新疆鼠疫血清學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)控結(jié)果與評(píng)價(jià)

貴有軍 郝俊暉 王啟果 羅勇軍 木尼熱·木合買提 卡斯木江·玉素甫 李博 王誠(chéng) 王效俊

（新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心 830002）

鼠疫是由鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia Pestis）引起的廣泛流行于野生嚙齒動(dòng)物間的一種以鼠、蚤傳播為主的自然疫源性疾病，以發(fā)病急、傳播快、病死率高、傳染性強(qiáng)為主要特征，是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》 規(guī)定的甲類傳染病[1]。鼠疫血清學(xué)檢驗(yàn)具有快速、敏感、特異性高、成本低、操作簡(jiǎn)便實(shí)用等特點(diǎn)，同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和人員水平要求較低，適合基層開展規(guī)模檢測(cè)[2]，在流行病學(xué)調(diào)查、常規(guī)監(jiān)測(cè)、腐敗材料檢驗(yàn)、鼠疫快速檢驗(yàn)和追溯診斷等方面有非常重要的作用。為提高全區(qū)鼠疫血清學(xué)檢測(cè)水平，建立一套行之有效的質(zhì)量管理體系，確保檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性，2021 年7 月在全區(qū)13個(gè)鼠疫監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室開展室間質(zhì)量控制，對(duì)檢驗(yàn)工作進(jìn)行全面分析，并作質(zhì)控結(jié)果評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)控項(xiàng)目

間接血凝試驗(yàn)（IHA）和反向間接血凝試驗(yàn)（RIHA）。

1.2 質(zhì)控材料制備

將鼠疫F1 抗體（抗原）間接血凝診斷試劑中陽性血清和菌體制劑分別按一定比例稀釋，充分混勻后分裝于離心管中，置于4℃冰箱中冷藏。各質(zhì)控樣本每天檢測(cè)1 次，觀察記錄結(jié)果，連續(xù)測(cè)試5 次，已出現(xiàn)最多次數(shù)的滴度作為該批質(zhì)控血清的標(biāo)準(zhǔn)滴度。試劑盒由蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn)，均在有效期內(nèi)使用。

1.3 質(zhì)控方法

將質(zhì)控樣本分裝于Eppendorf（1ml）管中分發(fā)到各考核點(diǎn)，統(tǒng)一時(shí)間進(jìn)行檢測(cè)并報(bào)告結(jié)果。質(zhì)控樣本的操作按照《新疆鼠疫防治手冊(cè)》 和試劑盒說明書進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：鼠疫IHA 和RIHA 結(jié)果判定以反應(yīng)強(qiáng)度(++) 為陽性反應(yīng)界限，出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度作為該血清的陽性滴度。

1.4 結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)控樣本檢測(cè)滴度與“標(biāo)準(zhǔn)滴度”比較相差不超過±1 個(gè)稀釋滴度，視為質(zhì)控合格，超過則判定為不合格。

2 結(jié)果

2.1 鼠疫血清學(xué)檢測(cè)質(zhì)控結(jié)果

由附表可知，2021 年7 月開展鼠疫血清學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)控發(fā)放質(zhì)控樣本共26 份，質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室13 個(gè)，IHA 和RIHA 室間質(zhì)控樣本標(biāo)準(zhǔn)滴度均為1:256，經(jīng)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果全面分析和質(zhì)控評(píng)價(jià)，質(zhì)控總合格率為80.76%，IHA 的合格率為84.62%，RIHA的合格率為76.92%。表明全區(qū)鼠疫監(jiān)測(cè)點(diǎn)基本具備鼠疫血清學(xué)檢驗(yàn)?zāi)芰?，檢驗(yàn)結(jié)果基本能反映監(jiān)測(cè)地區(qū)的客觀事實(shí)。

附表 2021 年新疆鼠疫血清學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)控結(jié)果

2.2 質(zhì)控結(jié)果影響因素分析

2.2.1 檢測(cè)人員實(shí)操能力

質(zhì)控結(jié)果顯示，由于檢測(cè)人員操作不當(dāng)、理論基礎(chǔ)差或工作崗位調(diào)整等原因，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果判定存在誤差，致使質(zhì)控結(jié)果不合格。此類因素質(zhì)控不合格頻率較高，有2 個(gè)實(shí)驗(yàn)室3 次質(zhì)控不合格，占質(zhì)控不合格次數(shù)的60%。

2.2.2 儀器設(shè)備及試劑材料

質(zhì)控結(jié)果顯示，由于儀器設(shè)備選擇或使用不當(dāng)，導(dǎo)致1 個(gè)實(shí)驗(yàn)室1 次質(zhì)控不合格，此類因素占不合次數(shù)20%。由于試劑配制、保存不規(guī)范，導(dǎo)致1 個(gè)實(shí)驗(yàn)室1 次質(zhì)控不合格，此類因素占不合次數(shù)20%。

3 討論

20 世紀(jì)70、80 年代，新疆鼠防專業(yè)隊(duì)伍曾是全國(guó)最強(qiáng)的陣容之一，但隨著鼠疫防控老專家相繼退休，出現(xiàn)鼠防人才斷層，隊(duì)伍不穩(wěn)的局面，很多醫(yī)學(xué)專業(yè)畢業(yè)生不愿投身到這種條件艱苦、經(jīng)常出野外的鼠疫防控事業(yè)中來[3]。多數(shù)基層疾病預(yù)防控制中心編制短缺，專業(yè)技術(shù)人員承擔(dān)多病種防治任務(wù)，單病種檢測(cè)規(guī)范化操作水平較低，專門從事鼠疫防控工作的人員更少，加之新入職和頻繁轉(zhuǎn)崗的人員缺乏專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)[4]，造成目前新疆鼠疫防控專業(yè)能力和技術(shù)水平不高的局面。

專業(yè)人員理論基礎(chǔ)和實(shí)操水平對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)起關(guān)鍵主導(dǎo)作用。實(shí)驗(yàn)人員要掌握專業(yè)理論知識(shí)，經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)可熟練操作后持證上崗。實(shí)驗(yàn)人員因自身經(jīng)驗(yàn)不足會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，如在倍比稀釋過程中，移液量不準(zhǔn)確、移液器吹打力度或次數(shù)不同，均會(huì)造成稀釋滴度不準(zhǔn)確；檢測(cè)人員對(duì)檢測(cè)原理、流程不熟悉、操作不規(guī)范，極易造成試劑或樣本交叉污染而導(dǎo)致整個(gè)試驗(yàn)的失敗，如在使用移液器滴加陽性參考、F1 抗原（抗體）血球時(shí)，吸頭不小心接觸到反應(yīng)孔（此時(shí)孔內(nèi)已有稀釋液、血清、抗原等），又沒有及時(shí)更換吸頭，會(huì)造成試劑和各孔內(nèi)液體交叉污染；實(shí)驗(yàn)人員因?qū)I(yè)理論掌握不扎實(shí)、責(zé)任性不強(qiáng)、樣本或試劑保存不規(guī)范等原因，會(huì)造成整批樣本腐敗或試劑失效，如在現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)培訓(xùn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，有人將樣本和試劑一起長(zhǎng)期在4℃冰箱中冷藏存放導(dǎo)致樣本腐??；試驗(yàn)人員（尤其是有最終復(fù)判權(quán)和出具報(bào)告的省級(jí)疾控監(jiān)測(cè)人員）要充分了解儀器檢測(cè)原理和性能，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定的分析能力，否則，即便是完全按照操作步驟進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)遇到復(fù)雜樣品或出現(xiàn)異常現(xiàn)象時(shí)也不一定能得出準(zhǔn)確可靠的結(jié)果[5]。

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制是為了排除誤差，保證檢驗(yàn)結(jié)果實(shí)事求，它包括室內(nèi)質(zhì)控(IQC) 和室間質(zhì)控(EQA)，且參與EQA 的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)首先做好IQC[6]。隨著鼠疫監(jiān)測(cè)關(guān)口前移和監(jiān)測(cè)點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)的不斷推進(jìn)，提高鼠疫監(jiān)測(cè)質(zhì)量成為監(jiān)測(cè)工作的重要內(nèi)容，自治區(qū)疾控中心作為全區(qū)鼠疫監(jiān)測(cè)技術(shù)指導(dǎo)和復(fù)判機(jī)構(gòu)，對(duì)全區(qū)監(jiān)測(cè)工作質(zhì)量起督促與指導(dǎo)作用，在日常工作中應(yīng)加強(qiáng)對(duì)地、縣級(jí)鼠防機(jī)構(gòu)的現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)和培訓(xùn)力度，對(duì)IQC 人員進(jìn)行組織管理、儀器設(shè)備（檢測(cè)儀應(yīng)在校準(zhǔn)）、取材運(yùn)輸、試劑盒質(zhì)控、檢驗(yàn)程序、結(jié)果判定、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及疫情報(bào)告等的培訓(xùn)；對(duì)EQA 過程中涉及的樣本制備、專技培訓(xùn)及結(jié)果分析等要做到認(rèn)真負(fù)責(zé)；分析質(zhì)控中發(fā)現(xiàn)問題的原因，提出解決辦法，再次進(jìn)行考核，直至合格；對(duì)室間質(zhì)控工作中出現(xiàn)的薄弱環(huán)節(jié)及時(shí)提出改進(jìn)措施。為確保檢測(cè)質(zhì)量，完善體制，建立長(zhǎng)效機(jī)制，每年監(jiān)測(cè)工作開始前應(yīng)對(duì)鼠防點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行儀器設(shè)備校準(zhǔn)和質(zhì)控考核，通過發(fā)現(xiàn)、分析和解決問題，使各實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)工作都能達(dá)到質(zhì)控要求，保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠[7]。