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    肺腺癌組織中TGF-α、p53、Ki-67、E-cadherin蛋白表達(dá)水平及其相關(guān)性

    2022-07-19 08:50:28盧柳程鈺
    海南醫(yī)學(xué) 2022年13期
    關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞病理學(xué)腺癌

    盧柳,程鈺

    安康市中心醫(yī)院病理科,陜西 安康 725000

    肺腺癌屬非小細(xì)胞癌,是肺癌的一種,約占肺癌總數(shù)的55%。肺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢,尋找到更加有效精確的標(biāo)志物是腫瘤醫(yī)療的重要課題。在2011年,肺腺癌共識(shí)意見重新確定了原位腺癌(AIS)、微浸潤性腺癌(MIA)和貼壁生長為主的浸潤性腺癌(LPA)的病理類型。此外,MIA和腺瘤樣增生(AAH)由于組織學(xué)特征不夠典型也給疾病的診斷帶來困擾[1-2]。轉(zhuǎn)化生長因子-α(TGF-α)是一種促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的有效因子,其在機(jī)體中的過度表達(dá)會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。抑癌基因(p53)是重要的抑癌基因,其表達(dá)與腫瘤的分化程度有關(guān)[3]。細(xì)胞核增殖抗原(Ki-67)是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的核蛋白,是細(xì)胞增殖的標(biāo)志基因。上皮鈣黏蛋白(E-cadherin)則會(huì)密切參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程,是一種重要的黏附因子[4]。本研究主要探討肺腺癌組織中TGF-α、p53、Ki-67以及E-cadherin蛋白的表達(dá)水平及其相關(guān)性,現(xiàn)報(bào)道如下:

    1 資料與方法

    1.1 一般資料選擇2018年1月至2020年12月期間在安康市中心醫(yī)院行手術(shù)切除的87例肺腺癌患者的肺部標(biāo)本(觀察組)進(jìn)行研究,并選擇87例肺部腫瘤標(biāo)本的癌旁正常肺組織標(biāo)本作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)兩名病理醫(yī)師聯(lián)合診斷,病理切片確診;②行手術(shù)切除前,患者未服用免疫制劑;③行手術(shù)切除前,患者未進(jìn)行化療或放療;④臨床資料齊全。87例患者中男性19例,女性68例;年齡46~75歲,平均(57.63±8.85)歲;根據(jù)組織病理學(xué)分級(jí)的增高順序進(jìn)行分類[4],其中原位腺癌(AIS)35例,微浸潤性腺癌(MIA)23例,貼壁生長為主的浸潤性腺癌(LPA)29例;腫瘤直徑6~18 cm,平均(8.66±4.02)cm。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

    1.2 檢測方法①試劑:小鼠抗人TGF-α、Ki-67、p53及E-cadherin多克隆抗體(北京中杉金橋公司),DAB顯色液(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)。②檢測方法:本院的專業(yè)人員嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明進(jìn)行所有的檢測操作。應(yīng)用免疫組化MaxVision法檢出標(biāo)本中的p53、TGF-α、Ki-67及E-cadherin的表達(dá)水平。首先用10%的中性緩沖福爾馬林液進(jìn)行標(biāo)本固定,脫水后用石蠟進(jìn)行包埋,用切片機(jī)將石蠟切片4~5μm,行連續(xù)厚切片,磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗,3%過氧化氫甲醇消化內(nèi)源性過氧化物酶,加入血清封閉并滴加生物學(xué)一抗,室溫孵育60 min后經(jīng)PBS清洗,滴加生物學(xué)二抗,再次孵育5 min后經(jīng)PBS清洗和DAB顯色、梯度乙醇脫水,制片封閉。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,鏡下觀察是否為陽性。

    1.3 結(jié)果判定所有的結(jié)果均由兩名病理醫(yī)生獨(dú)立觀察后再取平均值作為最終結(jié)果,若兩者相差較大,則報(bào)上級(jí)醫(yī)師判定。定位標(biāo)準(zhǔn):TGF-α陽性在細(xì)胞質(zhì)定位,p53和Ki-67陽性在細(xì)胞核定位,E-cadherin陽性則在細(xì)胞膜定位。判斷標(biāo)準(zhǔn):陽性判斷需綜合考慮陽性細(xì)胞的染色強(qiáng)度以及切片所觀察細(xì)胞中的陽性細(xì)胞所占的百分比計(jì)分[5],采用半定量判斷法。計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):(1)陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度:細(xì)胞未著色記0分,顯示為淡黃色記1分,棕黃色記2分,黃褐色記3分;(2)陽性細(xì)胞所占百分比:無陽性細(xì)胞記0分,占百分比<25%記1分,26%~50%記2分,51%~75%記3分,>76%記4分。將兩個(gè)分?jǐn)?shù)相乘為最終判定得分,0~3分判定為陰性(-),>3分則判定為陽性(+)。

    1.4 觀察指標(biāo)比較肺腺癌組織標(biāo)本以及正常肺組織標(biāo)本的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達(dá)水平;比較AIS,MIA以及LPA組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達(dá)水平;比較肺腺癌組織中的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman非參數(shù)相關(guān)分析法進(jìn)行。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 肺腺癌組織和正常肺組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達(dá)水平比較相較于正常肺組織,肺腺癌組織的TGF-α、p53及Ki-67陽性率明顯較高,E-cadherin陽性率則明顯較低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 肺腺癌組織和正常肺組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達(dá)水平比較[例(%)]

    2.2 AIS、MIA及LPA組織TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達(dá)水平比較隨著肺腺癌組織病理學(xué)分級(jí)的增高,TGF-α、p53及Ki-67的陽性率升高,E-cadherin的陽性率下降;AIS、MIA及LPA組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin陽性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表2 AIS、MIA及LPA組織的TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin表達(dá)水平比較[例(%)]

    2.3 肺腺癌組織中TGF-α、p53、Ki-67及E-cadherin蛋白表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示,肺腺癌組織中,TGF-α表達(dá)與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)(r=-1.984,P=0.001),p53表達(dá)與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)(r=-2.044,P=0.001),Ki-67表達(dá)與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)(r=-2.320,P=0.000)。

    3 討論

    轉(zhuǎn)化生長因子-α(TGF-α)是一種產(chǎn)生于巨噬細(xì)胞的腫瘤環(huán)境因子。與正常的組織和細(xì)胞相比,腫瘤細(xì)胞中的TGF-α水平明顯較高[5]。據(jù)TGF-α轉(zhuǎn)基因小鼠研究結(jié)果顯示,TGF-α的過度表達(dá)可導(dǎo)致組織中的細(xì)胞增生,還可導(dǎo)致肝腫瘤和乳腺腫瘤。TGF-α的表達(dá)在正常組織、非典型增生以及腺癌組織中呈現(xiàn)增強(qiáng)趨勢,這表明TGF-α能夠促進(jìn)細(xì)胞分化,刺激細(xì)胞癌變[6-7]。我院本次研究的結(jié)果與上述結(jié)論相符,結(jié)果顯示,肺腺癌組織的TGF-α陽性率顯著高于正常肺組織,且隨著肺腺癌組織病理學(xué)分級(jí)的增高,TGF-α蛋白的陽性率呈現(xiàn)升高趨勢。

    在所有惡性腫瘤中,約有50%以上都會(huì)出現(xiàn)p53的突變[8]。由p53編碼的蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)錄因子,控制細(xì)胞周期的啟動(dòng),突變后,細(xì)胞的生長凋亡過程不再受其調(diào)控,細(xì)胞增殖失控,最終導(dǎo)致細(xì)胞惡變[9-10]。本次研究結(jié)果顯示,肺腺癌組織的p53陽性率顯著高于正常肺組織,隨著肺腺癌組織病理學(xué)分級(jí)增高,p53陽性率也升高。這一結(jié)論同時(shí)也可能在提示p53突變能夠促進(jìn)肺腺癌的浸潤發(fā)展過程。

    Ki-67是一種與細(xì)胞增殖有關(guān)的核蛋白,并與核糖體RNA轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)。其不僅在細(xì)胞周期的G1,S,G2和M期均有表達(dá),并且能夠很好地評(píng)估某一細(xì)胞群的增殖比例,因此能夠作為細(xì)胞增殖的標(biāo)志物[11]。國內(nèi)外研究顯示,Ki-67的陽性表達(dá)不僅與前列腺癌、乳腺癌等腫瘤患者的生存期密切相關(guān),還會(huì)影響癌癥的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),陽性率越高,腫瘤生長就越快,機(jī)體的組織分化能力就越差,患者的預(yù)后較差,很難完全治愈[12]。本次研究中,肺腺癌組織的Ki-67陽性率顯著高于正常肺組織,并肺腺癌組織病理學(xué)分級(jí)增高,這一點(diǎn)與Ki-67的增殖隨著腫瘤細(xì)胞的惡性程度增高而增加的臨床結(jié)論也相符合。

    E-cadherin蛋白在保持上皮細(xì)胞間的同質(zhì)黏附方面作用顯著,是一種重要的細(xì)胞黏附因子[13]。有研究發(fā)現(xiàn),E-cadherin蛋白在乳腺癌和胃癌中呈現(xiàn)出低表達(dá)[14-15]。本次結(jié)果顯示,E-cadherin的陽性率隨著組織病理學(xué)分級(jí)的增高而降低,這可能是由于E-cadherin表達(dá)下調(diào)會(huì)降低細(xì)胞間的連接,使得肺上皮細(xì)胞發(fā)生癌變,并且會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞浸潤,引發(fā)病期惡化。本次的相關(guān)性分析則顯示,TGF-α、p53及Ki-67與E-cadherin蛋白之間可能存在共同的細(xì)胞調(diào)控通路,在肺腺癌的發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮共同作用,但確切的共同作用機(jī)制有待新的研究進(jìn)一步證實(shí)。

    綜上所述,TGF-α、p53及Ki-67的表達(dá)上調(diào)與E-cadherin表達(dá)下調(diào)可能通過共同的調(diào)控通路促進(jìn)肺腺癌的發(fā)生和發(fā)展,聯(lián)合診斷該四種蛋白可能有利于肺腺癌的早期確診,并在肺腺癌的分型和預(yù)后方面發(fā)揮作用。本次研究仍存在不足,四種蛋白的聯(lián)合作用機(jī)制仍待更大樣本容量的研究進(jìn)行明確。

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