NSPs在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中的表達(dá)及臨床意義①

姜蓉瓊 楊桂釗 馮 丹 劉 靜 王 丹 陳 勇 袁國華

（川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫研究所，南充 637000）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種好發(fā)于育齡期女性的慢性自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，累及幾乎所有系統(tǒng)、器官，包括皮膚、關(guān)節(jié)、腎、肺、神經(jīng)系統(tǒng)、漿膜、消化、血液和（或）其他組織器官，輕者僅有輕度關(guān)節(jié)痛和皮膚受累，重者可出現(xiàn)重要內(nèi)臟器官受累，甚至危及生命［1］。SLE 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前研究認(rèn)為其特征性免疫學(xué)改變?yōu)轶w內(nèi)產(chǎn)生多種自身抗體，抗原抗體形成免疫復(fù)合物沉積于組織引起組織器官損傷。中性粒細(xì)胞絲氨酸蛋白酶（neutrophil serine proteases，NSPs）是主要在中性粒細(xì)胞中表達(dá)的蛋白水解酶，主要包括中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（neutrophil elas?tase，NE）、組織蛋白酶G（cathepsin G，CG）、蛋白酶3（proteinase 3，PR3）。DAI 等［2］研究發(fā)現(xiàn)，雌激素誘導(dǎo)的B6 小鼠和自發(fā)性狼瘡易感小鼠（MRL-LPR、B6-LPR 和NZB/WF1 小鼠）中，NE、CG、PR3 表達(dá)上調(diào)，認(rèn)為NSPs 參與自身免疫過程。另有研究表明，NSPs通過促進(jìn)IL-1β產(chǎn)生和水解內(nèi)皮細(xì)胞參與中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥性血管疾病發(fā)生發(fā)展，且抑制NSPs 可能成為該病治療靶點(diǎn)［3-4］。諸多研究表明NSPs在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。近年研究顯示，NSPs可能成為自身抗原，產(chǎn)生自身抗體，可能與SLE 發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［5］。為研究NSPs 是否參與SLE 發(fā)生發(fā)展過程，本研究擬采用ELISA 法檢測SLE患者血清NSPs水平，并探究其與SLE的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 研究對象 選取2020年12月至2021年5月川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科就診的SLE 患者66例，其中男性0例，女性66例，年齡20～46歲，平均年齡（32.3±6.5）歲，病程1～172 個月，中位病程31 個月。所有患者均符合1997 年ACR SLE 的診斷分類標(biāo)準(zhǔn)［6］或2019 年EULAR/ACR SLE 的診斷分類標(biāo)準(zhǔn)［7］，排除合并急性或慢性炎癥疾病、急性肝腎損傷、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重心、肺、腦、腎等原發(fā)性疾病及其他自身免疫性疾病患者，排除14歲以下患兒，近期無懷孕、生育或流產(chǎn)情況，且近3個月未使用大劑量糖皮質(zhì)激素。詳細(xì)收集臨床和實(shí)驗(yàn)室資料，按照文獻(xiàn)［8］判定病情活動度積分（SLEDAI）。選擇同期39 例健康體檢者作為健康對照組，年齡18～41 歲，平均年齡（31.8±5.9）歲，兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究遵循人體受試者道德倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，研究方案經(jīng)川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有受試者知情同意。

1.1.2 主要試劑及儀器 人NE（ELA2）ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）；人CG（cath-G）、人PR3 ELISA 試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；ADVIA Centaur XP 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)（SIEMENS）。

1.2 方法

1.2.1 ELISA 測定血清NE 水平 采集受試者晨起外周靜脈血5 ml，室溫凝固2 h，1 000 g 離心15 min，取血清按1∶4 稀釋。取300 μl 重組人ELA2 標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行倍比稀釋，取100μl 標(biāo)準(zhǔn)液或待測血清加入預(yù)包被抗人ELA2 抗體的96 孔板（每例均設(shè)復(fù)孔）37 ℃溫育90 min，棄孔中液體，加入100μl生物素標(biāo)記的抗人ELA2 抗體工作液37 ℃溫育60 min，1×洗滌緩沖液洗板3 次，加入100μl 親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液37 ℃溫育30 min，1×洗滌緩沖液洗板5次，加入90 μl TMB底物溶液37 ℃避光顯色15 min，100 μl/孔加入終止液，酶標(biāo)儀測定450 nm處吸光度?？瞻讓φ找詷悠废♂屢捍娲郎y血清。

1.2.2 ELISA 測定血清CG、PR3 水平 取250 μl CG（PR3）標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行倍比稀釋，取100μl 標(biāo)準(zhǔn)液或待測血清加入預(yù)包被抗人CG（PR3）抗體的96 孔板（每例均設(shè)復(fù)孔）37 ℃溫育120 min，棄孔中液體，加入100 μl 生物素標(biāo)記的抗人CG（PR3）抗體37 ℃溫育60 min，1×洗滌緩沖液洗板3 次，加入100 μl HRP-親和素37 ℃溫育60 min，1×洗滌緩沖液洗板5 次，加入90 μl TMB 底物溶液37 ℃避光顯色20 min，50μl/孔加入終止液，酶標(biāo)儀測定450 nm 處吸光度。空白對照以樣品稀釋液代替待測血清。

1.2.3 血清NE、CG、PR3 水平與臨床特征相關(guān)性分析 將SLE 組血清NE、CG、PR3 濃度≥健康對照組血清NE、CG、PR3濃度P95（即116.6、81.2、2.2 ng/ml）定義為表達(dá)升高，SLE 患者白細(xì)胞減少或血小減少定義為血液學(xué)異常。SLE患者出現(xiàn)下列任意一項(xiàng)表現(xiàn)者定義為腎損傷：①尿蛋白定量>0.5 g/24 h，或隨機(jī)尿檢查尿蛋白+++，或尿蛋白/肌酐比>500 mg/g（50 mg/mmol）；②細(xì)胞管型包括紅細(xì)胞管型、血紅蛋白管型、顆粒管型、管狀管型或混合管型；③活動性尿沉渣（除外尿路感染，尿白細(xì)胞>5個/HPF，尿紅細(xì)胞>5 個/HPF），或紅細(xì)胞管型，或白細(xì)胞管型；④腎組織活檢顯示為免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球腎炎?；颊咧饕捎锰瞧べ|(zhì)激素（本研究中患者使用的糖皮質(zhì)激素劑量均<15 mg/d）、羥氯喹和免疫抑制劑治療，后者包括環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）、硫唑嘌呤（azathioprine，AZA）、嗎替麥考酚酯（myco?phenolate mofetil，MMF）、他克莫司（tacrolimus，TAC）、甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）。分別統(tǒng)計(jì)血清NE、CG、PR3 水平正常組和升高組SLE 患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)分布計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布計(jì)量資料以M（Q1，Q3）表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料關(guān)系評估采用Pearson 或Spearman 相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE 組和健康對照組受檢者血清NE、CG、PR3水平比較 SLE 組血清NE 水平［98.7（66.1，128.9）ng/ml］顯著高于健康對照組［51.3（33.7，78.9）ng/ml］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-3.487，P<0.001，圖1A）；SLE 組血清CG 水平［108.9（53.9，134.6）pg/ml］顯著高于健康對照組［38.7（36.1，40.9）pg/ml］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-6.360，P<0.001，圖1B）；SLE 組血清中PR3 水平［2.6（2.1，3.6）ng/ml］高于健康對照組［1.1（1.0，1.6）ng/ml］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-7.037，P<0.001，圖1C）。

圖1 SLE組和健康對照組血清NE、CG、PR3水平比較Fig.1 Comparison of serum NE，CG，PR3 levels between SLE group and healthy control group

2.2 SLE 患者血清NE、CG、PR3 水平與SLEDAI 相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清NE、CG、PR3水平與SLEDAI 均呈顯著正相關(guān)（r=0.420，0.269，0.475，P<0.05，圖2）。

圖2 SLE患者血清NE、CG、PR3水平與SLEDAI評分相關(guān)性分析Fig.2 Analysis of correlation between serum levels of NE，CG，PR3 and SLEDAI score in patients with SLE

2.3 SLE患者血清NE、CG、PR3水平與臨床特征的關(guān)系 血清NE水平升高的SLE患者C4水平明顯低于未升高者（t=-3.022，P=0.004），SLEDAI 評分升高（Z=-2.892，P=0.004），且抗核小體抗體陽性率（χ2=4.261，P=0.039）和抗核糖體P 蛋白抗體陽性率（χ2=8.542，P=0.003）升高，而皮膚黏膜損傷、關(guān)節(jié)炎、腎損傷、血液學(xué)異常發(fā)生率及抗dsDNA 抗體陽性率有升高趨勢，C3 水平更低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；不同血清NE 水平組糖皮質(zhì)激素、硫酸羥氯喹、免疫抑制劑使用情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表1）。血清CG 水平升高的SLE 患者更易發(fā)生腎損傷（χ2=4.062，P=0.044），血液學(xué)異常發(fā)生率明顯升高（χ2=4.692，P=0.030），且C3（t=-2.964，P=0.004）、C4（t=-2.969，P=0.004）水平更低，SLE?DAI 評分更高（Z=-2.197，P=0.028），同時抗dsDNA抗體（χ2=4.243，P=0.039）和抗核小體抗體（χ2=3.993，P=0.046）陽性率升高，其他臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)及糖皮質(zhì)激素、硫酸羥氯喹、免疫抑制劑使用情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表2）。血清PR3 水平升高的SLE 患者更易發(fā)生關(guān)節(jié)炎（χ2=3.948，P=0.047），其他臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)，如皮膚黏膜損傷、腎損傷、血液學(xué)異常發(fā)生率及抗dsDNA 抗體陽性率有升高趨勢，C3、C4 水平更低，SLEDAI 評分更高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），治療情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表3）。

表1 不同血清NE水平SLE患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況比較［±s，M（Q1，Q3），例（%）］Tab.1 Comparison of clinical manifestations，laboratory results and treatment in SLE patients with different serum NE levels［±s，M（Q1，Q3），n（%）］

表1 不同血清NE水平SLE患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況比較［±s，M（Q1，Q3），例（%）］Tab.1 Comparison of clinical manifestations，laboratory results and treatment in SLE patients with different serum NE levels［±s，M（Q1，Q3），n（%）］

Items Female/Male Age/year Course of disease/month Skin and mucosa damage Arthritis Kidney damage Hematological abnormalities Anti-nuclear antibody Anti-dsDNA antibody Anti-Sm antibody Anti-nRNP antibody Anti-SSA antibody Anti-SSB antibody Anti-nucleosome antibody Anti-ribosomal P protein antibody C3 level/（mg·L-1）C4 level/（mg·L-1）SLEDAI score Glucocorticoid Hydroxychloroquine Immunosuppressant Different NE levels groups/（ng·ml-1）≥116.6（n=23）23/0 33.7±6.8 40（19，67）5（26.1）6（26.1）5（21.7）15（65.2）23（100）13（56.5）5（21.7）12（52.2）19（82.6）8（34.8）9（39.1）13（56.5）623.9±175.6 118.5±59.2 6（4，9）16（69.6）20（87.0）22（95.7）<116.6（n=43）43/0 32.2±6.5 26（16，40）6（11.6）6（14.0）6（14.0）20（46.5）43（100）14（32.6）9（20.9）21（48.8）30（69.8）6（14.0）7（16.3）9（20.9）712.3±181.2 173.2±75.2 3（2，6）22（51.2）41（95.3）38（88.4）χ2/t/Z-0.314-1.521 1.335 0.779 0.214 2.105-3.560 0.000 0.067 1.292 2.744 4.261 8.542-1.907-3.022-2.892 2.078 0.547 0.282 P>0.05 0.755 0.128 0.248 0.377 0.644 0.147 NS 0.059 1.000 0.796 0.256 0.098 0.039 0.003 0.061 0.004 0.004 0.149 0.460 0.595

表2 不同血清CG水平SLE患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況比較［±s，M（Q1，Q3），例（%）］Tab.2 Comparison of clinical manifestations，laboratory results and treatment in SLE patients with different serum CG levels［±s，M（Q1，Q3），n（%）］

表2 不同血清CG水平SLE患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況比較［±s，M（Q1，Q3），例（%）］Tab.2 Comparison of clinical manifestations，laboratory results and treatment in SLE patients with different serum CG levels［±s，M（Q1，Q3），n（%）］

Items Female/Male Age/year Course of disease/month Skin and mucosa damage Arthritis Kidney damage Hematological abnormalities Anti-nuclear antibody Anti-dsDNA antibody Anti-Sm antibody Anti-nRNP antibody Anti-SSA antibody Anti-SSB antibody Anti-nucleosome antibody Anti-ribosomal P protein antibody C3 level/（mg·L-1）C4 level/（mg·L-1）SLEDAI score Glucocorticoid Hydroxychloroquine Immunosuppressant Different CG levels groups/（pg·ml-1）≥81.2（n=39）39/0 32.1±6.1 29（16，40）5（12.8）6（15.4）10（25.6）25（64.1）39（100）20（51.3）11（28.2）21（53.8）30（76.9）8（20.5）13（33.3）16（41）629.0±192.9 132.8±67.1 5（2，8）22（56.4）38（97.4）34（87.2）<81.2（n=27）27/0 34.9±5.9 36（19，48）6（22.2）6（22.2）1（3.7）10（37）27（100）7（25.9）3（11.5）12（44.4）19（70.4）6（22.2）3（11.5）6（22.2）757.3±138.4 185.03±74.8 3（2，4）16（59.3）23（85.2）26（96.3）χ2/t/Z--1.841-1.155 0.451 0.147 4.062 4.692-4.243 2.564 0.564 0.358 0.028 3.993 2.538-2.964-2.969-2.197 0.053 1.894 0.691 P>0.05 0.070 0.248 0.502 0.701 0.044 0.030>0.05 0.039 0.109 0.453 0.549 0.867 0.046 0.111 0.004 0.004 0.028 0.881 0.169 0.406

表3 不同血清PR3水平SLE患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況比較［±s，M（Q1，Q3），例（%）］Tab.3 Comparison of clinical manifestations，laboratory results and treatment in SLE patients with different serum PR3 levels［±s，M（Q1，Q3），n（%）］

表3 不同血清PR3水平SLE患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況比較［±s，M（Q1，Q3），例（%）］Tab.3 Comparison of clinical manifestations，laboratory results and treatment in SLE patients with different serum PR3 levels［±s，M（Q1，Q3），n（%）］

Items Female/Male Age/year Course of disease/month Skin and mucosa damage Arthritis Kidney damage Hematological abnormalities Anti-nuclear antibody Anti-dsDNA antibody Anti-Sm antibody Anti-nRNP antibody Anti-SSA antibody Anti-SSB antibody Anti-nucleosome antibody Anti-ribosomal P protein antibody C3 level/（mg·L-1）C4 level/（mg·L-1）SLEDAI score Glucocorticoid Hydroxychloroquine Immunosuppressant Different PR3 levels groups/（ng·ml-1）≥2.2（n=48）48/0 31.7±6.1 30（15，40）9（18.8）12（25）10（20.8）29（60.4）48（100）22（45.8）9（18.8）23（47.9）37（77.1）13（27.1）15（31.3）17（35.4）673.4±186.8 152.1±74.1 5（3，8）28（58.3）44（91.7）44（91.7）<2.2（n=18）18/0 34.2±7.4 39（21，67）2（11.1）0（0）1（5.6）6（33.3）18（100）5（27.8）5（27.8）10（55.6）12（66.7）1（5.6）1（5.6）5（27.8）703.1±175.5 159.6±76.9 3（2，4）10（55.6）17（94.4）16（88.9）χ2/t/Z--1.396-1.383 0.137 3.948 1.238 3.855-1.765 0.212 0.306 0.298 2.456 3.411 0.344-0.584-0.359-1.307 0.041 0.000 0.000 P>0.05 0.168 0.167 0.711 0.047 0.266 0.050>0.05 0.184 0.645 0.580 0.585 0.117 0.065 0.558 0.561 0.721 0.191 0.839 1.000 1.000

3 討論

SLE 是常見的自身免疫性疾病，其病因尚不清楚，發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，尚未闡明。通常認(rèn)為具有遺傳背景的個體在環(huán)境、性激素及感染等因素共同作用下引起機(jī)體免疫功能異常、誘導(dǎo)T 細(xì)胞及B 細(xì)胞異常分化、自身抗體產(chǎn)生、免疫復(fù)合物形成及其在各組織沉積，導(dǎo)致SLE 發(fā)生和進(jìn)展。近年研究顯示NSPs可能作為自身抗原產(chǎn)生自身抗體，以及通過介導(dǎo)多種炎癥因子促進(jìn)炎癥性病變，參與SLE 病理過程。

NSPs是主要表達(dá)于中性粒細(xì)胞的蛋白水解酶，正常生理情況下儲藏于胞質(zhì)顆粒，包括NE、CG、PR3以及中性粒細(xì)胞絲氨酸蛋白酶4（neutrophil serine proteases 4，NSP4）。NSP4 是繼NE、CG 及PR3 之后在中性粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的第4 種絲氨酸蛋白酶，于2012 年由PERERA 等［9］發(fā)現(xiàn)并命名，由于其含量極少，約為CG含量的5%，相關(guān)報(bào)道極為少見且不易檢測，故本研究僅探討NE、CG和PR3。NSPs的重要生物學(xué)功能一直被認(rèn)為是降解組織和殺滅微生物，但生化技術(shù)的發(fā)展有助于識別新的NSPs 底物和途徑，新近發(fā)現(xiàn)NSPs 介導(dǎo)的功能范圍非常廣泛，在自身免疫、代謝和癌癥中也起重要作用［5］。

本研究顯示，SLE患者血清NE、CG、PR3水平均顯著高于健康對照組，表明NSPs在SLE 中具有重要意義。NE 在SLE 中的作用與中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophil extracellular traps，NETs）密切相關(guān)。NETs由中性粒細(xì)胞產(chǎn)生，由染色質(zhì)及附著其上的顆粒蛋白組成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。大量研究顯示，SLE 患者體內(nèi)NETs 生成更多，不僅作為自身抗原的重要來源之一產(chǎn)生自身抗體，還可刺激低密度粒細(xì)胞（low density granulocytes，LDG）、內(nèi)皮細(xì)胞和漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）等細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子，從而參與SLE 發(fā)病過程［10-11］。而NE是NETs 中第二豐富的蛋白。中性粒細(xì)胞一旦激活，NE 就會從嗜天青顆粒中逃逸出來，移位至細(xì)胞核，部分降解特定的組蛋白，從而促進(jìn)染色質(zhì)解聚，解聚的染色質(zhì)與顆粒蛋白構(gòu)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，即為NETs，提示NE 對NETs 形成至關(guān)重要［12］。NE 抑制劑，如SLPI 和Serpin B1，在體外和體內(nèi)均會限制NETs 生成，間接說明NE 對NETs 形成至關(guān)重要［13-14］。除在NETs 形成中的積極作用外，NE 還可裝飾NETs，并在這種環(huán)境中具有蛋白水解活性。此外，NE 對中性粒細(xì)胞效應(yīng)功能非常重要，可直接介導(dǎo)中性粒細(xì)胞脫顆粒時的組織損傷［5］。因此，NE 及NE依賴的NETs生成和中性粒細(xì)胞效應(yīng)功能可改變SLE 免疫系統(tǒng)組成或病理過程，在SLE 發(fā)生發(fā)展中起重要作用。但NE 在SLE 發(fā)生發(fā)展中的具體機(jī)制尚不明確。如一項(xiàng)動物實(shí)驗(yàn)中，敲除SLE 的MRL.Faslpr小鼠模型NE 基因后，NE 減少，進(jìn)而發(fā)展為NE依賴的NETs缺乏，但SLE的腎炎、皮疹、抗自身抗體或免疫成分并未受影響［15］。與既往對NE、NETs 和中性粒細(xì)胞在SLE 中的致病作用的認(rèn)識不符，其作用機(jī)制有待深入研究。TAMIYA 等［16］研究發(fā)現(xiàn)，活動期SLE 患者血清CG 水平明顯高于非活動期患者和健康對照組，糖皮質(zhì)激素治療后迅速下降，與本研究結(jié)論一致。Papillon-Lefévre 綜合征患者中，組織蛋白酶C（CTSC）基因突變導(dǎo)致中性粒細(xì)胞中大量表達(dá)，負(fù)責(zé)NSPs 激活的CTSC 活性完全喪失，NSPs 活動停止，無法產(chǎn)生NETs，表明CG 對NETs 形成是必要的［17］。CG 在SLE 中也可通過NETs發(fā)揮作用。研究表明，CG在部分自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展中起重要作用。雖然具體作用需進(jìn)一步闡明，但可能涉及免疫細(xì)胞激活和免疫應(yīng)答，通過誘導(dǎo)淋巴因子產(chǎn)生促進(jìn)T細(xì)胞依賴的細(xì)胞免疫和抗原特異性抗體產(chǎn)生［18］。推測CG 在SLE 中也可能通過上述機(jī)制發(fā)揮作用。PR3 在NSPs 中有一定特異性，作為抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體（antineutrophil cytoplasmic anti?body，ANCA）的主要靶抗原之一，參與ANCA 相關(guān)性血管炎發(fā)病機(jī)制，尤其中性粒細(xì)胞通過與PR3-ANCA相互作用產(chǎn)生的自身免疫激活在肉芽腫性多血管炎（granulomatosis with polyangiitis，GPA）中起核心作用［19］。SLE中的ANCA 多為MPO-ANCA 低滴度陽性，偶有SLE 中PR3-ANCA 陽性的報(bào)道［20-21］。NETs可能參與SLE 患者PR3-ANCA 生成，但PR3-ANCA在SLE 患者中的致病作用尚未闡明，進(jìn)一步研究PR3-ANCA 與SLE 的關(guān)系可能有助于闡明其在結(jié)締組織疾病中的作用機(jī)制。

SLEDAI評分是判斷SLE嚴(yán)重程度的有效指標(biāo)。本研究顯示，SLE患者體內(nèi)3種NSPs水平均與SLEDAI評分呈正相關(guān)，因此推測NSPs 與SLE 嚴(yán)重程度相關(guān)。進(jìn)一步分析不同血清NE、CG、PR3 水平SLE 患者的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和治療情況發(fā)現(xiàn)，血清NE 水平升高的SLE 患者C4 水平更低，SLEDAI評分更高，抗核小體抗體及抗核糖體P 蛋白抗體陽性率升高；血清CG水平升高的SLE患者更易發(fā)生腎損傷，血液學(xué)異常發(fā)生率明顯升高，SLEDAI 評分更高，C3、C4 水平更低，同時抗dsDNA 抗體和抗核小體抗體陽性率升高；血清PR3 水平升高的SLE 患者更易發(fā)生關(guān)節(jié)炎。SLE 患者中升高的NSPs 與SLE患者臨床表現(xiàn)、自身抗體、疾病活動度評分密切相關(guān)，進(jìn)一步說明NSPs在SLE 發(fā)生和病情進(jìn)展中具有重要作用。值得一提的是，雖然3 組不同NSPs 水平SLE 患者對比中，部分臨床表現(xiàn)和重要自身抗體陽性率雖有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與樣本量限制有一定關(guān)系，且為排除大劑量皮質(zhì)激素對中性粒細(xì)胞的影響，本研究中SLE 患者疾病活動度評分偏低，無法排除其對結(jié)果產(chǎn)生一定影響。此外，本研究未收集到肺、漿膜、神經(jīng)系統(tǒng)、消化等有關(guān)系統(tǒng)受累的病例，SLE 患者NSPs 水平與SLE 臨床特征的關(guān)系需進(jìn)一步研究。

綜上所述，SLE 是一種育齡期高發(fā)的自身免疫性疾病，NSPs 在SLE 發(fā)病機(jī)制中的作用不容忽視，了解NSPs 和免疫功能相互作用的生理學(xué)過程可能為SLE 治療提供新的途徑。本研究提示SLE 患者NSPs 水平升高，且與疾病活動度相關(guān)。在此基礎(chǔ)上，課題組將進(jìn)一步研究SLE 患者體內(nèi)NSPs增加的原因，以及增加的NSPs如何參與SLE病理過程。