒操作步驟檢測(cè)各組血清和腦組織中SOD和MDA含量。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行多因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1定位航行試驗(yàn)記錄結(jié)果比較 治療前實(shí)驗(yàn)各組逃避潛伏期和總路程均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，實(shí)驗(yàn)各組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后與治療前比較實(shí)驗(yàn)各給藥組逃避潛伏期和總路程均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療后與模型組比較，治療各組逃避潛伏期和總路程均降低，聯(lián)合用藥優(yōu)于單純奧拉西坦給藥，且聯(lián)合用藥隨劑量增加效果更佳，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表1。

2.2空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 治療前實(shí)驗(yàn)各組第1次穿越目標(biāo)區(qū)域時(shí)間、穿越目標(biāo)區(qū)域次數(shù)、穿越中心區(qū)域及中環(huán)區(qū)域的百分比均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，實(shí)驗(yàn)各組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后與治療前比較實(shí)驗(yàn)各給藥組均提高；治療后與模型組比較，治療各組均提高，聯(lián)合用藥優(yōu)于單純奧拉西坦給藥，且聯(lián)合用藥隨劑量增加效果更佳，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表1 定位航行試驗(yàn)各組逃避潛伏期和總路程的比較

1)與對(duì)照組比較，2)與治療前比較，3)與模型組比較，4)與奧拉西坦組比較，5)與奧拉西坦+石菖蒲低劑量組比較，6)與奧拉西坦+石菖蒲中劑量組比較：均P<0.05；表2同

表2 各組空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

2.3各組血清和腦組織中SOD和MDA含量比較 與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組各組血清和腦組織中SOD含量均降低，MDA含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，各給藥組血清和腦組織中SOD含量均升高、MDA含量降低，且石菖蒲呈劑量依賴性，各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表3。

表3 各組血清和腦組織中SOD和MDA含量比較

3 討 論

隨著社會(huì)發(fā)展世界人口老齡化趨勢(shì)日益明顯，老年病的形式、種類多樣和嚴(yán)重性受到醫(yī)務(wù)工作者的廣泛關(guān)注，AD是老年人常見的一種癡呆性疾病，不但影響患者自身生存質(zhì)量、加重家庭與社會(huì)的醫(yī)療負(fù)擔(dān)，還是老年人死亡的重要因素〔10〕。

奧拉西坦是一種營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)類藥物，臨床常用于促智、腦卒中等腦血管疾病的治療；其可直接或間接性作用于腦組織各個(gè)分區(qū)，通過提高腦組織抗氧化能力、降低腦組織氧化應(yīng)激損傷、活化乙酰膽堿等作用，保護(hù)修復(fù)腦組織神經(jīng)細(xì)胞，從而改善大腦的學(xué)習(xí)記憶功能〔11～13〕。由于西藥作用有限且靶點(diǎn)單一，而中藥品種豐富且具有多靶點(diǎn)優(yōu)勢(shì)，因此中西藥結(jié)合治療AD是國(guó)際性趨勢(shì)，有廣闊的臨床應(yīng)用前景〔14〕。石菖蒲在《漢武帝內(nèi)傳》和《神農(nóng)本草經(jīng)》記載中都有益智功效，臨床已廣泛用于癲癇、癡呆、中風(fēng)、心悸及健忘等〔14～16〕。

因此結(jié)合兩種藥物的作用機(jī)制，將其共同應(yīng)用于AD疾病的治療；本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明聯(lián)合用藥更有助于提高AD大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能和氧化應(yīng)激能力。

綜上，中藥石菖蒲聯(lián)合奧拉西坦治療能明顯改善AD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能，效果優(yōu)于單純奧拉西坦，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。